蘋果青霉病菌在蘋果組織中的分布檢測

張悅麗+張博+田淑慧+戴爭+齊軍山+馬立國+李長松+任鳳山

摘要：為評估蘋果感染青霉病后的食用安全性，本試驗(yàn)檢測了蘋果青霉病菌（Pnicilliumsp.）在蘋果組織中的分布。結(jié)果表明：病斑處青霉菌菌落數(shù)最高，為2800cfu/g；病斑外延1.Ocm處，青霉菌菌落數(shù)為120cfu/g；病斑外延1.5cm處，青霉菌菌落數(shù)為18cfu/g；病斑外延2.0cm處，未檢測到蘋果青霉病菌。

關(guān)鍵詞：蘋果青霉病菌；分布檢測；展青霉素；食品安全

中圖分類號：S436.611.1+9+TS201.6文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2015）04-0103-03

蘋果青霉病又稱水爛病，危害蘋果、梨、葡萄等成熟及近成熟果實(shí)，多發(fā)生在貯藏中后期，從機(jī)械損傷和病蟲害傷口入侵發(fā)病，造成大量爛果，是蘋果貯運(yùn)中最嚴(yán)重的爛果病，塑料袋裝蘋果發(fā)病尤為嚴(yán)重。該病的發(fā)生與貯藏環(huán)境有密切聯(lián)系，溫度高、溫度大發(fā)病較重，反之則輕。國外報(bào)道蘋果青霉病多由展青霉（P.expansum）[1]引起，而國內(nèi)則報(bào)道?，F(xiàn)青霉（P.frequentan）[2]、圓弧青霉（P.cyclopium）和殼青霉（P.crustosum）[3]也可引起。青霉病菌在代謝過程中可產(chǎn)生對植物和動(dòng)物有毒性的次生代謝產(chǎn)物，如擴(kuò)展青霉在侵染果品過程中能產(chǎn)生展青霉素（patulin）。展青霉素又叫棒曲霉毒素，對植物和動(dòng)物具有很強(qiáng)的毒性，可引起人嘔吐、反胃[4]。食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)（JECFA）研究報(bào)告表明，展青霉素對胚胎有毒性，同時(shí)伴隨有母體毒性展青霉素在相當(dāng)大的劑量范圍內(nèi)，可使小鼠大腦、腎臟、肝臟中的DNA鏈破裂，其中大腦是最重要的靶器官[5]。此外，展青霉素對成年哺乳動(dòng)物和胚胎動(dòng)物的腎臟也有毒害作用[6]。展青霉素直接接觸皮膚，可引起DNA損傷，從而造成細(xì)胞周期阻滯和內(nèi)部介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，積累大量具有皮膚毒性的聚胺產(chǎn)物[7].我國相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)[8，9]規(guī)定蘋果山楂等半成品中展青霉素的限量為100μg/kg，且關(guān)于展青霉索的去除及工藝正在進(jìn)一步的研究中[10]。因此，明確青霉菌（Penicilliumsp.）在蘋果組織中的分布情況至關(guān)重要。為了弄清蘋果染青霉病后青霉病菌在蘋果健康組織中的分布情況，進(jìn)行了本試驗(yàn)，以期為其風(fēng)險(xiǎn)情況做出評估。

收稿日期：2014-12-08

基金項(xiàng)目：國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評估重大專項(xiàng)（GJFP2014002）

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試蘋果購自市場罹患青霉病的蘋果，品種為黃金帥。

1.1.2培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1取樣將感染青霉病的蘋果，取病斑處及病斑外延1.0、1.5、2.0cm處蘋果組織，每處各取樣25g，勻漿后備用。

1.2.2培養(yǎng)稱取25g樣品至盛有225mL滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為1：10稀釋液。取1：10稀釋液1mL注入含有9mL無菌水的試管中，另換一支1mL無菌吸管反復(fù)吹吸，此液為1：100稀釋液。依次稀釋。根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（可包括原液），分別取1mL于2個(gè)無菌平皿內(nèi)，同時(shí)取1mL滅菌蒸餾水加入2個(gè)無菌平皿作空白對照。及時(shí)將15～20mL冷卻至46℃的PDA培養(yǎng)基倒入平皿，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置，（28±1）℃培養(yǎng)5d，觀察并記錄。

1.2.3菌落計(jì)數(shù)按照2010年版食品微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)提供的食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌計(jì)數(shù)方法，肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡，選取菌落數(shù)在10～150cfu的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)青霉菌。青霉菌蔓延生長覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。

2結(jié)果與分析

經(jīng)過菌落計(jì)數(shù)，本試驗(yàn)在蘋果青霉病病斑外延1.5cm范圍內(nèi)都檢測到了青霉病菌的存在，病斑外延2.0cm范圍外未檢測到青霉病菌的存在，并確定了適合菌落計(jì)數(shù)的樣品稀釋倍數(shù)。在蘋果青霉病病斑處取樣的最佳稀釋倍數(shù)為1000倍，青霉菌菌落數(shù)為2800cfu/g；病斑外延1.0cm處，最佳稀釋倍數(shù)為100倍，青霉菌菌落數(shù)為120cfu/g；病斑外延1.5cm處，最佳稀釋倍數(shù)為10倍，青霉菌菌落數(shù)為18cfu/g；病斑外延2.0cm處，所有稀釋濃度均無任何菌落生長，對照培養(yǎng)皿中未發(fā)現(xiàn)任何菌落。

3結(jié)論與討論

對蘋果青霉病菌在病果內(nèi)部的分布范圍進(jìn)行檢測，病斑處分離到的青霉菌菌落數(shù)最高，為2800cfu/g；腐爛斑外延1.0cm處，最佳稀釋倍數(shù)為100倍，青霉菌菌落數(shù)為120cfu/g；腐爛斑外延1.5cm處，最佳稀釋倍數(shù)為10倍，青霉菌菌落數(shù)為18cfu/g；病斑外延2.0cm處，所有稀釋濃度均無任何菌落生長。在蘋果青霉病病斑外延2.0cm及以外范圍內(nèi)未檢測到青霉菌，但此范圍內(nèi)是否有毒素存在（包括何種毒素及毒素含量），需要進(jìn)一步的研究。endprint