復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液質(zhì)量分析與評(píng)價(jià)

韓先森

(安徽省肥西縣人民醫(yī)院，安徽肥西 231200)

足癬是常見的皮膚病，是由真菌侵入皮膚所引起的淺部真菌病。該病發(fā)病率高，傳播廣泛，常引起繼發(fā)細(xì)菌感染，且較難痊愈，復(fù)發(fā)率高［1］。復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液為復(fù)方制劑，于2002年上市銷售，已在臨床使用多年，療效確切，深受患者好評(píng)。本品由水楊酸、苯甲酸、紫荊皮、冰醋酸、乙醇(70%)等組成，主要用于足癬，亦用于手足多汗癥［2］。所含苯甲酸、水楊酸、冰醋酸具有抑制真菌、溶解角質(zhì)作用;紫荊皮具有殺蟲、抑菌以及止癢作用［3］。其中水楊酸、苯甲酸這兩種成分與全方藥效密切相關(guān)，是全方主要有效成分，測定其含量對(duì)于復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液的質(zhì)量具有重要的意義［4］;現(xiàn)行藥典中水楊酸、苯甲酸采用的均為酸堿中和滴定;有關(guān)復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液中水楊酸、苯甲酸兩成分的質(zhì)量分析國內(nèi)外未見報(bào)道［5-7］，本文采用UV法和酸堿滴定法測定兩組分含量，可有效避免滴定過程中多組分干擾，方法簡單快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 試藥及來源 復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液(批號(hào):050911、050912、050913，規(guī)格:每支 20 mL):安慶市永生制藥有限公司生產(chǎn)。

市售復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液(批號(hào):051001，規(guī)格:每支20 mL):錦州本天藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

水楊酸對(duì)照品(批號(hào):100106-200303;規(guī)格:100 mg):中國藥品生物制品檢定所提供。

1.2 儀器 TU-1221型紫外分光光度計(jì)(北京通用科學(xué)儀器有限公司);AG135電子天平(METTLER TOLEDO);水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 水楊酸的含量測定 采用紫外分光光度法測定本品中水楊酸的含量［8］，并對(duì)本法進(jìn)行方法學(xué)試驗(yàn)［9］。

2.1.1 最佳檢測波長的選擇 (1)復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液的光譜測定:精密稱取水楊酸對(duì)照品約45 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水約80 mL搖勻后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液2 mL置25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A)測定，最大吸收波長為530 nm，因此選擇在530 nm的波長處測定吸收度(圖1)。

(2)陰性試驗(yàn):精密量取不加入水楊酸的復(fù)方紫荊皮溶液，即陰性對(duì)照溶液1 mL，置500 mL量瓶中，加乙醇20 mL使溶解均勻，加水至刻度，搖勻。取15 mL，置 25 mL 量瓶中，加 0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄ⅣA)測定，在400～700 nm的波長處測定吸收度(圖2)。從譜圖可以看出，陰性對(duì)照在530 nm波長處無吸收，提示處方中其他藥味成分對(duì)測定無干擾。

2.1.2 線性試驗(yàn) 精密稱取水楊酸對(duì)照品45.2 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水約80 mL搖勻后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液1、1.6、2、2.4、3 mL 置 25 mL 量瓶中，加 0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄ⅣA)在530 nm波長處測定吸收度，結(jié)果見表1和圖3。

表1 含量測定線性試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

結(jié)果表明，復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液的水楊酸在18.08 ～54.24 mg·L-1的濃度范圍內(nèi)，其濃度與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

2.1.3 儀器精密度試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液2 mL，置25 mL 量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A)在530 nm波長處測定吸收度，測定6次，計(jì)算。測定結(jié)果分別為 0.431 2、0.430 8、0.431 7、0.431 1、0.430 9、0.430 2，平均為 0.431 0，RSD 為 0.12%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.1.4 測定溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取本品1 mL，置500 mL量瓶中，加乙醇20 mL使溶解均勻，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液15 mL，置 25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，分別放置 0、1、2、4、8、12、24 h 后，測定其吸收度，結(jié)果分別為 0.430 2、0.430 9、0.430 0、0.431 2、0.429 6、0.430 5、0.429 1，平均為0.430 3，RSD為0.21%。試驗(yàn)結(jié)果表明，本品的水溶液室溫放置24 h基本穩(wěn)定。

2.1.5 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量(批號(hào):050810，含量:99.8%)復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液1 mL，共9 份，稱取水楊酸對(duì)照品約 24、30、36 mg，各3份，分別置500 mL量瓶中;加乙醇20 mL使溶解均勻，加水至刻度，搖勻。精密量取供試品溶液15 mL，分別置50 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2005版二部附錄IV A)，在波長530 nm處測定吸收度，精密稱取水楊酸對(duì)照品約45 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水約80 mL搖勻后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，精密量取對(duì)照品溶液2 mL置25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，同法操作，在波長530 nm處測定吸收度，計(jì)算，測定結(jié)果見表2。

表2 含量測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

從結(jié)果可以看出，本試驗(yàn)水楊酸回收率在98.5% ～101.0%之間，RSD 均小于 1.0%。說明輔料對(duì)檢測結(jié)果無影響。

2.1.6 樣品含量測定 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取水楊酸對(duì)照品約45 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇10 mL溶解，再加水約80 mL搖勻后，加冰醋酸0.1 mL，加水至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備:精密量取本品1 mL，置500 mL量瓶中，加乙醇20 mL使溶解均勻，加水至刻度，搖勻。

測定法:精密量取對(duì)照品溶液2 mL與供試品溶液15 mL，分別置25 mL量瓶中，加0.01 mol·L-1鹽酸液1 mL和5%硝酸鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄IV A)，在波長530 nm處測定，計(jì)算。本品三批樣品及市售對(duì)照樣品檢驗(yàn)結(jié)果見表3。

2.2 苯甲酸的含量測定 采用酸堿滴定法測定本品中苯甲酸的含量，并對(duì)本法進(jìn)行方法學(xué)試驗(yàn)。

2.2.1 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取苯甲酸約80、100、120 mg，各3份，置燒杯中，分別按比例加入處方中其他原、輔料，于室溫流通空氣中揮發(fā)除去乙醇后，置裝有五氧化二磷的干燥器中12 h以上，取出，加中性稀乙醇50 mL溶解后，加酚酞指示液3～5滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1 mol·L-1)滴定，按下式計(jì)算。每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1 mol·L-1)相當(dāng)于12.21 mg的 C7H6O2。計(jì)算其回收率。見表4。

F—?dú)溲趸c滴定液(0.1 mol·L-1)的標(biāo)定校正值;V—消耗氫氧化鈉滴定液(0.1 mol·L-1)的毫升數(shù);W—分光光度法測得的每1 mL供試品中水楊酸的量(mg)。

從結(jié)果可以看出，本試驗(yàn)苯甲酸回收率在98.5% ～101.5%之間，RSD 均小于 2.0%。說明輔料對(duì)檢測結(jié)果無影響。

表3 復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液含量測定結(jié)果

表4 苯甲酸含量測定回收率試驗(yàn)

2.2.2 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取本品2 mL，置燒杯中，于室溫流通空氣中揮發(fā)除去乙醇后，置裝有五氧化二磷的干燥器中12 h以上，取出，加中性稀乙醇50 mL溶解后，加酚酞指示液3～5滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1 mol·L-1)滴定，按公式計(jì)算。每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1 mol·L-1)相當(dāng)于12.21 mg的C7H6O2，重復(fù)測定6次。結(jié)果每次滴定液消耗量分別為 12.29、12.38、12.19、12.31、12.42、12.11 mL，RSD為0.95%。結(jié)果表明精密度試驗(yàn)良好。

2.2.3 樣品的含量測定 精密量取本品2 mL，置燒杯中，于室溫流通空氣中揮發(fā)除去乙醇后，置裝有五氧化二磷的干燥器中12 h以上，取出，加中性稀乙醇50 mL溶解后，加酚酞指示液3～5滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1 mol·L-1)滴定，按公式計(jì)算。每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1mol·L-1)相當(dāng)于12.21 mg的C7H6O2。本品三批樣品及市售對(duì)照樣品檢驗(yàn)結(jié)果分別為 101.7%、100.8%、99.9%、98.6%。

3 討論

目前臨床上治療足癬、手足多汗癥的藥品種類繁多，復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液為我院常年銷售品種，集傳統(tǒng)中藥與現(xiàn)代醫(yī)藥，復(fù)方而成，充分發(fā)揮中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)藥優(yōu)勢，臨床療效顯著，價(jià)格低廉，在廣大足癬、手足多汗癥患者有著良好的口碑。

本試驗(yàn)采用紫外分光光度法測定復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液中水楊酸含量，以530 nm為測定波長，靈敏度高，準(zhǔn)確性和精密度好，操作簡便，陰性空白樣品溶液與溶劑無干擾，回收率高?？捎糜趶?fù)方紫荊皮水楊酸溶液的質(zhì)量控制。與其它光譜分析方法相比，其儀器設(shè)備和操作都比較簡單，費(fèi)用少，分析速度快;靈敏度高，選擇性好;精確度與準(zhǔn)確度好，用途廣泛。

采用酸堿中和滴定法測定復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液中苯甲酸含量，避免了樣品中水楊酸干擾，試劑和器材廉價(jià)易得，相對(duì)而言，兩種方法都是比較經(jīng)典的分析方法，特別適合基層及實(shí)驗(yàn)條件欠缺的地區(qū)藥學(xué)工作者使用。

綜上所述，采用紫外分光光度法及酸堿中和滴定法測定復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液中兩組分含量取得較好的結(jié)果。但本實(shí)驗(yàn)受限于基層檢測條件、啟動(dòng)資金等客觀因素，所采用的儀器精密度和準(zhǔn)確度相比時(shí)下流行的高效液相色譜法(HPLC法)存在一定的差距，檢測指標(biāo)有限，更大規(guī)模、高精密的實(shí)驗(yàn)研究將為復(fù)方紫荊皮水楊酸溶液中有效成分測定提供更為有力的客觀支持。

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