2014-2015年紅島地區(qū)水貂阿留申病的流行病學(xué)調(diào)查研究

戚永娜 楊瑞梅* （青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 山東 青島 266109）

調(diào)查報告

2014-2015年紅島地區(qū)水貂阿留申病的流行病學(xué)調(diào)查研究

戚永娜 楊瑞梅* （青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 山東 青島 266109）

為了解2014～2015年山東省青島市紅島地區(qū)水貂阿留申病的流行情況和發(fā)病率，對紅島地區(qū)某水貂養(yǎng)殖場里的部分水貂采用剪腳趾的方法進(jìn)行了血清取樣，并分別采用碘凝集和對流免疫電泳兩種試驗方法進(jìn)行血清學(xué)檢測，進(jìn)而總結(jié)紅島地區(qū)水貂阿留申病的發(fā)病率與流行狀況。結(jié)果顯示，紅島地區(qū)阿留申病的陽性檢出率為63.33%以上，表明紅島地區(qū)水貂阿留申病的流行情況較為嚴(yán)重。

水貂阿留申病(Aleutian mink disease，AMD)是由細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒屬的阿留申病毒引起的一種慢性進(jìn)行性傳染病[1]。不同年齡階段的水貂患阿留申病可表現(xiàn)出不同的病癥，成年水貂感染阿留申病毒后，表現(xiàn)出典型的水貂阿留申病，以體內(nèi)漿細(xì)胞增多，產(chǎn)生大量的γ球蛋白，持續(xù)性的毒血癥及由免疫復(fù)合物沉積引發(fā)的嚴(yán)重腎小球炎等為主要癥狀[2]，臨床上主要表現(xiàn)為冬季消瘦、產(chǎn)仔量降低、死胎、流產(chǎn)。而新生幼貂感染該病后病毒大量繁殖于病貂體內(nèi)的肺泡Ⅱ型細(xì)胞，臨床癥狀會出現(xiàn)急性致死性的間質(zhì)性肺炎。不同的急、慢病癥在有些水貂中的表現(xiàn)輕微或某些水貂感染阿留申病毒后不出現(xiàn)明顯感染癥狀的情況[3]。針對水貂阿留申病而言，目前還沒有研制出有效的疫苗，所以該病主要依賴于嚴(yán)格檢疫、淘汰病貂、斷絕疫源來實現(xiàn)貂場凈化。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）45日齡左右幼貂的待檢血清樣品30個。（2）試劑：碘試劑、10.3g巴比妥、1.84g巴比妥鈉、水貂阿留申病毒抗原和標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、1000ml蒸餾水、1.0g瓊脂糖粉（3）儀器：載玻片、100ml錐形瓶、玻璃棒、高速離心機(jī)、電泳儀、100ml量筒、微量可調(diào)加樣器、加樣頭、記號筆、打孔器、針頭、打孔樣紙、離心管、紗布、電子天平、電熱爐、1000ml的燒杯、500ml的量筒、恒溫水浴鍋

1.2 方法

1.2.1 水貂血樣的采集 對紅島地區(qū)某水貂養(yǎng)殖場的水貂采用剪腳趾的方法進(jìn)行取血，將采取的血樣滴到離心管中并做上標(biāo)記，放置于離心管架上。分別在室溫和4℃環(huán)境中，靜止放置2h，使血樣自然分層。

1.2.2 血樣離心 將分層的血樣在4000r/min下離心5min，取出離心管，將其上層血清用微量可調(diào)加樣器吸出，放入新的離心管中，做上相應(yīng)的標(biāo)記。若有未離心好的血清，則再進(jìn)行一次離心。

1.2.3 碘凝集試驗 取一張擦拭干凈的載玻片，用微量可調(diào)加樣器吸取一定量離心好的血清，滴到載玻片上，再滴加等量的碘試劑，用槍頭混勻。然后，觀察試驗結(jié)果。對30個血樣結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計。

1.2.4 對流免疫電泳試驗 （1）巴比妥緩沖液的制備：提前將恒溫水浴鍋調(diào)到80℃左右，用電子天平稱取巴比妥10.3g，巴比妥鈉1.84g，用量筒量取1000ml的蒸餾水置燒杯中，然后依次加入巴比妥、巴比妥鈉，再將燒杯放到水浴鍋中，并用玻璃棒不斷地攪拌，直至其全部溶解。測其pH值至8.6左右即可。（2）瓊脂凝膠的制備：用電子天平稱取1.0g的瓊脂糖粉，再用量筒量取100ml剛制備好的巴比妥緩沖液，將稱取好的瓊脂糖粉加入到量取好的巴比妥緩沖液中，放到電熱爐上加熱至瓊脂糖粉溶解完全即可。（3）倒板：用微量可調(diào)加樣器吸取剛制備好的瓊脂糖粉溶液滴到水平放置擦拭干凈的載玻片上，滴加到厚度大約為3mm左右，靜置一段時間，待溶液凝固，形成瓊脂凝膠版。（4）打孔：將倒好的瓊脂凝膠板放在打孔模板上進(jìn)行打孔，每孔間距3～4mm，將打完孔的瓊脂凝膠板進(jìn)行封底，將瓊脂凝膠板放在酒精燈火焰的上方來回的移動，待其溫度放在手背上稍微有點(diǎn)燙即可停止，冷卻至室溫便可加樣。（5）加樣：對打完孔的瓊脂凝膠板編號，并標(biāo)上正負(fù)極，左邊為正極，右邊為負(fù)極，按編排好的序號從左邊依次加樣，正極加待檢血清和標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，負(fù)極加水貂阿留申病毒抗原，均為15μl。每塊凝膠板均設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽性血清作對照。（6）電泳：將兩側(cè)的電泳槽內(nèi)加入適量的巴比妥緩沖液，把凝膠板放在中間，用紗布作為連接電流的導(dǎo)體，將紗布放在巴比妥緩沖液中浸濕后，一側(cè)浸在電泳槽的緩沖液中，一側(cè)與凝膠板連接。兩個電泳槽均是這樣。將電泳儀的電壓調(diào)至90V，時間40min左右。最后，關(guān)閉電源，取出凝膠板，面向陽光或日光燈觀察沉淀線，進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 碘凝集試驗結(jié)果

結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性：兩液混合后，出現(xiàn)明顯片狀或顆粒沉淀物為陽性(包括++++，+++，++，+)。出現(xiàn)大的凝集塊、液體完全透明，即100%凝集，用“++++”表示；有明顯凝集塊、液體幾乎完全透明，即75%凝集，用“+++”表示；有可見凝集片、液體不甚透明，即50%凝集，用“++”表示；液體混濁、有小的顆粒狀物，即25%凝集，用“+”表示；液體均勻混濁、無凝集物，用“－”表示[4]。對待檢血清進(jìn)行碘凝集后的試驗結(jié)果：30個樣品血清均為“－”。

2.2 對流免疫電泳試驗結(jié)果

見附表。

附表 30個血清對流免疫電泳結(jié)果

對流免疫電泳結(jié)果表明：紅島地區(qū)的水貂阿留申病的陽性率為63.33%，該地區(qū)的水貂阿留申病感染率達(dá)50%以上。

3 討論

3.1 碘凝集試驗與對流免疫電泳結(jié)果比較

本次試驗中，碘凝集試驗的結(jié)果是待檢血清全部為陰性，而對流免疫電泳試驗的結(jié)果是待檢血清的陽性率為63.33%，二者差異懸殊，其原因有：（1）碘凝集是針對血清中的免疫球蛋白進(jìn)行凝集，此次調(diào)查的是45日齡左右的幼貂，體內(nèi)抗體含量低，因此結(jié)果不明顯；（2）對流免疫電泳具有較強(qiáng)的特異性和敏感性，因此出現(xiàn)了大量陽性。（3）另外也表明雖然碘凝集試驗簡便易行，對試驗條件的要求低，但與對流免疫電泳試驗相比，其在診斷水貂阿留申病中由于特異性和敏感性都要低于對流免疫電泳試驗，所以碘凝集的試驗結(jié)果不如對流免疫電泳的試驗結(jié)果準(zhǔn)確。

3.2 水貂阿留申病的流行現(xiàn)狀

AMD廣泛流行于世界各養(yǎng)貂國家，我國各地水貂飼養(yǎng)場也普遍流行。本病主要傳染源是病貂和潛伏期病貂。其潛伏期平均為2～3個月，長的可達(dá)7～9個月甚至1年以上[5]?，F(xiàn)今情況下，水貂阿留申病還未能引起養(yǎng)殖戶的足夠重視，對水貂的檢疫力度不夠，對陽性貂沒有及時的淘汰，致使病毒通過體液和排泄物傳到體外，污染了貂場的環(huán)境，導(dǎo)致貂群整體的感染率逐年升高，從而引起該病大面積的流行[6]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國主要養(yǎng)貂地區(qū)有70%以上的飼養(yǎng)場不同程度地感染該病，感染率約在10%～60%不等[7]。2009～2010年，張彥龍等[8]從我國3個獨(dú)立的貂場共收集18654份水貂血清樣本。結(jié)果顯示總體陽性率分別為為94.59%和68.67%，表明我國水貂養(yǎng)殖業(yè)的阿留申病毒感染率仍然居高不下。本次調(diào)查結(jié)果顯示水貂阿留申病的陽性率為63.33%，則表明紅島地區(qū)的水貂阿留申病較為嚴(yán)重。

3.3 水貂阿留申病的防治措施

目前還未研制出有效的疫苗，所以最根本而有效的清除阿留申病的方法只能靠準(zhǔn)確的診斷和即時撲殺病貂，在打皮時撲殺陽性(病)貂[9]。如條件限制不能殺死全部的病貂時，可先撲殺患重病的貂，將病輕和陰性(健康)的貂，分群隔離飼養(yǎng)，逐步淘汰，條件允許時再打皮，就可達(dá)到逐步凈化貂群的目的，使貂場變成無阿留申病的貂場[10]。故控制本病僅能依賴于嚴(yán)格檢疫、淘汰病貂、斷絕疫源來實現(xiàn)貂場凈化。

[1] 馮貴娟. 水貂阿留申病流行特點(diǎn)及防治技術(shù)[J]. 山東畜牧獸醫(yī), 2012, 8: 71.

[2] 徐鳳宇, 王樹志. 水貂阿留申病概述[J]. 經(jīng)濟(jì)動物學(xué)報, 2006, 2: 106-111.

[3] 黃永凱, 周煜, 孔德軍. 水貂阿留申病[J]. 云南畜牧獸醫(yī), 2006, 5: 41.

[4] 姚彬, 杜杰, 劉倩宏. 水貂阿留申病碘凝集反應(yīng)與對流免疫電泳對比試驗[J]. 吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院學(xué)報, 2014, 2: 14-16.

[5] 周春鳳, 張志亭. 水貂阿留申病的診治[J]. 養(yǎng)殖技術(shù)顧問, 2008, 2: 50.

[6] 陳超然, 溫建新. 威海某地區(qū)水貂阿留申病的診斷與調(diào)查[J]. 天津農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 4: 17-20.

[7] 張春艷, 林明敏, 宮彥超. 水貂的阿留申病及其防控[J]. 山東畜牧獸醫(yī), 2013, 7: 62-63.

[8] 桑宇. 水貂阿留申病流行病學(xué)調(diào)查[D]. 東北林業(yè)大學(xué), 2012.

[9] 李玉梅. 水貂阿留申病的診斷與防治[J]. 吉林畜牧獸醫(yī), 2007, 4: 48-49.

[10] 宋月峰, 宋曉東, 王曉龍. 水貂阿留申病的防治[J]. 中國動物保健, 2013, 4: 69-70.

S858.92

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1007-1733(2015)12-0042-02

2015–10–09）

*通訊作者