李玉杰 孔祥華 張 月 孫圣福 王士榮 劉麗萍 陳 靜(山東省動物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟南 250022)
2014年下半年山東省部分規(guī)模豬場疫病監(jiān)測與剖析
李玉杰 孔祥華 張 月 孫圣福 王士榮 劉麗萍 陳 靜*(山東省動物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟南 250022)
為了查清山東省下半年幾種豬病的流行情況,山東省動物疫控中心采用RT-PCR和PCR的方法對2014年7~12月期間部分豬場送檢的100份病料進行豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬偽狂犬病毒(PRV)病原檢測和分析。結(jié)果表明,病原多重感染的危害越來越突出,以PRRSV+PCV2(48%)的組合最為常見。從豬腹瀉的病例中檢出PCV-2和PRRSV感染是主要原因,再次證明PRRSV和PCV-2是危害我省養(yǎng)豬業(yè)的頭號疫病病原。實驗還顯示不同規(guī)模豬場存在的主要病原沒有很大差別。
近幾年來,本省養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展較為平穩(wěn),但仍然會受到疫病的困擾,使得豬群的發(fā)病率和死亡率居高,造成嚴重的經(jīng)濟損失。豬病毒性疾病危害尤為嚴重,臨床表現(xiàn)越來越復(fù)雜,典型病例明顯減少,而且混合感染和繼發(fā)感染增多,必須依靠實驗室診斷才能確診(楊漢春,2011;呂超超,2011等;孫志華,2012;張志,2012)。據(jù)報道,豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)和豬偽狂犬病毒(PRV)病是當(dāng)前危害我國養(yǎng)豬業(yè)的4種重要疫病(楊漢春,2014)。為了查清此4種疫病在下半年本省豬場的流行情況,本中心采用RT-PCR和PCR的方法對部分豬場送檢的病料進行病原檢測和分析,了解感染情況和流行現(xiàn)狀,從而為防控該病提供可靠依據(jù)。
1.1 材料 于2014年7~12月期間,采自山東省濟南、德州、煙臺、臨沂、濱州、淄博和濟寧7個地市的10個發(fā)病豬場豬的肺臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)和扁桃體等100份組織樣品。
1.2 主要試劑 Prime Script One Step RT-PCR kit Ver. 2、RNA抽提試劑TRIzol、Gel Extraction Mini Kit、DL2000 DNA Maker 均購自TaKaRa公司。
1.3 樣品處理 取凍存(短期-20℃、長期-70℃)的疑似發(fā)病豬病變實質(zhì)臟器(肺臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)和扁桃體等)解凍至軟凍狀態(tài),取5~10g置于研缽中充分研磨,加入pH7.2的PBS制成組織勻漿,8000r/min離心5min,取上清置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 檢測方法 PRRSV、PEDV、PCV2和PRV的檢測分別按照實驗室建立的RT-PCR和PCR方法進行,4種病毒的引物分別來自O(shè)RF7編碼區(qū)、M蛋白編碼區(qū)、ORF2編碼區(qū)和gD蛋白編碼區(qū)。
2.1 4種病毒的陽性率 100份病料中PRRSV、PEDV、PCV2和PRV的陽性率分別為72%、4%、80%和8%,全部樣品被檢出至少攜帶一種病毒。同時檢出2種及2種以上病毒樣品有56份,占檢測樣品總數(shù)的56%。以PRRSV和PCV2共存的現(xiàn)象最多,占被檢樣品總數(shù)的48%,也有個別樣品被檢出PRRSV和PEDV共存,PRRSV、PRV和PCV2共存(表1)。
表1 同時檢出2種及以上病毒的組合形式及比率 (%)
2.2 無腹瀉癥狀豬的病原檢測分析 100頭疑似病豬中不存在腹瀉癥狀,但伴有喘、呼吸困難、體溫升高等有36頭,PRRSV的檢測為全陽性,36頭病豬均攜帶藍耳病毒,其次是PCV-2,占89%,PEDV與PRV檢測為全陰性(表2)。
表2 不同臨床癥狀豬的各種病毒陽性率 (%)
2.3 有腹瀉癥狀豬的病原檢測分析 100頭疑似病豬中存在腹瀉癥狀有64頭,PCV2的陽性率最高,占75%,其次是PRRSV,占56%,PEDV與PRV檢出率較低,分別是6%和12%(表2)。
2.4 不同規(guī)模豬場病原檢測分析 10個規(guī)模豬場母豬現(xiàn)存欄量100以內(nèi)有2個,PRRSV的陽性率為100%,PCV2的陽性檢出率為40%,PRV的陽性檢出率為20%,沒有檢測出PEDV病原。母豬現(xiàn)存欄量100~200的有6個,PRRSV的陽性率為53%,PCV2的陽性檢出率為87%,PEDV與PRV檢測顯示病原陽性率均為7%。母豬存欄量200以上的大型豬場有2個,檢測結(jié)果顯示均為PRRSV和PCV2混合感染(表3)。
表3 不同規(guī)模豬場各種病毒陽性率 (%)
近幾年農(nóng)業(yè)部發(fā)布的全國疫情通報可知在多重感染的疾病中,80%是病毒病,藍耳病、圓環(huán)病毒病、偽狂犬病、豬瘟等仍為常見多發(fā)病。目前病毒性疾病的治療仍缺乏有效藥物,且一些危害嚴重的病毒變異加劇,使得傳統(tǒng)疫苗失去了有效保護作用,養(yǎng)豬業(yè)面臨著疫病威脅將更加嚴峻。(1)本研究發(fā)現(xiàn)病原多重感染的危害越來越突出,檢測結(jié)果顯示病料中檢出2種或2種以上病原的樣品為60%,其中以PRRSV+PCV2(48%)的組合最為常見。多種病原的混合感染和繼發(fā)感染不但造成誤診,給防治帶來困難,而且造成高發(fā)病率和死亡率。本研究通過病原檢測發(fā)現(xiàn),無論有無腹瀉癥狀PRRSV與PCV-2的陽性率都很高,這表明PRRSV和PCV-2是危害我省養(yǎng)豬業(yè)的頭號疫病病原。我國PRRSV毒株呈多樣化趨勢,不同病毒株之間的重組不斷加劇,而且現(xiàn)用的活疫苗毒株與流行毒株之間也會發(fā)生重組。加上藍耳病活疫苗的濫用,創(chuàng)造了更廣闊的重組空間,使得毒株的變異趨勢不可預(yù)測,加重了該病的復(fù)雜性和控制難度。無論是小型及散養(yǎng)豬場,還是大型豬場,藍耳病病毒居高不下,這表明藍耳病成為嚴重影響本省養(yǎng)豬生產(chǎn)的第一大疫病,因此豬場應(yīng)以控制病毒感染為首要任務(wù)。圓環(huán)病毒2型感染率較高,不少豬場出現(xiàn)典型的斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)和皮炎與腎病綜合征(PDNS),在豬病中的地位日益凸顯。PRRSV和PCV2均可造成細胞免疫和體液免疫抑制,破壞機體的免疫系統(tǒng),導(dǎo)致豬群抗病能力大大減弱,給養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失。建議豬場在切實做好生物安全措施、衛(wèi)生消毒的基礎(chǔ)上,對豬群加強監(jiān)測,摸清感染底數(shù)和免疫效果,實施科學(xué)、有效的免疫接種,必要時適當(dāng)增加疫苗的免疫劑量(衛(wèi)秀余,2012;穆永攀,2014;楊漢春,2015)。(2)豬腹瀉是導(dǎo)致仔豬成活率不高并對養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展造成嚴重危害的重要因素之一。100頭疑似病豬中存在腹瀉癥狀占64%,,其它臨床癥狀伴有喘、呼吸困難、體溫升高等。結(jié)果顯示,有腹瀉癥狀病豬中PCV-2與PRRSV的陽性率很高,分別達到75%、56%,無腹瀉癥狀的病豬中也檢出了PEDV與PRV病原,但檢出率都較低。這表明PCV-2和PRRSV感染是引發(fā)豬腹瀉的主要原因。
本研究通過對10個規(guī)模豬場100疑似豬病樣品進行檢測,發(fā)現(xiàn)PRRSV和PCV-2是主要的感染源,且混合感染嚴重,個別存在PEDV和PRV病原感染,且不同發(fā)病狀況的主要病原差異不明顯,不同規(guī)模豬場存在的主要病原也沒有很大差別。綜上結(jié)果為當(dāng)前本省豬病流行狀況提供了參考資料,從而為防控提供可靠依據(jù)。
[1] 楊漢春. 2010年豬病流行情況與2011年流行趨勢及防控對策[J]. 豬業(yè)科學(xué), 2011, 28(1): 47-48.
[2] 呂超超, 焦連國, 張金雙等. 2010年上半年11省市規(guī)模豬場疫病監(jiān)測與剖析[J]. 中國畜牧獸醫(yī), 2011, 38(2): 165-167.
[3] 孫志華. 當(dāng)前豬病的發(fā)病特點及綜合防治措施[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2012(4): 346-347
[4] 張志, 劉爽, 吳發(fā)興等. 2011年我國豬病流行特征分析[J]. 豬業(yè)科學(xué), 2012, 29(2): 52-53.
[5] 楊漢春. 2013年豬病流行情況與2014年流行趨勢及防控對策[J].豬業(yè)科學(xué), 2014(2): 42-43.
[6] 衛(wèi)秀余. 三大豬病的防控現(xiàn)狀及未來豬病動向[J]. 今日養(yǎng)豬業(yè), 2012(5): 16.
[7] 穆永攀. 當(dāng)前農(nóng)村豬病流行特點、豬病防制存在的問題和對應(yīng)措施[J]. 畜禽業(yè), 2014, 301(5): 12-13.
[8] 楊漢春. 2014年豬病流行情況與2015年流行趨勢及防控對策[J].豬業(yè)科學(xué), 2015, 32(2): 38-40.
S858.28
A
1007-1733(2015)12-0044-02
2015–10–21)
*通訊作者