草酸鈉－氟化鈉采血管中血樣離心前放置時(shí)間對(duì)血漿葡萄糖測(cè)定的影響

張吟眉，王 京，李國(guó)權(quán)

（北京大學(xué)第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京海淀 100191）

血糖測(cè)定是臨床生化檢驗(yàn)的常見(jiàn)項(xiàng)目，其準(zhǔn)確性在判斷患者是否有糖代謝疾病中起到重要作用。在臨床工作中，其測(cè)定結(jié)果受樣本采集和保存方法的影響較大。為了防止血液抽取后因血細(xì)胞進(jìn)行糖酵解而導(dǎo)致葡萄糖濃度下降，《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［1］推薦使用草酸鹽＋氟化鈉作為血糖測(cè)定的抗凝劑進(jìn)行葡萄糖測(cè)定實(shí)驗(yàn)。但在實(shí)際臨床操作中，大部分患者的血液標(biāo)本要在采集后1～2h后才能完成測(cè)定。為驗(yàn)證草酸鹽－氟化鈉采血管中血樣離心前放置時(shí)間對(duì)血漿葡萄糖測(cè)定結(jié)果是否會(huì)產(chǎn)生影響，本文對(duì)102例志愿者含氟化鈉采血管中的血樣分別放置不同時(shí)間進(jìn)行血糖測(cè)定，并與帶促凝劑分離膠采血管中血樣的血糖測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)到如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 真空采血管 積水創(chuàng)格草酸鈉－氟化鈉真空采血管（批號(hào)：111129）和積水創(chuàng)格帶促凝劑分離膠真空采血管（批號(hào)：111217）。

1.1.2 儀器與試劑 葡萄糖測(cè)定儀器為Olympus AU5400全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)試劑為北京中生北控公司葡萄糖測(cè)定試劑盒，測(cè)定方法為己糖激酶法。

1.1.3 校準(zhǔn)品 葡萄糖測(cè)定校準(zhǔn)品為Roche校準(zhǔn)品，批號(hào)：159109-01。

1.1.4 室內(nèi)質(zhì)控品 葡萄糖室內(nèi)質(zhì)控為Bio-Rad生化質(zhì)控品，批號(hào)：45601、45602、45603。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 樣本來(lái)自102例志愿者，用真空采血技術(shù)采集靜脈血，每1份樣本分別置于4管帶促凝劑分離膠采血管和4管草酸鈉－氟化鈉真空采血管中。帶促凝劑真空采血管待血液完全凝固后3 000r／min離心10min，分別放置0、30、60、120min后測(cè)定血漿葡萄糖濃度。草酸鈉－氟化鈉真空采血管在采血后，1管3 000r／min離心10min離心即刻分離血漿，其他3管分別放置30、60、120min后，3 000r／min離心10min測(cè)定血漿葡萄糖濃度。

1.2.2 葡萄糖濃度測(cè)定 用OlympusAU5400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定葡萄糖濃度。

1.2.3 質(zhì)控 當(dāng)天標(biāo)本測(cè)定前，進(jìn)行質(zhì)控品的測(cè)定，結(jié)果在控時(shí)，再進(jìn)行樣本的測(cè)定，同時(shí)加帶質(zhì)控品，兩次結(jié)果均在控視為當(dāng)天樣本測(cè)定結(jié)果有效。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，統(tǒng)計(jì)采用SPSS 17.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及配對(duì)t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1.1 草酸鈉－氟化鈉采血管在放置0、30、60、120min后離心與帶促凝劑分離膠采血管的測(cè)定結(jié)果比較含氟化鈉采血管和分離膠采血管在放置0、30、60、120min后血糖的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

氟化鈉采血管采血后放置0min和30min測(cè)定的葡萄糖濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；放置30min和60min血糖濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；放置60min和120min血糖濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；帶促凝劑真空采血管中血樣放置0min和30min，30min和60min，60min和120 min血糖濃度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 氟化鈉采血管在放置0、30、60、120min后離心與帶促凝劑分離膠采血管的血糖測(cè)定結(jié)果（x±s）

含氟化鈉采血管和帶促凝劑分離膠采血管血糖濃度的下降幅度在0～30min，60～120min兩個(gè)時(shí)間段差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，30～60min時(shí)間段差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 氟化鈉采血管在放置0、30、60、120min后離心與帶促凝劑分離膠采血管的血糖下降幅度比較（x±s）

2.1.2 氟化鈉采血管中血樣在放置后鏡下紅細(xì)胞發(fā)生皺縮，其皺縮的程度隨著放置時(shí)間增加而增大。

圖1 氟化鈉采血管采血后放置0、30、60、120min后離心顯微鏡下血細(xì)胞形態(tài)

3 討 論

血液葡萄糖測(cè)定是檢驗(yàn)科的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，是檢查有無(wú)糖代謝紊亂的重要指標(biāo)，血液葡萄糖檢測(cè)的方法學(xué)已經(jīng)比較成熟，但有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，不同血液標(biāo)本的處理方法對(duì)葡萄糖測(cè)定結(jié)果有一定的影響［2］。

在臨床檢測(cè)過(guò)程中，由于紅細(xì)胞糖酵解作用的存在，全血在室溫下放置，血液葡萄糖濃度每小時(shí)可下降5%～7%［3］。氟化鈉采血管因可以抑制糖酵解的稀醇化酶，有效阻止葡萄糖的分解，是《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦使用的葡萄糖測(cè)定采血管。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，抽血后即刻離心的草酸鹽－氟化鈉抗凝血漿放置96h內(nèi)血液葡萄糖測(cè)定結(jié)果基本不發(fā)生變化。所以在現(xiàn)在臨床實(shí)際應(yīng)用，尤其是口服葡萄糖耐量試驗(yàn)中，大量采用草酸鹽－氟化鈉采血管進(jìn)行血糖測(cè)定［4］。

但在實(shí)際工作中，因?yàn)槌蛛x膠以外，其他采血管均無(wú)法在離心后運(yùn)送，所以必須待血樣從采血室送到檢驗(yàn)科才能進(jìn)行分離，故很難在短時(shí)間（30min內(nèi)）對(duì)樣本離心并分離出血漿。本次實(shí)驗(yàn)研究了離心前放置時(shí)間是否會(huì)對(duì)葡萄糖測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響，結(jié)論是草酸鈉－氟化鈉采血管中血樣離心前放置時(shí)間增加會(huì)導(dǎo)致葡萄糖濃度測(cè)定值降低。

在此前的文獻(xiàn)報(bào)道中，普遍認(rèn)為氟化鈉可以作為血糖測(cè)定的理想血糖保護(hù)劑。但以前有關(guān)氟化鈉采血管中葡萄糖濃度的檢測(cè)的研究基本都是基于采血后即刻離心分離血漿而進(jìn)行的，因而忽略了臨床中經(jīng)常出現(xiàn)的因?yàn)榉胖枚鴮?dǎo)致的測(cè)定值變化的情況。已有文獻(xiàn)報(bào)道，含氟化鈉采血管中樣本如不能及時(shí)分離血漿，其葡萄糖濃度在采血后第2小時(shí)就會(huì)開(kāi)始下降［5］。在臨床工作中，多數(shù)標(biāo)本難以在抽血后30min內(nèi)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，除帶促凝劑分離膠采血管外，其他采血管如果標(biāo)本在抽血后立刻離心，都會(huì)影響標(biāo)本的運(yùn)送，所以絕大多數(shù)氟化鈉采血管在離心分離血漿之前已經(jīng)放置了30min以上，對(duì)所測(cè)定的葡萄糖濃度已經(jīng)產(chǎn)生了一定程度的影響。因此如果采用氟化鈉采血管進(jìn)行葡萄糖濃度測(cè)定，應(yīng)在盡快在測(cè)定前離心分離血漿。但在日常工作中由于樣本量大、轉(zhuǎn)運(yùn)費(fèi)時(shí)等問(wèn)題，往往難以及時(shí)完成每份樣本的離心和檢測(cè)，帶促凝劑采血管為此提供了較好的解決方法，帶促凝劑采血管因促凝劑（如硅土）涂布在試管壁外，可使血液凝固時(shí)間縮短到15min以下，減少了血液離體后葡萄糖的分解，并且在離心過(guò)程中，固化形成屏障隔離層，使細(xì)胞與血清完全分離，保證血清成分不受細(xì)胞成分影響，且在冷藏狀態(tài)下48h內(nèi)隔離層無(wú)明顯改變［6］。這樣就會(huì)消除由于血細(xì)胞成分釋放造成的對(duì)于檢測(cè)指標(biāo)的影響，從而可以一定程度的抑制糖酵解導(dǎo)致的葡萄糖濃度降低。因此如果血液抽取后如果不能及時(shí)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，可以采用帶促凝劑采血管采血隨后離心分離血清，以減少放置時(shí)間對(duì)葡萄糖檢測(cè)結(jié)果的影響。

［1］ 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006.170-171.

［2］ 王龍武，葛雅娟，王妹芳，等.血液標(biāo)本處理方法對(duì)血液葡萄糖測(cè)定結(jié)果的影響［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2007，22（6）：718-719.

［3］ 池勝英，袁謙.氟化鈉對(duì)三種干化學(xué)法測(cè)定的研究［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2005，20（6）：597-598.

［4］ 史建國(guó)，劉金玉，孫士青，等.血樣預(yù)處理與酶電極法分析［J］.山東科學(xué)，2012，25（3）：75-79.

［5］ Shi RZ，Seeley ES，Bowen R，et al.Rapid blood separation is superior to fluoride for preventing in vitro reductions in measured blood glucose concentration［J］.J Clin Pathol，2009，62（8）：752-753.

［6］ 閆存玲，李志艷，燕容，等.分離膠采血管制備血清對(duì)血糖、補(bǔ)體C3和NSE測(cè)定結(jié)果及穩(wěn)定性的影響［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，24（4）：260-263.