1 151例中段尿培養(yǎng)病原菌構(gòu)成與耐藥性分析

蔡 輝， 張 肖， 陸峰泉， 顧 兵， 蔣 理，

·論著·

1 151例中段尿培養(yǎng)病原菌構(gòu)成與耐藥性分析

蔡 輝1， 張 肖1， 陸峰泉1， 顧 兵2， 蔣 理1，2

目的 分析2011—2013年泌尿系感染患者常見病原菌構(gòu)成及耐藥性，為臨床合理使用抗菌藥物提供依據(jù)。方法 采用SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 plus系統(tǒng)或A PI系統(tǒng)鑒定細菌和真菌，細菌藥物敏感性測定采用紙片擴散法；應用W H O N E T5.6軟件進行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果 1 151份中段尿細菌培養(yǎng)標本中共檢出344株病原菌，陽性率為29.9%。其中革蘭陰性菌263株（76.5%），最為常見的是大腸埃希菌183株（53.2%）、肺炎克雷伯菌33株（9.6%）、變形桿菌21株（6.1%）、銅綠假單胞菌12株（3.5%）；革蘭陽性菌81株（23.5%），最常見的是糞腸球菌17株（4.9%）和凝固酶陰性葡萄球菌15株（4.4%）。耐藥性分析結(jié)果顯示，腸桿菌科細菌中大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBL的檢出率為51.9%和63.6%；產(chǎn)ESBL菌株對頭孢菌素類、喹諾酮類、四環(huán)素類、磺胺類等抗菌藥物耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBL菌株，兩者相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；腸桿菌科細菌對碳青霉烯類抗生素高度敏感（敏感率為90.5%～100%）。不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌中銅綠假單胞菌對環(huán)丙沙星、阿米卡星和美羅培南較為敏感（敏感率為83.3%）。革蘭陽性球菌對萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺仍高度敏感（敏感率為86.5%～100%）。檢出2株大腸埃希菌和1株肺炎克雷伯菌對亞胺培南耐藥，2株腸球菌對萬古霉素耐藥。結(jié)論大腸埃希菌是泌尿系感染主要病原菌，病原菌的耐藥性日趨嚴重。定期監(jiān)測和及時總結(jié)并分析泌尿系感染的病原菌構(gòu)成及耐藥性，對指導臨床合理使用抗菌藥物具有十分重要的意義。

尿培養(yǎng)； 病原菌； 抗菌藥物； 耐藥性

尿路感染是最常見的感染性疾病之一，也是常見的醫(yī)院感染疾病之一，約占醫(yī)院感染的30%～40%，為醫(yī)院感染的首位［1］。中段尿培養(yǎng)是確定病原菌種類的直接手段，藥物敏感試驗直接指導著臨床用藥，對疾病的治療具有重要意義［2］。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛使用，泌尿系感染病原菌對其耐藥性日趨嚴重。為了解泌尿系感染病原菌的種類構(gòu)成及耐藥狀況，本文對江蘇省盛澤醫(yī)院2011—2013年1 151例中段尿培養(yǎng)分離的344株病原菌進行分析，結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 收集2011—2013年住院患者送檢的1 151份中段尿標本進行培養(yǎng)、分離、鑒定和藥敏分析，剔除同一患者所獲重復菌株。

1.1.2 試劑與儀器 SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 plus全自動微生物鑒定儀及法國生物梅里埃公司A PI細菌鑒定系統(tǒng)；細菌藥敏紙片為英國O X OID公司產(chǎn)品。

1.1.3 質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌（金葡菌）A T C C 25923，大腸埃希菌A T C C 29522，銅綠假單胞菌 A T C C 27853，肺炎克雷伯菌 A T C C 700603，糞腸球菌A T C C 29212。

1.2 方法

1.2.1 標本的采集及培養(yǎng) 按照全國臨床檢驗操作規(guī)程（第3版）留取及接種標本［3］。

1.2.2 病原菌鑒定及藥敏試驗 細菌經(jīng)革蘭染色后，挑取無污染且革蘭陰性桿菌菌落計數(shù) ＞105C F U/m L、革蘭陽性球菌菌落計數(shù)＞104C F U/m L的細菌進行菌種鑒定和藥敏分析［3］，用SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 plus全自動微生物鑒定儀或 A PI鑒定條進行鑒定。藥敏試驗采用 K-B瓊脂擴散法，根據(jù)美國臨床和實驗室標準化協(xié)會（C LSI）規(guī)定判斷藥物敏感性。采用C LSI 2008年推薦的ESB L紙片篩選法和酶抑制劑增強紙片確證法標準測定大腸埃希菌、克雷伯菌屬和奇異變形桿菌中產(chǎn)ESB L株。

1.2.3 統(tǒng)計分析 采用世界衛(wèi)生組織細菌耐藥性監(jiān)測網(wǎng)推薦的W H O N E T5.6軟件進行數(shù)據(jù)分析；SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 病原菌構(gòu)成

2011—2013年我院住院患者共送檢中段尿培養(yǎng)標本1 151例，去除同一患者分離的重復菌株后共檢出病原菌344株，陽性檢出率為29.9%。其中女性陽性266例，男性陽性78例。革蘭陰性菌263株，占76.5%；革蘭陽性菌81株，占23.5%。排列前5位的病原菌為：大腸埃希菌（53.2%），肺炎克雷伯菌（9.6%），變形桿菌（6.1%），糞腸球菌（4.9%），凝固酶陰性葡萄球菌（C N S，4.4%），見表1。

表1 344例中段尿培養(yǎng)病原菌構(gòu)成Table 1 The pathogenic bacteria isolated fro m midstream urine

2.2 革蘭陰性菌對抗菌藥物的敏感性

分離出的263株革蘭陰性菌中，以大腸埃希菌為主，占69.6%。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESB L檢出率分別為51.9%和63.6%。腸桿菌科細菌對碳青霉烯類抗生素仍高度敏感，敏感率為100%；對β內(nèi)酰胺-β內(nèi)酰胺酶抑制劑復合制劑、阿米卡星、米諾環(huán)素、呋喃妥因敏感率較高，均＞50%；腸桿菌科細菌中產(chǎn)ESB L菌株對頭孢菌素類、喹諾酮類、四環(huán)素類、磺胺類等抗菌藥物耐藥率均顯著高于非產(chǎn)ESB L菌株（P＜0.05）。檢出2株大腸埃希菌和1株肺炎克雷伯菌對亞胺培南耐藥。不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌中以銅綠假單胞菌為主，其對碳青霉烯類抗生素較為敏感，對頭孢菌素類、喹諾酮類、氨基糖苷類耐藥率較低，見表2。

2.3 革蘭陽性菌對抗菌藥物的敏感性

81株革蘭陽性菌中，檢出的3種主要病原菌為腸球菌屬、鏈球菌屬、C N S。其中，耐甲氧西林C N S（M R C N S）11株，占C N S的73.3%。革蘭陽性球菌對萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺高度敏感。C N S對青霉素耐藥率為100%，對阿米卡星較為敏感（敏感率80.0%），對其他抗菌藥物耐藥率均＞50%；腸球菌屬對氨芐西林、高濃度慶大霉素耐藥率分別為67.6%、56.8%，對左氧氟沙星、紅霉素、米諾環(huán)素耐藥率在50%以上；另外還檢出2株腸球菌萬古霉素耐藥株。鏈球菌屬細菌對青霉素、氨芐西林、頭孢噻肟敏感率較高，均＞75%，見表3。

表2 主要革蘭陰性菌對常用抗菌藥物的耐藥率和敏感率Table 2 Susceptibility of main gram negative bacteria to co m m only used antimicrobial agents（%）

表3 主要革蘭陽性菌對常用抗菌藥物的耐藥率和敏感率Table 3 Susceptibility of main gram positive bacteria to co m m only used antimicrobial agents（%）

3 討論

2011—2013年我院送檢的中段尿細菌培養(yǎng)標本共1 151份，檢出病原菌344株，陽性檢出率29.9%，高于文獻報道［4］。近3年來中段尿培養(yǎng)檢出的病原菌中，排前5位的為大腸埃希菌（53.2%），肺炎克雷伯菌（9.6%），變形桿菌（6.1%），糞腸球菌（4.9%）和 C N S（4.4%）。泌尿系感染是僅次于呼吸系統(tǒng)感染的第二大感染性疾病。國內(nèi)外研究均表明，泌尿系感染的病原菌以革蘭陰性桿菌為主，尤其以大腸埃希菌最為常見［5-7］。本研究也顯示，革蘭陰性桿菌是泌尿系感染的主要病原菌，占全部病原菌的76.5%，其中又以大腸埃希菌為主要病原菌，占全部病原菌的53.2%，這一結(jié)果與國內(nèi)外文獻報道基本一致。革蘭陽性菌以腸球菌屬為主，以糞腸球菌和鳥腸球菌為常見。除大腸埃希菌外，其他病原菌構(gòu)成與文獻報道有一定差異［8］，可能與各地區(qū)用藥情況不同、取樣時間不同有關(guān)。

本次藥敏監(jiān)測結(jié)果顯示，我院尿培養(yǎng)分離出的產(chǎn)ESB L大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的檢出率分別為51.9%和63.6%，與國內(nèi)報道相當［9-10］；產(chǎn) ESB L腸桿菌科細菌對頭孢菌素類、喹諾酮類、四環(huán)素類、磺胺類等抗菌藥物耐藥率明顯高于非產(chǎn) ESB L菌株，兩者相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；非產(chǎn)ESB L菌株對頭孢菌素類、氨曲南敏感性較高，均＞50%。此外，無論腸桿菌科細菌是否產(chǎn)ESB L，均對碳青霉烯類、β內(nèi)酰胺-β內(nèi)酰胺酶抑制劑復合制劑、阿米卡星高度敏感，提示臨床醫(yī)師經(jīng)驗用藥時，可選用上述藥物。不發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌中以銅綠假單胞菌所占比率最高，該菌對哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、頭孢他啶、頭孢吡肟、阿米卡星的耐藥率均＜20%。銅綠假單胞菌對抗菌藥物的耐藥趨勢隨著該類藥物使用頻率的增加而逐年上升，并存在多藥耐藥性，臨床醫(yī)師應提高警惕，引起重視。

葡萄球菌屬對萬古霉素和利奈唑胺均保持較高敏感性，尚未發(fā)現(xiàn)耐藥菌株；葡萄球菌屬對青霉素、紅霉素、克林霉素和甲氧芐啶-磺胺甲口惡唑耐藥率較高，均在65%以上。20株葡萄球菌中金葡菌5株，15株為C N S。隨著抗菌藥物的廣泛使用，留置導管、介入等侵襲性診治項目的開展，一般認為是非致病菌的C N S導致的醫(yī)院感染亦明顯增多，且其耐藥性日趨嚴重。本調(diào)查 M R C N S占C N S的比率高達73.3%，由于M R C N S不僅對各類β內(nèi)酰胺類抗生素具有內(nèi)在的耐藥性，而且通過獲得其他耐藥基因而呈現(xiàn)出對其他類抗生素的多重耐藥性，給臨床治療帶來了嚴重問題。腸球菌屬對萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺均保持較高敏感性，但檢出2株萬古霉素耐藥腸球菌，實驗室應密切關(guān)注其耐藥性變化。腸球菌屬對氨芐西林、紅霉素、左氧氟沙星、高水平氨基糖苷類耐藥率較高；這表明氨基糖苷類與氨芐西林、青霉素或萬古霉素的協(xié)同作用逐漸降低，臨床醫(yī)師應盡量避免氨基糖苷類和其他作用于細菌細胞壁的藥物同時使用［4］。同時，腸球菌對呋喃妥因敏感性較高，該藥具有較高的抗菌活性，可作為臨床經(jīng)驗治療泌尿系感染的首選藥物，但因其腎毒性較大，故應慎用［11］。鏈球菌對萬古霉素、替考拉寧和利奈唑胺均保持較高敏感性，且尚未發(fā)現(xiàn)耐藥菌株；對頭孢噻肟具有較高敏感性，敏感率為91.7%，給臨床醫(yī)師選擇抗菌藥物提供依據(jù)。

總之，尿路感染的主要病原菌為革蘭陰性菌，該類菌呈現(xiàn)多重耐藥性，且耐藥率不斷升高，所以定期監(jiān)測和分析尿培養(yǎng)病原菌的構(gòu)成及耐藥性變遷，對于指導臨床合理選用抗菌藥物十分重要。

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Pathogens from 1 151 cases of urine culture and their antibiotic resistance profile

C AI H ui，Z H A N G Xiao，L U Fengquan，G U Bing，JIA N G Li. （Departmentof Laboratory M edicine，Jiangsu Shengze H ospital，Suzhou Jiangsu 215228，China）

Objective To analyze the pathogens and antibiotic resistance profile in patients with urinary tract infections w ho were treated fro m 2011 to 2013 to provide evidence for rational use of antimicrobial agents.M ethods SIE M E N S MicroScan W alk A way 96 Plus system or A PI system was used for identification of bacteria and fungi.A ntimicrobial susceptibility testing was conducted by disk diffusion method.W H O N E T 5.6 software was used for data analysis.Results A total of 344（29.9%）strains of pathogens were detected fro m 1 151 midstream urine culture specimens，of w hich 76.5% （263/344）were gram negative bacteria，includingE.coli（53.2%，183/344），K.pneu moniae（9.6%，33/344），Proteus（6.1%，21/344），andP. aeruginosa（3.5%，12/344）.A bout 23.5% （81/344）of the isolates were gram-positive bacteria，includingEnterococcus faecalis（4.9%，17/344）and coagulase-negativeStaphylococcus（4.4%，15/344）.ESBLs were produced in 51.9%of theE. coliisolates and 63.6%of theK.pneu moniaeisolates.ESBLs-producing strains showed significantly higher resistance rates to cephalosporins，quinolones，tetracyclines，sulfonamides and other antimicrobial agents than non-ESBLs-producing strains（P＜0.05）.Enterobacteriaceaeisolates were highly sensitive to carbapenems（90.5%-100%sensitive）.P.aeruginosastrains were relatively sensitive to ciprofloxacin，amikacin and meropenem （83.3%）.Gram-positive cocci remained highly sensitive to vanco m ycin，teicoplanin and linezolid（86.5%-100%）.T wo stains ofE.coliand one stain ofK.pneu moniaewere found resistant to imipenem.T wo strains ofEnterococcuswere resistant to vanco m ycin.ConclusionsE.coliis the major pathogen of urinary tract infections.The pathogens of urinary tract infection are increasingly resistant toantimicrobial agents.Regular m onitoring and timely analysis of the pathogens of urinary tract infections and their resistance profile are of great im portance to rational use of antimicrobial agents.

urine culture；pathogen；antimicrobial agent；resistance

R378

A

1009-7708（2015）01-0038-05

2014-04-01

2014-09-09

1.江蘇盛澤醫(yī)院檢驗科，江蘇蘇州 215228；2.南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院。

蔡輝（1986—），男，學士，檢驗師，主要從事臨床微生物學檢驗。

張肖，E-mail：zhangxiaoxixi223@163.co m。