吡格列酮對(duì)DSS誘導(dǎo)的炎癥性腸病小鼠血清TNFα與hsCRP水平的影響

劉亭亭 陳還珍 馬文艷 忽海洋

摘要： 目的觀察吡格列酮對(duì)炎癥性腸病小鼠血清腫瘤壞死因子α（TNFα）與高敏C反應(yīng)蛋白（hsCRP）水平的影響，探討吡格列酮可能成為治療炎癥性腸病的藥物及降低遠(yuǎn)期動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。方法清潔BALB/c小鼠隨機(jī)分為3組，分別為正常組、模型組、吡格列酮藥物干預(yù)組。采用3%DSS溶液制備炎癥性腸病小鼠模型，在造模第2天開始給予吡格列酮25 mg/kg灌胃，每天一次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。治療結(jié)束后，采用酶聯(lián)免疫法（ELISA法）檢測(cè)血清hsCRP、TNFα。結(jié)果與正常組相比較，模型組小鼠腸組織出現(xiàn)炎癥性表現(xiàn)，且血清hsCRP、TNFα的水平均顯著增高（P<0.01）;與模型組相比較，吡格列酮干預(yù)組小鼠腸道炎癥表現(xiàn)明顯減輕，且血清hsCRP、TNFα的水平均顯著降低（P<0.01）。結(jié)論吡格列酮能下調(diào)炎癥性腸病小鼠TNFα的表達(dá)，減輕腸道炎癥性改變，并改善腸道組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，而發(fā)揮治療，明顯降低血清hsCRP的水平，降低遠(yuǎn)期動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)鍵詞： 炎癥性腸病;高敏C反應(yīng)蛋白;腫瘤壞死因子α;吡格列酮

中圖分類號(hào)：R574R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.16721349.2015.01.022

文章編號(hào)：16721349（2015）01006103

炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）是一種病因尚不明確的慢性腸道炎癥性疾病，它包括了克羅恩?。–rohns disease，CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC），該病多為慢性起病，反復(fù)發(fā)作，在歐美等發(fā)達(dá)國家發(fā)病率較高，近年在我國的發(fā)病率也逐漸升高[1，2]。IBD的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為可能是腸道細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物作用于宿主，使之產(chǎn)生免疫反應(yīng)，并且免疫反應(yīng)在IBD的炎癥反應(yīng)中起著重要的作用[3]。近年來隨著人們對(duì)該病的重視，免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)成為治療IBD的重要途徑[4]。目前已證實(shí)在IBD的發(fā)病過程中，Toll樣受體（Toll like receptors，TLRPs）/核轉(zhuǎn)錄因子κB（Nuclear factor kappB，NFκB）信號(hào)通路的過度激活起著重要的作用[57]。

過氧化物酶體增殖物激活受體γ（Peroxisome proliferatoractiated recetor gamma，PPARγ）在正常的腸上皮中表達(dá)較高，且在維持上皮正常功能和局部炎癥的調(diào)控中起著重要的作用[8]。PPARγ是TLRs的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，它與配體結(jié)合后抑制了TLRs信號(hào)通路的炎癥反應(yīng)[9]。吡格列酮（Pioglitazone，PG）是噻唑烷二酮類化合物，該類化合物是人工合成的PPARγ配體，目前發(fā)現(xiàn)該類藥物不僅具有降血糖的作用，而且也具有控制炎癥性疾病的作用[10]。因此本研究建立BALB/c小鼠模型，觀察吡格列酮對(duì)小鼠血清腫瘤壞死因子α（TNFα）與高敏C反應(yīng)蛋白（hs

CRP）水平的影響，為吡格列酮治療炎癥性腸病提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)資料。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性清潔級(jí)BALB/c小鼠45只，體重（20±2）g，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)為SCXK（晉）2009/0001，動(dòng)物使用合格證號(hào)為SCXK（晉）2009/0004。飼養(yǎng)條件：清潔級(jí)，室內(nèi)溫度（20～24）℃，相對(duì)濕度55%～70%，自由飲水和攝取食物。適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，觀察小鼠飲食、活動(dòng)正常后開始實(shí)驗(yàn)。

1.2主要試劑葡聚糖硫酸鈉DSS分子量40 000（SIGMAALORICH），吡格列酮（日本武田藥品工業(yè)株式會(huì)社），TNFα（南京建成生物工程研究所），hsCRP檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3模型制備BALB/c小鼠自由飲用3%DSS溶液7 d，然后停止飲用3%DSS溶液改用蒸餾水7 d，重復(fù)5次，建立小鼠慢性炎癥性腸病模型，模型建立成功標(biāo)志為半稀便、腹瀉、大便隱血陽性和肉眼血便中的任何一個(gè)癥狀，造模結(jié)束后取其結(jié)腸做HE染色，確定模型制備是否成功。

1.4分組與干預(yù)BALB/c小鼠隨機(jī)分成正常組、模型組、吡格列酮干預(yù)組，每組15只。吡格列酮組：在造模第2天開始給予吡格列酮25 mg/kg灌胃，每天一次，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。正常組和模型組不進(jìn)行任何治療。

1.5指標(biāo)檢測(cè)結(jié)腸組織病理學(xué)觀察HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化。 血清TNFα、hsCRP的檢測(cè)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用方差分析法進(jìn)行分析，多組間比較采用單因素方差分析（oneway ANOVA）數(shù)據(jù)處理，統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包。

2結(jié)果

2.1各組大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)變化在光鏡下觀察，正常組小鼠的結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)完整，腸黏膜無充血、水腫，無炎細(xì)胞浸潤;模型組腸道炎癥明顯，腸黏膜充血、水腫伴大量炎細(xì)胞浸潤;吡格列酮藥物干預(yù)組腸道炎癥較模型組明顯改善，腸黏膜無明顯充血、水腫，有炎細(xì)胞浸潤。

2.2血清TNFα和hsCRP在各組的水平（見表1）3組間血清TNFα和hsCRP差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），模型組與正常組比較血清TNFα和hsCRP有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），說明炎癥性腸病中血清TNFα和hsCRP的濃度升高;吡格列酮組與模型組和正常組比較，TNFα和hsCRP的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明吡格列酮對(duì)炎癥性腸病有抗炎的作用。

3討論

炎癥性腸病包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病，目前對(duì)炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制仍不明確，可能與環(huán)境、遺傳易感性、自生免疫反應(yīng)、病原體感染有關(guān)。大量研究表明，NFκB信號(hào)通路的過度激活在炎癥性腸病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。

3.1小鼠炎癥性腸病與血清TNFαTNFα因子是重要的促炎癥因子，在IBD形成的過程中起著重要的作用，它是以旁分泌和自分泌的方式在腸黏膜局部發(fā)揮作用的，它可以促進(jìn)IL1、IL8等炎癥因子的釋放，增強(qiáng)了局部炎癥反應(yīng)，擴(kuò)大炎癥連鎖反應(yīng)造成對(duì)腸黏膜的損傷。Marrero 等[11]研究發(fā)現(xiàn)， DSS 誘發(fā)的結(jié)腸炎發(fā)生和嚴(yán)重程度與NFκB 活化有關(guān)，NFκB激活后，可以啟動(dòng)IFNγ、IL6、IL8、TNFα基因的早期轉(zhuǎn)錄[12]，促進(jìn)血清中TNFα水平增加。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，炎癥性腸病模型組的血清TNFα水平明顯高于對(duì)照組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），說明TNFα在炎癥性腸病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。

3.2小鼠炎癥性腸病與hsCRPhsCRP是一種重要的急性期蛋白，它在正常人血清中含量甚少，但在炎性疾病的情況下，會(huì)迅速升高，在病變緩解后，恢復(fù)正常范圍。hsCRP是預(yù)測(cè)心腦血管疾病的標(biāo)志物，是致動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)危險(xiǎn)因子，是預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。而在炎癥性腸病患者中，血清hsCRP水平較對(duì)照組明顯升高（P<0.001），增加了動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)，這為預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化提供了科學(xué)依據(jù)。

3.3小鼠炎癥性腸病與吡格列酮PPARγ分為天然配體和人工合成配體，噻唑烷二酮類藥物屬于人工合成配體，它包括吡格列酮、曲格列酮、羅格列酮等，PPARγ的功能復(fù)雜多樣，它除了具有降血糖的作用，還具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血壓、降血脂等作用。PPARγ經(jīng)配體激活后，具有抑制炎癥反應(yīng)的作用，對(duì)機(jī)體的炎癥反應(yīng)進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)[13，14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，吡格列酮組HE染色病理圖片炎癥反應(yīng)明顯輕于模型組，且相關(guān)血清炎癥因子也明顯減少（P<0.001）。這為治療炎癥性腸病提供了新的科學(xué)理論依據(jù)，也是治療炎癥性腸病的潛在靶點(diǎn)。

在炎癥性腸病中血清hsCRP、TNFα水平明顯升高，而給予吡格列酮干預(yù)后，血清hsCRP、TNFα水平明顯降低，腸道HE染色病理圖片提示吡格列酮組炎癥明顯減輕，提示PPARγ配體吡格列酮可能成為炎癥性腸病治療的潛在靶點(diǎn)。血清hsCRP水平在炎癥性腸病中明顯升高，提示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率明顯升高，PPARγ配體吡格列酮可降低血清hsCRP水平，從而降低了動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

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（收稿日期：20140409）

（本文編輯王雅潔）