大葉藜葉中總黃酮含量的測定

武蕓 馬世榮 王春林 胡浩斌 張小偉

摘要[目的]建立大葉藜葉中總黃酮含量的測定方法。[方法]采用分光光度法，以蘆丁為對照品，10 %KOH為顯色劑，在403 nm處對樣品中的總黃酮含量進(jìn)行測定。[結(jié)果]總黃酮在10.7～64.2 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，R2=0.997；平均加樣回收率為98.45%，RSD為0.56%（n=6），大葉藜葉中的總黃酮含量為2.45 mg/g。[結(jié)論]該方法穩(wěn)定、簡便、快速，適用于大葉藜葉中總黃酮含量的測定。

關(guān)鍵詞 紫外-可見分光光度法；大葉藜；總黃酮；含量測定

中圖分類號 S567.21+9；R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）34-164-02

大葉藜為藜科（Chenopodiaceae）藜屬（Chenopodium）一年生草本植物，別名雜配藜、八角灰菜、血見愁等，我國各地均有分布[1]，其地上部分可作中藥，主治月經(jīng)不調(diào)、子宮出血、吐血、衄血、咯血、尿血等癥[2]。研究表明，藜屬植物富含黃酮、酚酸和萜類物質(zhì)[3-4]，黃酮類化合物具有抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、增強(qiáng)心血管功能、抗過敏、抗菌消炎、降血糖、降血脂、抗病毒、養(yǎng)胃護(hù)脾、利肝等功效[5-6]?，F(xiàn)代藥學(xué)研究表明，許多藜屬植物具有止癢、抗菌、抗癌活性，并作為民間中藥廣泛使用[7-9]。大葉藜中總黃酮的含量測定及提取尚未見報道，筆者采用紫外-可見分光光度法測定了大葉藜葉中的總黃酮含量，旨在為進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

大葉藜采自甘肅省慶陽市（107°41′0.8″ E，35°43′41.8″ N），由隴東學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院馬世榮副教授鑒定，植物標(biāo)本保存在隴東學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院（20140620）。

1.2 儀器與試劑

儀器：FZ102植物粉碎機(jī)（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；FA1204B型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；RE52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海科升儀器有限公司）；KQ500DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SPECORD50 紫外可見分光光度計（德國耶拿公司）。

試劑：蘆?。ㄖ袊幤飞镏破疯b定所，批號：100080-200707）；95%乙醇、甲醇、氫氧化鉀、三氯化鋁、亞硝酸鈉、硝酸鋁均為分析純；試驗用水為二次蒸餾水，自制。

1.3 方法

1.3.1 供試品溶液的制備。

準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的原料（過60目標(biāo)準(zhǔn)篩）1.0 g，用30 ml 70%乙醇溶液超聲提取2次，每次40 min，過濾，將濾液合并，減壓濃縮，濃縮物用石油醚（60～90 ℃）萃取3次，水相用乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯萃取液并轉(zhuǎn)移至100 ml 容量瓶中，用70%乙醇定容、搖勻，作為供試品溶液。

1.3.2 對照品溶液的制備。

準(zhǔn)確稱取干燥至恒重（120 ℃）的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照品0.010 7 g，用70%乙醇超聲溶解，并定容至100 ml，配制成107 μg/ml 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3 檢測波長的選擇。

精密吸取一定量的供試品溶液和對照品溶液于2個10 ml具塞試管中，均用70%乙醇稀釋至6 ml，加入10% KOH 溶液各0.5 ml，充分混勻，靜置5 min，用70%乙醇定容、搖勻，以相應(yīng)試劑作為空白對照，分別在190～900 nm進(jìn)行掃描。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

精密量取新配制的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于 6個10 ml具塞試管中，按“1.3.3”中的顯色方法和測定方法，分別在檢測波長處測定各溶液的吸光度。以蘆丁對照品溶液的質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5 樣品總黃酮含量的測定。

精密吸取大葉藜葉供試品溶液3份，每份均為5.0 ml，按“1.3.3”的方法在最大波長處分別測其定吸光度（每樣測定3次），將試樣的吸光度平均值代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算供試樣品的總黃酮含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測波長的確定 由圖1可知，對照品顯色溶液與供試品顯色溶液最大吸收波長很接近，故選擇403 nm為試驗的測定波長。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2，用最小二乘法分別求出回歸方程及相關(guān)系數(shù)分別為A=0.019 6C+0.108 6，R2=0.995。

2.3 樣品測定

按“1.3.5”的方法，將每種試樣的吸光度平均值帶入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算供試樣品的總黃酮含量，得到大葉藜葉中總黃酮含量為2.45 mg/g。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度。

精密吸取5.0 ml供試品溶液，按“1.3.3”的方法測定最大吸收波長處的吸光度，重復(fù)測定5次，結(jié)果RSD=0.86%，表明儀器精密性良好。

2.4.2 重復(fù)性。

精密吸取供試品溶液5.0 ml，共5份，置于10 ml容量瓶中，按“1.3.3”的方法分別測定其吸光度，每份溶液在最大波長下測定3次，取平均值，結(jié)果RSD=0.93%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.3 穩(wěn)定性。

精密吸取供試品溶液5.0 ml于10 ml容量瓶中，按“1.3.3”的方法分別于20、40、60、80、100、120 min時測定其吸光度，結(jié)果RSD=1.78%，表明在顯色后120 min內(nèi)，吸光度基本穩(wěn)定。

2.4.4 加樣回收率。

精密吸取供試品溶液6份于10 ml容量瓶中，每份5.0 ml。分別加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、1.5、2.0 ml，每樣平行2份。按“1.3.3”的方法在403 nm處分別測定加樣后的吸光度，并計算總黃酮含量、回收率、平均回收率和RSD。加樣回收率試驗結(jié)果見表1。由表1可知，平均回收率為98.45%，RSD=0.56%。

采用 50%、60%、70% 、80%、95%乙醇作為提取劑，按照“1.3.1”的方法得到提取液，后采用“1.3.3”的顯色方法和測

定方法測定提取液在403 nm處的吸光度，發(fā)現(xiàn)70%乙醇作為提取劑時吸光度達(dá)到最大，因此，該試驗選取70%乙醇為提取溶劑。分別采用直接測定法和AlCl3CH3OH、10% KOH、NaNO2Al（NO3）3 3種顯色法對供試品溶液進(jìn)行顯色，后分別在190 ～ 900 nm進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，采用10% KOH作為顯色劑，步驟簡單、快速、穩(wěn)定，且出峰效果好，干擾小，故該試驗選用10% KOH作為顯色劑。

4 結(jié)論

該研究以70%乙醇為提取溶劑，10% KOH為顯色劑，采用紫外-可見分光光度法測定大葉藜葉的總黃酮含量為2.45 mg/g，且精密性、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率試驗結(jié)果表明，以KOH為顯色劑，采用紫外-可見分光光度法測定大葉藜葉的總黃酮含量，方法操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

參考文獻(xiàn)

[1] 《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編[G].北京：人民衛(wèi)生出版社，1975：53.

[2] 祁云枝，杜勇軍，張瑩.西安地區(qū)外來入侵植物的調(diào)查研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2010（5）：223- 227.

[3] GOHAR A A，MAATOOQ G T，NIWA M.Two flavonoid glycosides from Chenopodium murale[J].Phytochemistry，2000，53（2）：299-303.

[4] REPOCARRASCOVALENCIA R，HELLSTRM J K，PIHLAVA J M，et al.Flavonoids and other phenolic compounds in Andean indigenous grains：Quinoa（Chenopodium quinoa），Kaiwa（Chenopodium pallidicaule）and kiwicha（Amaranthus caudatus）[J].Food chemistry，2010，120（1）：128-133.

[5] YAO L H，JIANG Y M，SHI J，et al.Flavonoids in food and their health benefits[J].Plant Foods Hum Nutr，2004，59（3）：113-122.

[6]趙秀玲.黃銅類化合物的研究進(jìn)展[J].江蘇調(diào)味副食品，2010，27（5）：17-22.

[7] ABDELAZIZ M S，SHAHEEN M S，EINEKEETY A A，et al.Antioxidant and antibacterial activity of silver nanoparticles biosynthesized using Chenopodium murale leaf extract[J].Journal of saudi chemical society，2014，18（4）：356-363.

[8] NOWAK R，SZEWCZYK K，GAWLIKDZIKI U，et al.Antioxidative and cytotoxic potential of some Chenopodium L.species growing in Poland[J/OL].[2015-01-17].Saudi journal of biological science.http：//dx.doi.org/10.1016/j.sjbs.

[9] GAWLIKDZIKI U，SWIECA M，SULKOWSKI M，et al.Antioxidant and anticancer activities of Chenopodium quinoa leaves extractsIn vitro study[J].Food and chemical toxicology，2013，57：154-160.