井岡山產(chǎn)厚樸總生物堿含量分析

曾 紅，宋明霞，梁兆昌，鄧先清，黃玉珊

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井岡山產(chǎn)厚樸總生物堿含量分析

曾 紅，宋明霞，梁兆昌，鄧先清，*黃玉珊

（井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西，吉安 343009）

目的 分析評價井岡山產(chǎn)厚樸不同部位總生物堿含量。方法 采用高氯酸滴定法對井岡山產(chǎn)同一植株厚樸的干皮、枝皮、根皮、花、葉部位的總生物堿含量進行測定，同時比較了厚樸干皮、枝皮、根皮生品和炮制品生物堿含量。結(jié)果 厚樸干皮、枝皮、根皮、花、葉總生物堿含量分別為4.6053 ± 0.0814、5.4734 ± 0.1047、6.5940 ± 0.0715、7.9546 ± 0.0686、7.2220 ± 0.0776mg/g，炮制品生物堿含量較生品低。結(jié)論 同一植物厚樸花中生物堿含量最高，而傳統(tǒng)入藥部位干皮中最低，且厚樸皮應(yīng)以生品入藥。

厚樸；生物堿；含量分析

厚樸（Magnolia officinalis Rehd et Wils.）是常用的中藥品種之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，以皮入藥，具有燥濕消痰、下氣除滿之功效，用于濕滯傷中、脫痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳[1]。生物堿廣泛地分布于豆科、茄科、防己科、罌粟科等雙子葉植物中，具有鎮(zhèn)痛、消炎、降壓和抗癌等多種藥理活性[2]。厚樸中主要含厚樸酚、和厚樸酚，而生物堿是其次要成分。以乙醇為溶劑提取厚樸總生物堿，可提高生物堿得率并能縮短提取時間[3]。晏仁義[4]、王洪燕[5]等從厚樸中分離得到了生物堿成分，楊紅兵[6]等采用非水滴定法對湖北恩施產(chǎn)同一植株厚樸干皮、枝皮、根皮中生物堿含量進行分析，發(fā)現(xiàn)根皮含量最高，干皮最低。傳統(tǒng)厚樸炮制有文幫和武幫兩種炮制工藝[7]，均是主要采用姜炙的方法，而采用生姜炮制比干姜炮制有效成分含量更高[8]。研究表明生物堿是厚樸的藥效成分之一，具有肌肉松弛、降壓、松弛氣管平滑肌[9]、抑菌[10]等藥理作用。厚樸傳統(tǒng)以皮入藥，但皮生長期較長，需15~20年方可入藥，且剝皮后樹即死去不可再生。

生物堿是厚樸植物的次生代謝物，一種植物體內(nèi)多有數(shù)種或數(shù)十種生物堿共存，厚樸其它部位是否如皮一樣含有生物堿？目前對厚樸的替代研究較少，本研究擬對厚樸不同部位的生物堿含量進行分析，尋找厚樸皮的替代部位，有助于資源的可持續(xù)利用，以期為更好地開發(fā)利用厚樸提供參考。

井岡山自然保護區(qū)地處羅霄山脈中段，是贛江和湘江兩大水系的分水嶺。區(qū)內(nèi)山體陡峭，海拔280~1600 m，地形復(fù)雜。屬亞熱帶溫暖潤濕氣候，是江西日照最短、雨量最多、濕度最大的地方。井岡山自然保護區(qū)管理處與藥材部門合作，種植了大批厚樸，此外在井岡山長坪、下七、黃坳、大小五井、荊竹山等村莊，各農(nóng)戶房前屋后、庭園內(nèi)外都有種植。為深入系統(tǒng)研究井岡山產(chǎn)厚樸的質(zhì)量情況，我們課題組在井岡山自然保護區(qū)采集了30年生厚樸干皮、根皮、枝皮、葉、花，對其不同部位的生物堿類含量進行了初步定量研究。

1　材料

1.1儀器與試藥

FA1004N型電子天平（上海菁海儀器有限公司）；高氯酸、冰醋酸、醋酐、結(jié)晶紫均為分析純，由上?；瘜W(xué)試劑總廠生產(chǎn)。

1.2藥材來源

實驗選取30年生厚樸6株，于2013年6月采自江西井岡山自然保護區(qū)，經(jīng)鑒定為木蘭科植物厚樸。其中干皮采用環(huán)剝法采割，枝皮和根皮分別剝?nèi)⊥恢旰駱愕臉渲蜆涓钠?，厚樸花?013年4月采摘的厚樸未開花花蕾，厚樸葉2013年6月采摘，以上樣品放于通風(fēng)干燥處陰干待用。

2　方法

2.1 厚樸皮炮制方法

分別取厚樸干皮、枝皮、根皮，刮去其表面粗皮，切段，陰干。取厚樸段，加生姜汁拌勻，不斷翻動，放置過夜使吸透，用文火炒干得厚樸炮制樣品。生姜汁和厚樸生品比例為1:10。

2.2 高氯酸標準液的配制與標定

(1)取冰醋酸（99%）500 mL加醋酐27.43 mL振搖。

(2)0.1 mol/LHClO4-HAc標準溶液的配制

取70%~72%的HClO4約4.25 mL，緩緩加入（1）中所配制的冰醋酸375 mL，混合均勻，緩緩滴入醋酐12 mL，邊加邊搖，加完后振搖均勻，冷至室溫，加適量無水冰醋酸稀釋成500 mL，搖勻，于棕色瓶放置24 h后標定濃度。

取105 ℃干燥至恒重的鄰苯二甲酸氫鉀約0.12 g，精密稱定，置于干燥錐形瓶中，各加入20~25 mL冰醋酸使溶解，滴加結(jié)晶紫指示劑1滴，用0.1 mol/L HClO4-HAc溶液滴定至顏色由紫色變?yōu)樗{色為終點。另取冰醋酸20mL，按上述操作進行空白試驗校正。

CHClO4＝

(＝204.23 g/mol)

2.2 非水溶液滴定法

依照《中國藥典》2005年版一部“附錄ⅧB”，非水溶液滴定法項下“第一法”測定。取待測樣品粉末(通過四號篩) 0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，搖勻，室溫放置過夜(16小時以上)，再稱定重量，補足損失的溶劑量，振搖后放置，用濾紙濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL，旋轉(zhuǎn)蒸干，浸膏加無水冰醋酸15 mL使溶解，加結(jié)晶紫指示液1滴，樣品顏色變?yōu)榧t褐色，用高氯酸滴定液 (0.02 mol/L)滴定至顏色由紅褐色到綠色為準，即得。樣品以木蘭箭毒堿C19H24NO3（m314.3982）計算生物堿含量[6]。0.02 mol/L高氯酸滴定液對木蘭箭毒堿的滴定度T為6.29 mg/mL。

3 結(jié)果

3.1 厚樸干皮、枝皮、根皮、葉、花生物堿含量分析結(jié)果

表1 厚樸不同部位總生物堿含量比較(n = 6)

實驗分別對6株厚樸同一植株的干皮、枝皮、根皮、葉、花等不同部位的生物堿含量做了非水溶液滴定，各平行6次實驗。由表1可知，同一厚樸株，厚樸不同部位生物堿含量中以花的最高，干皮的最低。

3.2 厚樸干皮、枝皮、根皮生品與炮制品生物堿含量分析結(jié)果

表2 厚樸生品與炮制品總生物堿含量比較(n = 6)

由表2可知，厚樸干皮生品經(jīng)炮制后生物堿含量大約下降了1.4（mg/g），厚樸枝皮生品經(jīng)炮制后生物堿含量大約下降了1.11（mg/g），厚樸根皮生品經(jīng)炮制后生物堿含量大約下降了1.15（mg/g）。說明使用生姜炮制厚樸后會降低厚皮生物堿含量，可能是在后期文火炒干時加熱破壞了厚樸部分有效成分的原因。

4 討論

目前，生物堿含量測定方法主要有：滴定法、薄層掃描法、分光光度法、高效液相色譜法、毛細管電泳法等。雖然滴定法靈敏度不高，但操作簡便成本低，且準確性和穩(wěn)定性好，是測定生物堿的經(jīng)典方法。本研究中測定的是厚樸中總生物堿的含量，因有些生物堿堿性太弱，在水中不能準確滴定，一般采用非水滴定法來滴定。

由上面測定數(shù)據(jù)可知，井岡山產(chǎn)厚樸同一植株不同部位總生物堿含量高低依次為：厚樸花＞厚樸葉＞厚樸根皮＞厚樸枝皮＞厚樸干皮。其中厚樸花的生物堿的含量達到7.9546 ± 0.0686 mg/g，其它部位的生物堿的含量也要高于干皮。厚樸干皮、枝皮、根皮皮生品經(jīng)生姜炙后生物堿含量均有所下降，故從生物堿角度考慮，應(yīng)以生品入藥。文獻研究發(fā)現(xiàn)厚樸中生物堿成分主要為木蘭箭毒堿、木蘭花堿等異喹啉類生物堿，該類生物堿也是厚樸中的主要藥效成分。具有興奮胃腸平滑肌、降壓、橫紋肌松弛等藥理活性，對厚樸中生物堿成分的研究具有很大的實用價值。

厚樸是國家二級重點保護野生植物，為多年生落葉喬木，生長周期長，一般要生長十多年才能供剝皮藥用。現(xiàn)今厚樸藥材的來源是伐樹剝皮，為掠奪式取材，不利于環(huán)境和資源的可持續(xù)利用。而厚樸花、厚樸葉、厚樸枝皮含有比傳統(tǒng)入藥部位厚樸皮更多的生物堿，且一年四季可采，資源十分豐富。從藥用成分為生物堿的角度出發(fā)，厚樸枝皮、根皮、花、葉是可以替代厚樸干皮入藥的。研究結(jié)果對厚樸藥用資源的保護和綜合利用，提高厚樸的藥用價值，緩解厚樸藥林矛盾等具有重要的意義。

參考文獻：

[1] 中國藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005: 176.

[2] 姚新生,吳立軍,吳繼洲,等. 天然藥物化學(xué)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2006:352,441-443.

[3] 范家佑,張松竹. 黃柏中總生物堿的提取工藝優(yōu)化[J]. 井岡山大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,31(5):112-117.

[4] 晏仁義,郭建,劉紅亮,等. 厚樸生物堿成分研究[C].中國化學(xué)會第9屆天然有機化學(xué)學(xué)術(shù)會議, 2012.

[5] 王洪燕,周先禮,黃帥,等. 凹葉厚樸中生物堿成分的研究[J]. 華西藥學(xué)雜志,2007,22(1):30-33.

[6] 楊紅兵,石磊,詹亞華,等. 湖北恩施產(chǎn)厚樸的生物堿定量分析[J]. 湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,9(2):28-29.

[7] 甘友清,張南方. 厚樸的傳統(tǒng)炮制方法[J]. 河南中醫(yī), 2013,33(10):1798.

[8] 鄧治國. 生姜與干姜炮制厚樸的比較研究[J]. 中國藥業(yè),2013,22(18):29-30.

[9] 朱元元,封志平,徐長超,等. 厚樸總生物堿對豚鼠離體氣管平滑肌的影響[J]. 中草藥,2009,40(S1):190-193.

[10] 殷帥文,錢文,朱峰,等. 凹葉厚樸不同溶劑提取物對幾種植物病原菌的抑制活性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(1): 106-108.

ANALYSIS OF TOTAL ALKALOID CONTENT OFFROM JINGGANGSHAN

ZENG Hong,SONG Ming-xia, LIANG Zhao-chang, DENG Xian-qing,*HUANG Yu-shan

(School of Medicine, Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343000, China)

Objective: To analyze and evaluate the total alkaloid content of different parts offrom Jinggangshan. Methods: The total alkaloids of trunk, branch skin, root bark, flowers, leaves from the same plant were determined by using perchloric acid titration, and the contents of different parts of the plant and processed product were compared. Results: The total alkaloid contents of each part were 4.6053 ± 0.0814, 5.4734 ± 0.1047, 6.5940 ± 0.0715, 7.9546 ± 0.0686, 7.2220 ± 0.0776 mg/g respectively. The alkaloid content of processed products was lower than that of the fresh. Conclusion: The alkaloid content of the flowers was the highest in the same plant of, but the lowest for the traditional part trunk. It was suggest that the freshshould be used as medicine.

; alkaloids; content analysis

1674-8085(2015)01-0100-03

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2015.01.021

2014-11-10；修改日期：2014-12-26

國家科技支撐計劃項目子課題項目(2012BAC11B02-6)；吉安市科技局科技計劃項目(吉市科技字[2013]18號3)

曾 紅(1982-），女，湖南益陽人，講師，碩士，主要從事天然產(chǎn)物活性成分研究( E-mail: 66562768@qq.com);

宋明霞(1983-），女，山西介休人，講師，博士，主要從事藥物合成研究(E-mail:280799335@qq.com);

梁兆昌(1962-），男，江西吉安人，教授，主要從事中藥炮制研究(E-mail:2433863291@qq.com);

鄧先清(1984-），男，湖南衡陽人，講師，博士，主要從事藥物合成研究(E-mail:270260257@qq.com);

*黃玉珊(1976-），女，江西吉安人，副教授，博士，主要從事循證藥學(xué)研究(E-mail:3218680@qq.com).