HPLC法測定益氣養(yǎng)陰合劑中厚樸酚和厚樸酚和延胡索乙素的含量

劉傳統(tǒng) 祁紅

摘要：目的 建立測定益氣養(yǎng)陰合劑中厚樸酚、和厚樸酚和延胡索乙素含量的方法。方法 采用高效液相色譜法.色譜柱為HypersiIODS2（150 mm×4.6 mm，5μm），流動相分別為甲醇：水（75：45，v/v）、甲醇-0. 1010磷酸溶液（用三乙胺調(diào)至6.0）（55：45 .V/V），流速為1.0mL/min.檢測波長為294 nm，280 nm。結(jié)果 厚樸酚、和厚樸酚和延胡索乙素的的進(jìn)樣量分別在0.208～0. 624μg，0.272～0.816μg，0.212～0.636μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系（r分別為0.9999、0.9998、0.9998）；二者精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD <2%；平均加樣回收率分別為98.26%（ RSD=0.55%，n=9），98. 18%RSD=0.80%，n=9），98.47%（ RSD =0.75%，n=9）。結(jié)論該方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于益氣養(yǎng)陰合劑的質(zhì)量控制，.

關(guān)鍵詞：益氣養(yǎng)陰合劑；厚樸酚和厚樸酚；延胡索乙素；高效液相色譜法；含量測定

中圖分類號：R284

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1007 - 2349（ 2015） 01 - 0059 - 03盞氣養(yǎng)陰合劑處方源于本院中醫(yī)的臨床有效經(jīng)驗(yàn)方，由黃先，人參，黃精，枸杞子，女貞子，車前子（包），菟絲子，延胡索，乳香，沒藥，姜厚樸，甘草，粉丹皮等中藥組成，臨床上主要JH下治療帶狀皰疹神經(jīng)痛后遺癥。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效，采Hj高效液相色譜法對主要藥味姜厚樸的主要成分厚樸酚、和厚樸酚的含量進(jìn)行含量測定，對主要藥味延胡索的主要成分延胡索乙素的含量進(jìn)行含量測定。1 材料1.1 儀器島津LC - 10AT高效液相色譜儀，SPD - 10Avp紫外檢測器，CLASS - VP色譜T作站。Meter AE240電子天平。1.2 藥品與試劑 益氣養(yǎng)陰合劑（自制，批號：140122、140214，140220）；厚樸酚（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110729 - 200412，供含量測定用用）；和厚樸酚（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110730 - 201313，供含量測定用）；延胡索乙素（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110726 - 201112，供含量測定用）甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。2方法與結(jié)果2.1 厚樸酚、和厚樸酚的含量測定2.1.1 色譜條件[1]色譜柱：大連依利特Hypf：rs11ODS2（ 150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇：水（75：25，v/v）；流速：1.0mL/ min；檢測波長：294 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣最：對照品10 μL，供試品10μL。理論塔板數(shù)按厚樸酚汁算心小低于5000。2.1.2供試品溶液的制備取本品10 mL，用稀乙醇溶液稀釋至25 mL，離心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。2.1.3對照品溶液的制備 取厚樸酚、和厚樸酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含厚樸酚54.4 vg的溶液，含和厚樸酚41.6 Vg的溶液，即得。2.1.4缺姜厚樸陰性對照溶液的制備 取本處方中缺姜厚樸的其余藥材，按本品制法制成陰牲樣品，再按“2.1.2”項(xiàng)下.的方法制備缺姜厚樸的陰性對照溶液。2.1.5線性關(guān)系考察精密吸取厚樸酚、和厚樸酚對照品溶液5、8、10、12、15μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以厚樸酚、和厚樸酚的進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得和厚樸酚回歸方程為y= 2178123x+ 22078. 39（r=0.9999）。結(jié)果表明，和厚樸酚的進(jìn)樣量在0.208～0.624μg范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。得厚樸酚回歸方程為y= 2066916x+ 2525. 511（r=0. 9998）。結(jié)果表明，厚樸酚的進(jìn)樣量在0.272～0.816 μg范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。2.1.6精密度試驗(yàn)精密吸取厚樸酚、和厚樸酚對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，RSD=1.27%（n=6），表明儀器精密度良好。2.1.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液適量，分別于0，l，2，4，8，2.1.9加樣回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的同一批樣品適量，分別精密加入厚樸酚、和厚樸酚對照品，按”2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1.12，24 h按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示.RSD=1.45%（n=7），表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.1.8重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中厚樸酚、和厚樸酚的含量。結(jié)果顯示，每1mL樣品平均含和厚樸酚0.0624 mg，厚樸酚0.143 mg，RSD=1.34% （n =6），表明本方法重復(fù)性良好。2.1.9空白試驗(yàn)取陰性樣品溶液10 mL，按2.1.2項(xiàng)下進(jìn)行測定，結(jié)果缺姜厚樸的陰性樣品溶液在厚樸酚、和厚樸酚對照品色譜峰相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，表明：陰性樣品沒有干擾（見圖1）。2.1.10樣品含量測定 取3批益氣養(yǎng)陰合劑各適量，分別按“2. 12”項(xiàng)下制備供試品溶液，冉按上述色譜條件進(jìn)樣測定記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中厚樸酚、和厚樸酚的含量，每批樣品平行測定3次，結(jié)果見表2.色譜圖見圖1.2.2延胡索乙素的含量測定2.2.1 色譜條件[2]色譜柱：大連依利特Hypersi10DS2（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺調(diào)PH至6.0）（55：45，v/v）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL。理論塔板數(shù)按延胡索乙素計(jì)算應(yīng)不低于6000。2.2.2供試品溶液的制備取本品10 mL，加甲醇溶液至25 mL稀釋，離心，取上清液，置棕色量瓶中，即得。2.2.3對照品溶液的制備取延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含42.4μg的溶液，即得。2.2.4缺延胡索陰性對照溶液的制備取本處方中缺延胡索的其余藥材，按本品制法制成陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備缺延胡索的陰性對照溶液。2.2.5線性關(guān)系考察精密吸取延胡索乙素對照品溶液5、8、10、12、15μL，，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以延胡索乙素的進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性同歸，得同歸方程為Y=889408. 3x+ 10557. 46（r=0.9998）。結(jié)果表明，延胡索乙素的進(jìn)樣量在0. 212～0.636μg范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。2.2.6精密度試驗(yàn) 精密吸取延胡索乙素對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測定，記錄峰麗積。結(jié)果顯示，RSD=1.17（n=6），表明儀器精密度良好。2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液適量，分別于0，2，4，6，8，10，12 h按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，RSD=1.45%（n=7），表明供試品溶液12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.2.8重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，冉按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中延胡索乙素的含量，結(jié)果顯示，每1mL樣品平均含延胡索乙素0.089 mg，RSD=1.23%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。2.2.9空白試驗(yàn)取陰性樣品溶液10 ml，按2.2.2項(xiàng)F進(jìn)行測定，結(jié)果缺延胡索的陰性樣品溶液在延胡索乙素對照品色譜峰相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，表明：陰性樣品沒有干擾（見圖2）。2.2. 10加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的同一批樣品適量，分別精密加入延胡索乙素對照品，按”2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1.2.2. 11樣品含量測定取3批益氣養(yǎng)陰合劑各適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)樣測定記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中延胡索乙素的含量，每批樣品平行測定3次，結(jié)果見表2.色譜圖見圖2.3討論

筆者在本質(zhì)量控制中建立了厚樸酚、和厚樸酚的含量測定方法。在流動相的選擇中，筆者比較了甲醇一水（ 75：25.v/v）與乙腈一水（45：55，v/v）的分離效果，結(jié)果表明后者分離度不符合要求，而后者對應(yīng)的咖啡酸保留試劑與分離度均符合要求。故選擇甲醇一水（75：25，v/v）為流動相，筆者為測定延胡索中延胡索乙素含量，在流動相選擇中，比較了甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺調(diào)PH至6.0）（55：45，v/v）、乙腈-0. 6%冰醋酸溶液（用三乙胺調(diào)PH至6.0）（41：59，v/v），結(jié)果表明后分離度不符合要求，而甲醇：0.1%磷酸溶液系統(tǒng)分離效果好，故選擇甲醇：0.1%磷酸溶液（用三乙胺調(diào)PH至6. 0） （55：45，v/v）為流動相，

綜上所述，本方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于益氣養(yǎng)陰合劑的質(zhì)量控制。參考文獻(xiàn)：[I]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[s]（一部）.中國醫(yī)藥科 技出版禮，2010：1235.[2]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典[S]（一部）中國醫(yī)藥科 技出版社，2010：882.（收稿日期：2014-08-12）