用HPLC 法測(cè)定蒙藥銀露梅槲皮素含量△

包滿節(jié) 烏仁圖雅

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) 蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

銀露梅為薔薇科植物銀露梅Potentilla glabra Lodd.的莖枝。蒙藥常用藥材，蒙文名稱孟根—烏日阿拉格，銀露梅枝有固齒、鎮(zhèn)赫依，燥“協(xié)日烏素”，用于牙病，肺病，胸肋脹痛，胸肋脹滿，“協(xié)日烏素”?。?］。銀露梅主含槲皮素、三萜類成分及鞣質(zhì)等有效成分，其中槲皮素的高效液相方法較多，且方法成熟，故以槲皮素的含量作為其質(zhì)量控制指標(biāo)［2］。

1 儀器與試藥

島津LC ～10AP 高效液相色譜儀、N2000 色譜工作站(浙江大學(xué)智達(dá)信息有限公司)、SPD ～10A 型紫外檢測(cè)器。LGC—1025M 柱溫箱、AB135 -S 型電子分析天平(梅特勒-托利多)、KQ-250 型超聲波清洗機(jī)(鞏義予華儀器廠)。試劑：甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

槲皮素對(duì)照品：購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0081 ～9304，(供含量測(cè)定用)，銀露梅樣品：內(nèi)蒙古賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)，內(nèi)蒙古大青山劈柴溝，內(nèi)蒙古蠻罕山，國(guó)家蒙藥制劑中心。經(jīng)內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)所蒙藥科專家鑒定為薔薇科植物銀露梅(Potentilla glabra Lodd.)的莖枝。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱：C18 柱(250mm ×4.6mm)，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm，流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶ 50)，流速：1.0ml/min，理論塔板數(shù)按槲皮素計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取槲皮素對(duì)照品0.017g，加甲醇定容至100mL 容量瓶中，搖勻，即得濃度為0.17mg/mL 的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備：取本藥材粉末(過(guò)40 目篩)約1g，精密稱定置具塞的錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL密塞。稱定重量加熱回流1h 放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失重量。搖勻?yàn)V過(guò)。精密量取續(xù)濾液10mL 加入鹽酸1mL，置90℃水浴中加熱回流1h，取出，迅速冷卻。轉(zhuǎn)移至25mL 容量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性范圍的考察：精密吸取槲皮素對(duì)照品溶液(濃度為0.17mg/mL)1.5mL，2.5mL，5mL，7.5mL，10mL，分別定容于100mL 容量瓶中，搖勻，得到濃度分別為0.00255mg/mL，0.00425mg/mL，0.0085mg/mL，0.0125mg/mL，0.0170mg/mL，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，以取樣量為X 軸，峰面積為為Y 軸得回歸方程Y=2E+0.6X-18494，r=0.9998。結(jié)果表明：槲皮素在0.0255 ～0.1700μg 范圍內(nèi)，峰面積值與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)：取內(nèi)蒙古賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)樣品，精密稱定，按供試品溶液制備方法制成精密度試驗(yàn)溶液，精密吸取溶液10μL，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5 次，測(cè)得RSD 為1.14%。表明該系統(tǒng)精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)：取內(nèi)蒙古賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)樣品5份，每份約2.0g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制成重現(xiàn)性試驗(yàn)溶液，精密吸取溶液10μl，注入液相色譜儀，結(jié)果RSD 為1.68%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密稱內(nèi)蒙古賽罕烏拉自然保護(hù)區(qū)樣品，按供試品溶液制備方法制成穩(wěn)定性試驗(yàn)溶液，分別在0、1、2、3、8h 時(shí)，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測(cè)得槲皮素峰面積的RSD 為1.185%。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液在8h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品(重復(fù)性試驗(yàn)中的樣品)六份，每份約1.0g，精密稱定，加入適量的槲皮素對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制成加樣回收試驗(yàn)溶液。分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定平均回收率為96.72%，RSD 為2.169。加樣回收率良好，見(jiàn)表1。

2.9 樣品含量測(cè)定：取本藥材粉末1.0g，分別精密稱定，按供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，各精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，見(jiàn)表2。

序號(hào) 取樣量(g) 樣品中對(duì)照品的量(mg) 加入對(duì)照品的量(mg) 測(cè)得總量(mg) 加樣回收率(%)平均值(%) RSD(%)1 0.9854 1.1194 0.3024 1.4077 95.34 2 0.9910 1.1257 0.3024 1.4154 95.80 3 1.0020 1.1383 0.9072 2.0410 99.50 4 1.0050 1.1417 0.9072 2.0410 99.13 5 0.9905 1.1252 0.6048 1.6961 94.39 6 0.9920 1.1269 0.6048 1.7086 96.18 96.72 2.169

藥材來(lái)源 取樣量(g) 峰面積1 峰面積2(mg/g) 含量1(mg/g) 含量2(mg/g) 平均含量(mg/g).1126拉自然保護(hù)區(qū) 1.0380 158979.797 156206.594 1.0988 1.0978 1.0983內(nèi)蒙古大青山 1.0010 189671.703 200268.297 1.3500 1.4255 1.3878劈柴溝 1.0021 202424.234 203613.906 1.4189 1.4337 1.4263內(nèi)蒙古蠻罕山 1.0012 116295.500 116407.203 0.8386 0.8394 0.8390 1.0003 115419.797 120510.555 0.8331 0.8698 0.8514國(guó)家蒙藥制劑中心 1.0011 237091.797 237753.797 1.6989 1.7036 1.7013 1.0007 235552.000 235117.813 1.6885 1.6854 1.6870內(nèi)蒙古賽罕烏 1.0530 163458.297 163159.594 1.1136 1.1116 1

3 討論

3.1 本試驗(yàn)所用樣品均經(jīng)過(guò)了原植物鑒定，并在試驗(yàn)前進(jìn)行了性狀比較與鑒定，確保了試驗(yàn)結(jié)果的一致性。

3.2 本試驗(yàn)建立了蒙藥銀露梅含量測(cè)定方法，定量精密度高，穩(wěn)定性好，可作為蒙藥銀露梅的質(zhì)量控制重要項(xiàng)目。

［1］那生桑.蒙藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究［M］.呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，2007：632 -633.

［2］孫文基，謝世昌，天然藥物成分定量分析［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2003：400 - 403.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典附錄［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：47 - 53.

［4］吳寧遠(yuǎn)，郭曉宇，陳建平，等.枝葉中鞣質(zhì)的提取和含量測(cè)定［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014;36(1)：35 -43.