不同施灸方法對模型大鼠衰老相關(guān)因素的影響研究

布仁圖亞 斯欽圖

(1.赤峰市蒙醫(yī)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000;2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

1 材料與方法

1.1 動物：110 只純種4 月齡SD 大鼠，體重為雄性304 ±30g、雄性376 ±40 g、雌雄各半。

1.2 器材：755B 紫外-可見分光光度機(jī)、固定熱水盒、電子分析天平、高速冷凍離心機(jī)、4-20 0C 和-80 0C 冰箱、水迷宮、游泳盒。

1.3 試劑及施灸器：AUY120 型電子天平、MORRIS 水迷宮視屏跟蹤分析機(jī)、D-半乳糖(上海楷洋生物技術(shù)有限公司，編號：T0047)、艾灸由北京中醫(yī)醫(yī)藥大學(xué)提供。

2 方法

2.1 分組：將110 只SD 大鼠按體重隨機(jī)分成11 組。分別為正常對照組、模型對照組、治療組(用正交試驗L9(34)設(shè)計組為：第1、2、3、4、5、6、7、8、9 組)。造模前將大鼠雌雄分開、在干凈舒適環(huán)境中飼養(yǎng)。每天將更換顆粒資料飲水和窩墊。試驗第六wk 開始分別對所進(jìn)資料和飲水量進(jìn)行記錄。

2.2 造模：成正常對照組外均用D-半乳糖按每wk 體重每日150mg/kg 的比例頸皮下注射，正常對照組注射同等劑量生理鹽水。在造模期間每wk 稱一次大鼠體重，并觀察大鼠運(yùn)動舉止和皮毛的顏側(cè)色等外部特征。造模時間為6wk。出現(xiàn)大鼠皮毛顏色變黃脫落，眼光變呆，動作緩慢，出現(xiàn)無精打采、駝背、怕冷，體重增加不明顯等外部特征，與文獻(xiàn)報道一致［2-5］，即造模成功。

3 標(biāo)本收集及檢測方法

采用斷頭取血方法，將新取處的血放入低速離心機(jī)，按3500rpm 的速度離心15min 后提取血清。超氧化歧酶(SOD)活性采用黃嘌呤氧化酶法測定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法測定，過氧化氫酶(CAT)含量采用比色法測定。

4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用正交設(shè)計助手v3.1 軟件處理。

5 結(jié) 果

5.1 造模狀況：正常對照組與模型對照組比較，體重有明顯的差異(P＜0.01)，表明造模后模型對照組體重增長變化緩慢，見表1。

造模后各灸療組與模型組大鼠體重比較，各灸療組大鼠體重增加比模型組快(P＜0.05)，說明造模成功后模型組大鼠體重增長受限，見表2。

除此之外，我們還觀察到，模型大鼠動作比正常對照組拜年遲緩，毛色枯黃，精神萎靡不振等外部特征。

表1 造模3wk 后正常對照組與模型對照組大鼠體重比較(±s，n=10)

表1 造模3wk 后正常對照組與模型對照組大鼠體重比較(±s，n=10)

組別 體重(g)P 316.82 ±23.49 ＜0.05模型對照組正常對照組283.76 ±27.32 ＜0.05

表2 造模后各灸療組和模型對照組大鼠體重比較(±s，n=10)

表2 造模后各灸療組和模型對照組大鼠體重比較(±s，n=10)

注：各灸療組與模型對照組比較，☆P ＜0.05。

組別 體重模型對照組311.12 ±22.03治療1 組 340.64 ±45.98☆治療2 組 338.90 ±37.53☆治療3 組 340.87 ±41.09☆治療4 組 342.07 ±39.78☆治療5 組 354.98 ±35.56☆治療6 組 365.87 ±35.78☆治療7 組 342.09 ±35.98☆治療8 組 357.50 ±32.98☆治療9 組 337.25 ±38.36☆

5.2 正交設(shè)計優(yōu)化SOD 的活性

5.2.1 SOD 的因素及水平：根據(jù)文獻(xiàn)參考資料確定時間、灸墊、直徑作為考查因素缺，以測定SOD 的活性為考察指標(biāo)，選用L9(34)正交表進(jìn)行試驗。因素及水平見表3。

表3 因素水平設(shè)計表

5.2.2 試驗方法：按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗，并將測定結(jié)果填于表4 中，見表3、表4。

表4 SOD 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗結(jié)果

5.2.3 結(jié)果：從直觀分析及方差分析可知：SOD 的活性優(yōu)化。A、B、C 各因素水平之間均無顯著性差異，最佳SOD 的活性條件為A2B2C1 即為：用10min 時間0.2cm 灸墊0.8的直徑。

表5 方差分析

5.2.4 試驗方法：按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗，并將測定結(jié)果填于表6 中，見表3、表6。

表6 MDA 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗結(jié)果

續(xù)表6 MDA 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗結(jié)果

5.2.5 結(jié)果：從直觀分析及方差分析可知：MDA 的活性優(yōu)化。A、B、C 各因素水平之間均無顯著性差異，最佳MDA的活性條件為A2B2C2 即為：用10min 時間、0.2cm 灸墊、1.0 的直徑。

表7 方差分析

5.2.6 試驗方法：按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗，并將測定結(jié)果填于表8 中，見表3 表8。

表8 CAT 的活性優(yōu)化L9(34)表及實(shí)驗結(jié)果

5.2.7 結(jié)果：從直觀分析及方差分析可知：CAT 的活性優(yōu)化。A、B、C 各因素水平之間均無顯著性差異，最佳CAT 的活性條件為A2B2C2 即為：用10min 時間、0.2cm 灸墊、1.0的直徑。

表9 方差分析

6 結(jié)論與討論

根據(jù)上述試驗，不同施救方法對SOD 的活性最佳時間為10min、灸墊為0.2cm、直徑為0.8cm，MDA 的活性最佳時間為10min、灸墊為0.2cm、直徑為1.0cm，CAT 最佳時間為10min、灸墊為0.2cm、直徑為1.0cm。

本實(shí)驗通過正交設(shè)計對SOD 活性、CAT 和MDA 的含量進(jìn)行了優(yōu)化，通過多個因素、多個水平研究表明，蒙醫(yī)不同的灸療法施灸后可提高免疫功能。

［1］斯欽圖，烏云格日樂，“胃穴”“火降穴”施灸對功能性消化不良大鼠的影響及其組穴原理［J］，針灸臨床雜志，2008，3，(24)：163-165.

［2］徐智，吳國明，錢桂生，大鼠衰老模型的初步建立［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2003，4(25)：9-11.

［3］博·阿古拉，蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法大成［M］. 赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，2000，3：172-174.

［4］朱亞診，朱虹光，D-半乳糖致衰老動物模型的建立及其檢測方法［J］. 針灸臨床雜志，2010，3，(14)：160-161.

［5］斯欽圖，博·阿古拉等，蒙醫(yī)灸療法抗衰老二三穴組穴配伍規(guī)律試驗研究［J］.期刊，2010，12(6)：48-49.

［6］烏云格日樂，斯欽圖. 蒙醫(yī)灸療的保健作用及其機(jī)理［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2007，4(4)：122-124.