褥瘡冰蜜濕敷劑中單味藥的抗菌實驗研究

饒軍英，金必成，周燕，馬凱，韓志

(1.貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 骨一科，貴州 貴陽 550003；2.貴州電力醫(yī)院 外科，貴州 貴陽 550002)

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褥瘡冰蜜濕敷劑中單味藥的抗菌實驗研究

饒軍英1，金必成2，周燕1，馬凱1，韓志1

(1.貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 骨一科，貴州 貴陽 550003；2.貴州電力醫(yī)院 外科，貴州 貴陽 550002)

目的 研究褥瘡冰蜜濕敷劑中冰片、蜂蜜、慶大霉素單味藥間的抗菌作用。方法 用金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli ，E.coli)、銅綠假單孢桿菌(Pseudomonasaeruginosa，P.aeruginosa)分別制作三期感染褥瘡動物模型，以凡士林為對照組，分為12組，即凡士林-S.aureus組，凡士林-E.coli組，凡士林-P.aeruginosa組；蜂蜜-S.aureus組，蜂蜜-E.coli組，蜂蜜-P.aeruginosa組；冰片-S.aureus組，冰片-E.coli組，冰片-P.aeruginosa組；慶大霉素-S.aureus組，慶大霉素-E.coli組，慶大霉素-P.aeruginosa組；每組6只大白兔，分別用蜂蜜、冰片、慶大霉素制作成換藥紗布治療褥瘡，取治療前后組織做菌落計數(shù)觀察。結(jié)果 冰片組(F= 11.059，P<0.01)，表明冰片培養(yǎng)的各組計數(shù)有差別；時間×菌種 (F=11.281，P=0.009)，2組之間相互作用不明顯；慶大霉素組(F= 7.99，P=0.000)，表明慶大霉素培養(yǎng)的各組計數(shù)有差別；時間×菌種(F=12.531，P<0.07)，表明2組之間相互作用明顯。冰片對P.aeruginosa無抗菌作用，對S.aureus和E.coli有一定的抗菌作用；慶大霉素對上述3種細菌的抗菌作用良好，對P.aeruginosa的抗菌作用尤為顯著。結(jié)論 濕敷劑中單味藥慶大霉素的抑菌作用優(yōu)于冰片，蜂蜜無抗菌作用。

褥瘡冰蜜濕敷劑；三期褥瘡；抗菌效果；冰片；蜂蜜；慶大霉素

“褥瘡冰蜜濕敷劑”(簡稱“濕敷劑”)亦稱冰蜜膏、冰蜜生肌膏，由冰片、蜂蜜、慶大霉素組成，有較好的去腐生肌作用，貴陽中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院骨一科將其廣泛應(yīng)用于開放性損傷、感染的換藥治療，療效顯著；骨一科曾報道過其生肌作用[1-2]，也考察過褥瘡冰蜜濕敷劑中慶大霉素的抗菌、生肌療效[3]，但未曾對其抗菌作用做進一步的實驗研究，因方中蜂蜜不耐高溫，無法將制劑高溫滅菌，本科在無菌條件下配置，未予高溫滅菌，放置40 d仍無細菌生長[4]，臨床應(yīng)用中未發(fā)生一例感染加重的情況。本研究分別對冰片、蜂蜜、慶大霉素單味藥冰片+蜂蜜、冰片+慶大霉素、蜂蜜+慶大霉素、冰片+蜂蜜+慶大霉素組方藥對金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli，E.coli)、銅綠假單孢桿菌(Pseudomonasaeruginosa，P.aeruginosa)的的抗菌效果研究，為臨床應(yīng)用此濕敷劑不滅菌、常溫保存提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 大白兔72只，雄性，體質(zhì)量2.8～3.0 kg(購自貴陽醫(yī)學(xué)院試驗動物中心，動物合格證號：SCXK(黔)2012-0001)。

1.2 藥物 蜂蜜300 g、冰片50 g、慶大霉素40 mL(160萬U)，生理鹽水160 mL(用于濕潤紗布，幫助冰片粘附，稀釋慶大霉素)；研為細粉的冰片，凡士林紗布(本院藥劑科提供)；硫酸慶大霉素注射液(購自光正制藥有限公司)；“紫云英”蜂蜜(購自湖北省定州市北方科技養(yǎng)蜂廠)。

1.3 主要菌種S.aureus(ATCC25923)、P.aeruginosa (ATCC27853)、E.coli(ATCC25922)標(biāo)準(zhǔn)菌株(購自上海坤肯生物化工有限公司)。

1.4 儀器 Olympus BX51光學(xué)顯微鏡(蘇州易微光學(xué)有限公司)；JB5374-19電子天平(美國雙杰集團有限公司，常熟市雙杰測試儀器廠)；法國梅里埃細菌鑒定儀(上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司)。

1.5 方法

1.5.1 菌液制備：分別將S.aureus、E.coli、P.aeruginosa標(biāo)準(zhǔn)菌株加入1 mL肉湯中，混勻，接種血平板，37 ℃恒溫孵育箱培養(yǎng)24 h，觀察菌落生長情況，菌落用生理鹽水調(diào)成0.5麥?zhǔn)蠁挝?，配制菌液，放? ℃～7 ℃保溫桶中2 h內(nèi)接種。

1.5.2 濕敷劑紗布制備：高溫將4個搪瓷容器消毒，分別裝蜂蜜300 g，冰片50 g+生理鹽水100 mL，慶大霉素40 mL+生理鹽水60 mL；凡士林紗布(對照組)，前3組加入相同重量的消毒紗布，充分混勻，制成單味藥紗布，冰片組加生理鹽水為了潤濕紗布，以增加冰片的粘附性，慶大霉素組加生理鹽水，為了與冰片組計量相等，配制完畢置常溫備用。

1.5.3 動物分組與造模：適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機分為12組，即凡士林-S.aureus組，凡士林-E.coli組，凡士林-P.aeruginosa組；蜂蜜-S.aureus組，蜂蜜-E.coli組，蜂蜜-P.aeruginosa組；冰片-S.aureus組，冰片-E.coli組，冰片-P.aeruginosa組；慶大霉素-S.aureus組，慶大霉素-E.coli組，慶大霉素-P.aeruginosa組；每組6只大白兔，分別用于抗菌實驗。

稱取2～3 g的12枚無菌棉球，分別植于6只大白兔兩側(cè)臀部皮下，3副5 mL消毒空針分別抽吸以上配制的菌液4 mL，從傷口處浸濕棉球，縫合皮膚，種植前常規(guī)脫毛，消毒，觀察5～8 d，待局部紅腫全層皮膚破潰，潰瘍形成后取出棉球，若皮下脂肪組織外露，可見膿性分泌物，三期感染褥瘡即可形成。相同方法在其余組中進行。

1.5.4 炎性標(biāo)本制作：第一次標(biāo)本：在三期感染褥瘡生成但未治療前的傷口內(nèi)取3個標(biāo)本，每個標(biāo)本重精密稱定1 g，隔天換藥1次，用生理鹽水沖洗傷口(未用消毒藥水)，單層上述制備的濕敷劑紗布及6層消毒干紗布覆蓋創(chuàng)面，換藥3次后的第2天，分別為每個創(chuàng)面取3個1 g檢測標(biāo)本。

1.5.5 指標(biāo)檢測：

① 細菌鑒定：將所取標(biāo)本1 g放入盛有5 mL生理鹽水的無菌器皿中，旋渦混合器將標(biāo)本和生理鹽水充分混勻，取1 mL加肉湯2 mL增菌，接種血平板，37 ℃恒溫孵育箱培養(yǎng)24 h，肉眼觀察菌落形態(tài)，挑起菌落涂片，行革蘭氏染色，100倍油鏡下觀察細菌形態(tài)，用法國梅里埃細菌鑒定儀確定是否為已種植的標(biāo)準(zhǔn)菌株，確定細菌是否種植成功；

② 菌落計數(shù)：同時取上述混勻后的含菌溶液用定量接種環(huán)取10 μL溶液接種血平板，37 ℃恒溫孵育箱培養(yǎng)24 h后計數(shù)，讀取血平板上菌落數(shù)，若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則將所取標(biāo)本1 g放入盛有10 mL或15 mL生理鹽水的無菌器皿中增加稀釋倍數(shù)，旋渦混合器充分混勻，若連續(xù)2個稀釋度的平板菌落數(shù)在30～300 CFU時，確定此2個菌落數(shù)的平均值，用公式N=∑C/(n1+0.1n2)d計算出每毫升標(biāo)本的菌落總數(shù)，N：樣品中菌落數(shù) ，ΣC：平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和 ，n1：第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個數(shù) ，n2：第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個數(shù) ，d：稀釋因子(第一稀釋度)若細菌種植不成功，則此例標(biāo)本不納入統(tǒng)計。

2 結(jié)果

各組間菌落計數(shù)結(jié)果見表1，方差分析結(jié)果見表2、表3。冰片組(F=11.059，P<0.01)，表明冰片培養(yǎng)的各組計數(shù)有差別；時間×菌種(F=11.281，P=0.009)，2組之間交互作用不明顯；慶大霉素組(F= 7.99，P=0.000)，表明慶大霉素培養(yǎng)的各組計數(shù)有差別；時間×菌種 (F=12.531，P<0.07)，表明2組之間交互作用明顯。

表1 各組間的菌落計數(shù)(n=2)Tab.1 Colony count among the groups(n=2)

表2 各組間效果比較

Tab.2 Comparision of effect among groups

因變數(shù):培養(yǎng)計數(shù)

a.R2=0.997(調(diào)整的R2=0.994)

表3 組別與個因素之間的關(guān)系Tab.3 The relationship among groups with factors

3 討論

中藥透皮給藥治療是中藥傳統(tǒng)給藥方式之一，在臨床上發(fā)揮著重要的作用。而透皮促進劑對于藥物的透過吸收效率起著至關(guān)重要的作用。近年, 開發(fā)尋找天然成分作為透皮促進劑已成為研究熱點之一[4-7]。牟家琬等[8]用冰片進行體外抗菌實驗，結(jié)果表明冰片在較低濃度時有抑菌作用，在高濃度時有殺菌作用；而且與冰片的接觸時間越長，抗菌效果也隨之增強。本處方中冰片經(jīng)皮促透作用的機制可能與其影響細胞內(nèi)Ca2+濃度，改變活性表皮角質(zhì)，形成細胞膜電位和膜電流性有關(guān)[9]，能使皮膚角質(zhì)細胞疏松、細胞間隙增大、毛囊口孔徑加寬等，有促進藥物吸收的功效[10]。因蜂蜜具有吸濕性,從空氣中吸取水分后向容器深部擴散，使?jié)舛认陆?易引起蜂蜜發(fā)酵。故存放時一定要將容器口蓋緊, 嚴防水分進入，若貯存溫度在10 ℃以下一般不會引起發(fā)酵, 這是因為酵田菌在這種溫度下不會生長。在13 ℃～14 ℃ 時蜂蜜容易結(jié)晶[11]。慶大霉素主要用于大腸桿菌、痢疾桿菌、克雷伯肺炎桿菌、變形桿菌，銅綠桿菌等革蘭陰性菌引起的系統(tǒng)或局部感染(對中樞感染無效)[12]。

本課題通過對濕敷劑中冰片、蜂蜜、慶大霉素單味藥的抗菌實驗研究證實，蜂蜜與對照組中的凡士林對本實驗的3種細菌無抗菌作用，冰片對P.aeruginosa無抗菌作用，對S.aureus和E.coli有一定的抗菌作用；慶大霉素對上述3種細菌的抗菌作用良好，對P.aeruginosa的抗菌作用尤為顯著。

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[12] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：78.

(編校：王冬梅)

Study on antimicrobial effects of single herbs in wet Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent

RAO Jun-ying1, JIN Bi-cheng2, ZHOU Yan1, MA Kai1, HAN Zhi1

(1.Department of First Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine Guiyang, 550003, China; 2.Department of Surgery, Guizhou Dianli Hospital, Guizhou 550002, China)

ObjectiveTo study the antibacterial effect of borneol, honey, gentamicin in Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent.MethodStaphylococcusaureus(S.aureus),Escherichiacoli(E.coli),Pseudomonasaeruginosa(P.aeruginosa) were used to produce the third phase of infection decubitus animal models,respectively.Vaseline as the control group, divided into 12 groups:Vaseline-S.aureus,Vaseline-E.coli,Vaseline-P.aeruginosa;Honey-S.aureus,Honey-E.coli,Honey-P.aeruginosa;Borneol -S.aureus;Borneol -E.coli;Borneol-P.aeruginosa;Gentamicin-S.aureus;Gentamicin-E.coli;Gentamicin-P.aeruginosa;6 rabbits in each group.Honey,borneol,gentamicin was made into a gauze in treatment for decubitus .Organizations do strain identification and colony counts was observed before and after taking the treatment.ResultsBorneol group(F= 11.059,P<0.01).,there was differences of each groups count cultured by borneol;Time×Strains(F=11.281,P=0.009),there was no significant interaction between the two groups;gentamicin(F= 7.99,P=0.000),gentamicin culture showed a difference in each group count;Time×Strains(F=12.531,P<0.07),interaction between the two groups showed significant.Borneol has no antibacterial effects onP.aeruginosa , had a certain antibacterial activityonS.aureus andEcoli;gentamicin had good antibacterial effect on the three kinds of bacteria, and againstP.aeruginosa was particularly significant.ConclusionThe antibacterial activity of gentamicin is better than single herbs borneol in Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent, honey has no antibacterial effect.

Ruchuang Bingmi hydropathic compress agent; the third phase of infection decubitus; antimicrobial effects;borneol;honey; gentamicin

貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)科研項目(QZYY2012-19)

饒軍英，女，本科，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：創(chuàng)傷骨科，E-mail:1049613459@qq.com。

R969.4

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1005-1678(2015)07-0050-03