復(fù)方血栓通膠囊對下肢靜脈血栓患者血清纖溶serpine1、α-serpine1蛋白及KLF2影響研究

張昌林，向勇，劉安德，徐菁昊，羅伍，龍雙有

(貴州省安順市人民醫(yī)院 內(nèi)鏡科，貴州 安順 561000)

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復(fù)方血栓通膠囊對下肢靜脈血栓患者血清纖溶serpine1、α-serpine1蛋白及KLF2影響研究

張昌林，向勇，劉安德，徐菁昊，羅伍，龍雙有

(貴州省安順市人民醫(yī)院 內(nèi)鏡科，貴州 安順 561000)

目的 探討復(fù)方血栓通膠囊對下肢靜脈血栓患者血清纖溶酶原激活物抑制劑(serpine1)、α-抗胰蛋白酶1(α-serpine1)蛋白及Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子2(KLF2)的影響。方法 選取貴州省安順市人民醫(yī)院已確診為下肢靜脈血栓形成的患者44例，隨機(jī)分為實驗組和對照組，各22例，患者均給予常規(guī)抗血小板治療，實驗組在此基礎(chǔ)上給予復(fù)方血栓通膠囊1.5 g/次，3次/天口服，對照組給予脈絡(luò)舒通顆粒20 g/次，3次/天沖服。2周為1個療程，治療3個療程。治療前后檢測2組患者血清serpine1、α-serpine1蛋白及KLF2含量、血液流變學(xué)、凝血功能指標(biāo)。結(jié)果 與對照組比較，實驗組患者的療效更好，表現(xiàn)為：血清serpine1、α-serpine1蛋白含量顯著降低(P<0.05)； KLF2表達(dá)量明顯升高(P<0.05)；血液粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉速度明顯降低(P<0.05)；FIB、D-D含量明顯降低(P<0.05)。結(jié)論 復(fù)方血栓通膠囊可以降低下肢靜脈血栓患者血清serpine1、α-serpine1蛋白含量，促進(jìn)KLF2表達(dá)，降低血液粘度、血沉速度，改善患者的高凝狀態(tài)，取得良好的臨床療效。

復(fù)方血栓通膠囊；下肢靜脈血栓；纖溶系統(tǒng)

下肢深靜脈血栓形成(deep venous thrombosis，DVT)是臨床常見疾病，是血液于深靜脈腔內(nèi)不正常的凝結(jié)，并阻塞靜脈腔，導(dǎo)致下肢靜脈回流障礙，多年來其發(fā)病率高達(dá)50%，在周圍血管疾病中占40%左右[1]。歐美國家DVT發(fā)病率為1.0～1.6/1000[2]，近年來增加了33.1%，我國DVT的發(fā)病率目前認(rèn)為稍低于歐美國家，但有逐年上升的趨勢。DVT大多繼發(fā)于手術(shù)、創(chuàng)傷、長期臥床、惡性腫瘤等疾病，容易引起肺栓塞等并發(fā)癥[3]，嚴(yán)重危害人們的生命健康。目前，對于慢性DVT，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用抗血小板抗凝藥物，但此類藥物容易引起消化道潰瘍，導(dǎo)致消化道出血等發(fā)生，比較來說，中成藥物的副作用較少。中醫(yī)認(rèn)為，DVT屬于“股腫”、“脈痹”、“腫脹”的范疇[4]，與瘀血阻絡(luò)有關(guān)，治療應(yīng)該活血化瘀為主。復(fù)方血栓通膠囊由活血行氣的藥物組成，具有活血化瘀的功效，已有研究顯示具有活血化瘀，擴(kuò)張血管，降低血黏度，促進(jìn)血液循環(huán)，提高機(jī)體抗缺氧的能力抗血栓形成的作用，在糖尿病視網(wǎng)膜病變的治療上取得了良好的臨床療效[5]；DVT也屬于血栓形成性疾病，然而，目前關(guān)于復(fù)方血栓通膠囊治療DVT的臨床研究較少。因此，本研究通過對DVT患者血清serpine1、α-serpine1蛋白及KLF2、凝血功能、血流變的檢測，探討復(fù)方血栓通膠囊對DVT患者的影響及作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集貴州省安順市人民醫(yī)院2013年6月～2015年6月的確診為下肢靜脈血栓形成的患者44例。其中男性23例，年齡27～74歲，平均年齡(50.4±5.9)歲；女性21例，年齡25～75歲，年齡(52.2±6.1) 歲；臨床類型中央型16例，周圍型15例，混合型13例。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：診斷依據(jù)根據(jù)2012深靜脈血栓形成的診斷和治療指南(第二版)[6]；排除標(biāo)準(zhǔn)：①病程<3周或病程>6個月；②伴有凝血功能障礙、再障等血液系統(tǒng)疾??；③合并惡性腫瘤；④合并嚴(yán)重的肝、腎功能衰竭或心腦血管疾??；⑤近期內(nèi)服用任何抗凝藥物；⑥妊娠及哺乳期婦女；⑦對研究中涉及藥物過敏的患者。

1.2 方法

1.2.1 分組及治療方法：將所有患者隨機(jī)分為實驗組和對照組，每組各22例。實驗組男12例，女10例，年齡26～74歲，平均年齡(51.6±5.3)歲；對照組男性11例，女性11例，年齡25～75歲，平均年齡(52.1±6.4) 歲。2組患者的年齡、性別組成、臨床類型、病程等一般資料無明顯差異。所有患者均給予抬高患肢、臥床休息、鎮(zhèn)痛、阿司匹林抗血小板聚集等常規(guī)治療；實驗組患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上給予復(fù)方血栓通膠囊(廣東眾生藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20030017)1.5 g/次，3次/天口服；在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上給予脈絡(luò)舒通顆粒(魯南厚普制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z19991025)20 g/次，3次/天沖服。2周為1個療程，治療3個療程。

1.2.2 血液指標(biāo)采集：治療前后，所有患者均采集空腹12小時后靜脈血10 mL，取5 mL分離血清，采用臨床檢驗科Rayto雷杜RT-6000全自動酶標(biāo)儀，通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清中serpine1、α-serpine1蛋白及KLF2的含量；其余5 mL血液，采用LBY-N6COMPACT全自動血流變儀(北京普利生)，檢測血流變相關(guān)指標(biāo)高切全血粘度、低切全血粘度、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉等；采用CA1500全自動血凝分析儀(希森美康)，測定血液纖維蛋白原(FIB)、D-二聚體(D-D)等凝血功能相關(guān)指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 治療前后2組患者血清serpine1、α-serpine1蛋白含量比較 治療后2組患者的血清serpine1、α-serpine1蛋白含量均降低(P<0.05)，實驗組患者血清serpine1、α-serpine1蛋白含量與對照組比較較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 治療前后2組患者血清serpine1、α-serpine1蛋白含量比較Tab.1 Comparison of serpine1，α-serpine1 in serum of two ±s)

*P<0.05，與治療前相比，compared with before treatment；#P<0.05，與對照組相比，compared with control group

2.2 治療前后2組患者血清KLF2水平比較 治療后2組患者的血清KLF2表達(dá)水平均升高(P<0.05)，實驗組患者血清KLF2表達(dá)量較對照組較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 治療前后2組患者血清KLF2水平比較±s)Tab.2 Comparison of KLF2 in serum of two ±s)

*P<0.05，與治療前相比，compared with before treatment；#P<0.05，與對照組相比，compared with control group

2.3 治療前后2組患者血液流變學(xué)指標(biāo)比較 治療后2組患者血液流變學(xué)指除對照組紅細(xì)胞聚集指數(shù)外，其余標(biāo)均降低(P<0.05)，與對照組比較，實驗組患者血液粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉速度較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 治療前后2組患者血液流變學(xué)指標(biāo)比較±s)Tab.3 Comparison of the hemorheology of two ±s)

*P<0.05，與治療前相比，compared with before treatment；#P<0.05，與對照組相比，compared with control group

2.4 治療前后2組患者凝血功能比較 治療后2組患者的凝血功能均明顯好轉(zhuǎn)，實驗組患者血液FIB、D-D含量與對照組比較均明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 治療前后2組患者凝血功能比較±s)Tab.4 Comparison of the coagulation function of two ±s)

*P<0.05，與治療前相比，compared with before treatment；#P<0.05，與對照組相比，compared with control group

3 討論

近年來，隨著外科手術(shù)技術(shù)的不斷發(fā)展，下肢靜脈血栓作為常見的手術(shù)合并癥發(fā)病率不斷增加，下肢靜脈血栓導(dǎo)致的靜脈瓣膜功能不全及并發(fā)的肺栓塞時患者勞動力及生命安全的一大危險[7]，有學(xué)者認(rèn)為80%～90%的肺栓塞栓子來源于下肢靜脈血栓[8]，給人們的生命帶來很大威脅，因此，積極防治下肢靜脈血栓形成是研究的重點(diǎn)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對于下肢靜脈血栓的治療主要為溶栓、抗血小板、手術(shù)等手段[9]，但是溶栓易導(dǎo)致栓子脫落，手術(shù)價格昂貴又可形成重復(fù)損傷，均非萬全之策，而中醫(yī)在防治下肢靜脈血栓形成中有自己的特色，值得深入研究。中醫(yī)認(rèn)為，下肢靜脈血栓是由于瘀血阻于陰脈，痹著不通，血行受阻，不通則痛所致，屬于“股腫”、“瘀血”、“脈痹”，治宜養(yǎng)陰行氣，活血化瘀。復(fù)方血栓通膠囊由三七、黃芪、丹參、玄參組成[10]，三七能化癖止血、消腫定痛，黃芪可補(bǔ)氣升陽，利水消腫，丹參功在活血涼血，玄參長于滋陰涼血解毒，諸藥合用，有行氣，活血，化瘀之效。研究表明[11]，復(fù)方血栓通膠囊具有抑制血小板聚集、擴(kuò)張血管、改善內(nèi)皮細(xì)胞功能等作用，具有抗血栓形成的功效。但是，目前關(guān)于復(fù)方血栓通膠囊治療下肢靜脈血栓的臨床研究較少，因此，本研究對治療前后下肢靜脈血栓患者血清serpine1、α-serpine1蛋白及KLF2、凝血功能、血流變等指標(biāo)進(jìn)行檢測，試圖探討復(fù)方血栓通膠囊對下肢靜脈血栓患者的影響。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組患者血清serpine1、α-serpine1蛋白含量與對照組比較明顯降低 (P<0.05)，提示復(fù)方血栓通膠囊能夠使患者血清serpine1、α-serpine1蛋白含量降低。serpine1和α-serpine1都屬于纖溶系統(tǒng)的成員，serpine1可以直接作用于內(nèi)源性纖溶酶原激活物(PA)，降低PA活性，具有抑制纖維蛋白降解的作用，研究發(fā)現(xiàn)[12]，與健康者比較，未治療的DVT患者serpinel水平顯著升高；α-serpine1屬于一種蛋白酶抑制劑，也可以作用于纖溶酶，具有抗纖溶作用。復(fù)方血栓通膠囊降低血清serpine1、α-serpine1蛋白含量，使得纖溶酶活性得到恢復(fù)，纖溶過程不受阻礙，可防止血栓形成。

KLF2是一種與血栓形成關(guān)系密切的轉(zhuǎn)錄因子，能夠調(diào)控內(nèi)皮抗凝基因eNOS等[13]，使其呈高表達(dá)狀態(tài)，促進(jìn)一氧化氮(NO)釋放，抑制血小板活化、聚集，擴(kuò)張血管，防止血栓形成；還能夠通過抑制纖溶酶原激活物抑制劑-1來延長凝血時間，研究發(fā)現(xiàn)，KLF-2在大鼠DVT模型中出現(xiàn)顯著下調(diào)，而在人血液中的表達(dá)情況類似。本研究結(jié)果顯示，實驗組患者血清KLF2表達(dá)量與對照組比較明顯升高(P<0.05)，表明復(fù)方血栓通膠囊能夠上調(diào)KLF-2基因的表達(dá)，發(fā)揮其擴(kuò)張血管、抗血小板的作用。

血流變包括反應(yīng)血液的流動性和粘滯性，高切全血粘度、低切全血粘度、血漿黏度和血沉體現(xiàn)了流動性，紅細(xì)胞聚集指數(shù)體現(xiàn)了粘滯性[13]，這些指標(biāo)數(shù)值上升表明血流緩慢，不能保證組織充足的血、氧供應(yīng)，而且容易誘發(fā)血栓，本研究結(jié)果顯示，實驗組患者血液粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、血沉速度與對照組比較均明顯降低 (P<0.05)，表明復(fù)方血栓通膠囊能夠改善血液粘度及血流速度，保持血流通暢。

FIB為纖維蛋白原，其濃度升高可以使血液粘度上升，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，利于血栓形成；D-D是纖溶過程的標(biāo)記物，其水平增高與纖溶過程亢進(jìn)有關(guān)，臨床上，F(xiàn)IB和D-D同時升高，表明機(jī)體血液處于高凝狀態(tài)，此時血液成分改變，凝血因子大量存在，各種原因引起的高凝狀態(tài)是導(dǎo)致下肢靜脈血栓形成的主要原因之一。本研究結(jié)果顯示，實驗組患者血液FIB、D-D含量與對照組比較均明顯降低 (P<0.05)，表明復(fù)方血栓通膠囊能夠降低血液中FIB、D-D含量，改善血液的高凝狀態(tài)，防止血栓形成。

本實驗通過對下肢靜脈血栓患者血清serpine1、α-serpine1蛋白及KLF2、凝血功能、血流變進(jìn)行檢測分析，證實了復(fù)方血栓通膠囊可以降低下肢靜脈血栓患者血清serpine1、α-serpine1蛋白含量，促進(jìn)KLF2表達(dá)，降低血液粘度、血沉速度，改善患者的高凝狀態(tài)，取得良好的臨床療效。在下一步研究中，將對本實驗得出的結(jié)果進(jìn)一步研究，探討該結(jié)果出現(xiàn)的分子機(jī)制。

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(編校：譚玲)

Study on effect of Fufang Xueshuantong capsule on serpine1,α-serpine1 protein and KLF2 in patients with lower extremity venous thrombosis

ZHANG Chang-lin, XIANG Yong, LIU An-de, XU Jing-hao, LUO Wu, LONG Shuang-you

(Department of Endoscopy, The People’s Hospital of Anshun Province, Anshun 561000, China)

ObjectiveTo explore the effect of serpine1, α-serpine1 protein and KLF2 in patients with lower extremity venous thrombosis by Fufang Xueshuantong capsule.Methods44 patients were diagnosed with lower extremity venous thrombosis were collected, and randomly divided into experimental group and control group, 22 cases in each group, giving the conventional antiplatelet therapy, on the basis of this, the experimental group was given Fufang Xueshuantong capsule 1.5 g, three times a day orally, and the control group was given context Shutong granules 20 g, three times a day orally.2 weeks for a course of treatment, three courses of treatment.Before and after treatment in the detection of two groups of patients with serum serpine1, α-serpine1 KLF2 and protein contents, blood rheology, coagulation function, and carries on the analysis.ResultsCompared with the control group, experimental group patients has better curative effect, the performance of: serum serpine1and α-serpine1 protein content were significantly decreased(P< 0.05).KLF2 expression was significantly higher (P<0.05).Blood viscosity, erythrocyte aggregation index, erythrocyte sedimentation rate decreased significantly (P< 0.05).Fib, D-D content significantly decreased (P<0.05).ConclusionsFufang Xueshuantong capsule can reduce serum serpine1, α-serpine1 protein content and promote KLF2 expression, decrease the blood viscosity, erythrocyte sedimentation rate, improve patients with hypercoagulable state in patients with lower extremity venous thrombosis, so as to achieve good clinical efficacy.

Fufang Xueshuantong capsule; lower extremity venous thrombosis; fibrinolysis system

張昌林，男，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：下肢靜脈血栓，消化，內(nèi)鏡治療，E-mail：zcl956874@163.com。

R654.3

A

1005-1678(2015)07-0110-03