刺芒柄花素對老年晚期肺癌患者胸水及血清中內(nèi)皮抑素、VEGF、MMP-2、bFGF及腫瘤標(biāo)志物的影響

張蕾，任中海，薛永飛

(河南省南陽市中心醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科二病區(qū)，河南 南陽 473000)

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刺芒柄花素對老年晚期肺癌患者胸水及血清中內(nèi)皮抑素、VEGF、MMP-2、bFGF及腫瘤標(biāo)志物的影響

張蕾，任中海Δ，薛永飛

(河南省南陽市中心醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科二病區(qū)，河南 南陽 473000)

目的 探討刺芒柄花素對老年晚期肺癌患者胸水及血清中內(nèi)皮抑素(endostatin，ES)、血管內(nèi)皮素生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶 2(matrix metalloproteinases 2，MMP-2)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)及腫瘤標(biāo)志物的影響。方法 選取河南省南陽市中心醫(yī)院診治的老年晚期肺癌患者67例，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為2組：對照組33例，行臨床常規(guī)NP方案化療；實驗組34例，在對照組相同的臨床常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用刺芒柄花素予以治療，比較2組患者胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF、腫瘤標(biāo)志物水平以及生存質(zhì)量評分變化。結(jié)果 與對照組比較，實驗組胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量均明顯降低(P<0.05)；實驗組血清癌胚抗原(carcino embryonie antigen，CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragments，CYFRA21-1)、糖類抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)水平明顯降低(P<0.05)；實驗組患者生存質(zhì)量評分情況明顯優(yōu)于對照組(χ2=4.96，P<0.05)。結(jié)論 刺芒柄花素對老年晚期肺癌患者治療具有較好的臨床療效，且能有效改善患者生存質(zhì)量，降低胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF等指標(biāo)和腫瘤標(biāo)志物水平，對臨床治療老年晚期肺癌具有重要意義。

刺芒柄花素；晚期肺癌；內(nèi)皮抑素；血管內(nèi)皮素生長因子；基質(zhì)金屬蛋白酶2；堿性成纖維細(xì)胞生長因子；腫瘤標(biāo)志物

肺癌(lung cancer)是嚴(yán)重危害人類健康的惡性腫瘤之一，也是目前全世界發(fā)病率和死亡率最高的癌癥[1]，對人類健康和生命安全帶來了較大威脅。肺癌的高發(fā)年齡為 50～80 歲，近年來，青年人肺癌的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，男性發(fā)病率和死亡率明顯高于女性，其原因與男性為主要吸煙人群有主要關(guān)系[2]。大量樣本調(diào)查后指出，長期大量吸煙者的肺癌發(fā)生率為不吸煙者20倍[3]，且近年來工業(yè)發(fā)展、城市大氣污染加重，肺癌的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢，值得引起人們高度關(guān)注。臨床實驗指出，化療是導(dǎo)致肺癌患者并發(fā)靜脈血栓栓塞癥的主要危險因素[4]，加重晚期肺癌患者出現(xiàn)凝血、纖溶系統(tǒng)紊亂而發(fā)生靜脈血栓栓塞癥的風(fēng)險。刺芒柄花素(formononetin)是提取自豆科植物紅車軸草有效成分[5]，具有較好的抗癌作用，臨床已將之應(yīng)用于乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等疾病的預(yù)防，但將之用于治療老年晚期肺癌的報道卻并不多見。本研究通過對老年晚期肺癌患者應(yīng)用刺芒柄花素治療后其胸水和血清中內(nèi)皮抑素(endostatin，ES)、血管內(nèi)皮素生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶 2(matrix metalloproteinases 2， MMP-2)及堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)表達(dá)水平的變化，以探討刺芒柄花素對老年晚期肺癌患者的影響，為老年晚期肺癌患者的診斷和治療提供新的思路和方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來源選擇2013年1月～2014年10月于河南省南陽市中心醫(yī)院腫瘤科以老年晚期肺癌為診斷而收入院的患者67例，男性34例，女性33例，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為實驗組和對照組。其中實驗組34例，男性17例，女性17例，平均年齡(74.2±10.5)歲；對照組33例，男性17例，女性16例，平均年齡(74.8±10.7)歲。病理分型：實驗組小細(xì)胞肺癌患者8例，非小細(xì)胞肺癌患者26例，其中腺癌14例、鱗癌12例；對照組小細(xì)胞肺癌患者7例，非小細(xì)胞肺癌患者26例，其中腺癌15例、鱗癌11例。臨床分期：實驗組ⅢA期11例，ⅢB期15例，Ⅳ期8例；對照組ⅢA期12例，ⅢB期13例，Ⅳ期8例[按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)最新版惡性腫瘤的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)]。所有老年晚期肺癌患者其臨床及影像學(xué)診斷均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均已喪失手術(shù)治療機(jī)會。2組研究對象性別、年齡、病理分型、臨床分期一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

診斷及排除標(biāo)準(zhǔn)：①參照中國抗癌協(xié)會出版《2010中國肺癌臨床指南》[6]中關(guān)于老年晚期肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)而擬定以下納入標(biāo)準(zhǔn)：初次入院并診斷為肺癌者；年齡在65～79歲之間者；TNM分期符合晚期肺癌變化，失去手術(shù)機(jī)會并自愿同意接受本實驗者；實驗前2周內(nèi)未用過任何相關(guān)藥物治療者。②排除標(biāo)準(zhǔn)：不愿參與本研究或不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；同時患有其他系統(tǒng)腫瘤者；患有艾滋病、乙肝等具有較重傳染性疾病患者；合并有嚴(yán)重心、肝、腎功能不全疾病患者；對刺芒柄花素及其制劑過敏者；患有精神類疾病不能配合研究者。

1.2 方法 所有老年晚期肺癌患者嚴(yán)格按照2010年美國臨床腫瘤學(xué)會IV期非小細(xì)胞肺癌化療的臨床實踐指南[7]中關(guān)于老年晚期肺癌的治療標(biāo)準(zhǔn)予以治療：

對照組行NP方案化療，順鉑注射液(錦州九泰藥業(yè)有限責(zé)任公司，國藥準(zhǔn)字H20033936)70 mg/m2，分3 d使用，分別為第10、20、30天；長春瑞濱注射液(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20031377)25 mg/(m2·d)，于第1、8天使用。在治療過程中，如并發(fā)其他臨床癥狀，均予相應(yīng)的對癥處理。以4周為1個周期進(jìn)行治療，共化療2個周期。實驗組在與對照組相同的臨床常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用刺芒柄花素(陜西慧科植物開發(fā)有限公司，純度>98%)，1.2 g/次，3次/天，共治療8周。

血清樣本采集：2組患者均在入院后及治療結(jié)束后空腹采集10 mL肘靜脈血，將其中部位血液裝入采血管中，按3000 r/min離心10 min，待離心結(jié)束后將上層血清裝入采血管中，放入-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?；剩余血液裝入采血管備用。以上均由本院檢驗科專業(yè)人員負(fù)責(zé)操作。

胸水樣本采集：2組患者均在入院后及治療結(jié)束后經(jīng)無菌操作胸腔穿刺收集胸腔積液送檢脫落細(xì)胞學(xué)檢查，同時收集胸腔積液10 mL，按3000 r/min 離心10 min，然后將上清液分別裝入采血管中，放入-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.3.1 胸水和血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量：4種指標(biāo)均采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測量其濃度水平。以血清ES含量測量為例：①選取96孔板按說明書要求設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品、空白孔及檢測樣本孔；②在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50 μL，鏈霉親和素-HRP50 μL；③代測樣品孔中加入樣本40 μL ，然后各加入抗ES抗體10 μL、鏈霉親和素-HRP50 μL，蓋上封板膜，混勻后于37 ℃條件下溫育60 min；④每孔先后加入顯色劑A50 μL、顯色劑B50 μL，混勻后于37 ℃條件下避光顯色10 min；⑤每孔加終止液 50 μL；⑥以450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)；⑦根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值和樣品OD值計算出對應(yīng)的樣品濃度。其余指標(biāo)濃度測量方法同上。試劑盒均由江蘇晶美生物科技有限公司提供，其操作方法按照說明書嚴(yán)格操作，全自動酶標(biāo)儀購于美谷分子儀器(上海)有限公司。

1.3.2 血清中腫瘤標(biāo)志物含量：取所有患者預(yù)留血清2 mL，采用ELISA法檢測所有研究對象血清中肺癌腫瘤標(biāo)志物濃度水平，腫瘤標(biāo)志物包括：癌胚抗原(carcino embryonie antigen，CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragments，CYFRA21-1)、糖類抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)等(試劑盒由鄭州安塞生物科技有限公司提供，其操作方法按照說明書嚴(yán)格操作)。以上所有操作均由本院檢驗科專業(yè)人員負(fù)責(zé)操作。

1.3.3 生存質(zhì)量評價：依據(jù)Karnofsky功能狀態(tài)評分[8]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價，①改善：治療后較治療前得分提高≥10分；②下降：治療后較治療前得分下降≥10分；③穩(wěn)定：治療后較治療前提高或下降得分<10分。總有效率=(改善例數(shù)+穩(wěn)定例數(shù))/總例數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量水平的比較 本研究顯示，治療前2組患者胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)8周治療后，2組患者胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量均較治療前降低(P<0.05)，且實驗組明顯低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者胸水中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量的比較Tab.1 Comparison of ES，VEGF，MMP-2 and bFGF in hydrothorax between two ±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量水平的比較 本研究顯示，治療前2組患者血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)8周治療后，2組患者血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量均較治療前降低(P<0.05)，且實驗組明顯低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者血清中ES、VEGF、MMP-2、bFGF含量的比較Tab.2 Comparison of ES, VEGF, MMP-2 and bFGF in serum between two ±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 血清中腫瘤標(biāo)志物水平比較 本研究顯示，治療前2組患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125的含量相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，基線可比。本研究中，經(jīng)8周治療后2組患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125水平均較治療前降低(P<0.05)，但實驗組水平明顯低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者血清中肺癌腫瘤標(biāo)志物水平比較±s，μg/L)Tab.3 Comparison of tumor biomarkers between two ±s，μg/L)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.4 2組患者生存質(zhì)量評價比較 本研究中，經(jīng)治療后，實驗組患者生存質(zhì)量評分情況明顯優(yōu)于對照組(χ2=4.96，P<0.05)。見表4。

表4 治療過程中Karnofsky評價比較情況[n(%)]Tab.4 Comparison of Karnofsky score between two groups[n(%)]

#P<0.05，與對照組比較，compared with control group

3 討論

在我國近10年來，肺癌發(fā)病率以每年11%的速度遞增，總患病率在男性惡性腫瘤中超越前列腺癌而處于第1位，女性惡性腫瘤中僅次于乳腺癌而位于第2位[9]。對于失去手術(shù)治療機(jī)會的老年晚期肺癌患者，化療是其主要的治療方案，但化療并不能十分有效地延長其生存期。隨著現(xiàn)代科學(xué)對腫瘤發(fā)生及進(jìn)展中小分子認(rèn)識的逐漸增多，研究者已逐漸認(rèn)識到血管生成是腫瘤發(fā)生、生長及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)[10]，血管生成在腫瘤的惡性增殖以及侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用，而且腫瘤血管密度對患者的生存期和生存質(zhì)量有重要的影響。另外有研究表明[10]，小細(xì)胞肺癌患者胸水或血清中VEGF、ES顯著升高，bFGF、MMP-2也被證實在肺癌患者腫瘤生長、轉(zhuǎn)移過程中具有重要作用。

研究表明[11]，惡性腫瘤患者大多都存在血清ES、VEGF水平的升高現(xiàn)象，本研究結(jié)果也證實了此結(jié)論。本研究結(jié)果顯示，2組患者胸水和血清中ES、VEGF、bFGF、MMP-2均異常增高。研究發(fā)現(xiàn)[13]，VEGF和ES分別是作用最強(qiáng)的內(nèi)源性血管生成因子和抗血管生成因子。VEGF在惡性腫瘤細(xì)胞的生長、分化及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮促進(jìn)腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂、病理性血管生成的作用，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移；ES則被認(rèn)為是至今發(fā)現(xiàn)的最有效的內(nèi)源性血管生長抑制劑之一，具有非常廣泛的抗癌活性。bFGF是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種具有重要作用的血管新生調(diào)控因子， 具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞有絲分裂和誘導(dǎo)新血管生成的作用，在腫瘤分化、浸潤、轉(zhuǎn)移以及新生血管的形成過程中起著重要作用， 并成為判斷實體瘤預(yù)后的一項重要的獨立性指標(biāo)[14]。

本研究結(jié)果顯示，實驗組患者經(jīng)治療后胸水和血清中ES、VEGF、bFGF、MMP-2經(jīng)治療后均明顯降低(P<0.05)，且低于對照組(P<0.05)。在治療前，2組患者胸水中各指標(biāo)水平雖略高于患者血清中水平，但差異并無統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)8周治療后，胸水和血清中各指標(biāo)水平亦無明顯差異。由本研究結(jié)果可知，刺芒柄花素具有較好的降低血清和胸水中VEGF、bFGF、MMP-2水平的作用，其原因可能與刺芒柄花素的抗腫瘤活性有關(guān)[15]，而其具體的療效機(jī)制目前仍不十分明確。bFGF水平是預(yù)測腫瘤患者預(yù)后的重要指標(biāo)[16]，本研究中實驗組患者bFGF水平明顯低于對照組，可見實驗組患者預(yù)后應(yīng)優(yōu)于對照組，而表4中實驗組患者生存質(zhì)量評分和有效率明顯優(yōu)于對照組(P<0.05)，且實驗組各腫瘤標(biāo)志物的水平也更低于對照組(P<0.05)，CA125作為肺癌的獨立預(yù)后指標(biāo)，其水平的降低也共同證實了這一結(jié)果。

本實驗通過觀察67例老年晚期肺癌患者治療前后胸水和血清ES、VEGF、bFGF、MMP-2、腫瘤標(biāo)志物和生存質(zhì)量評估的情況，證實了刺芒柄花素能夠明顯降低老年晚期肝癌患者胸水和血清ES、VEGF、bFGF、MMP-2以及腫瘤標(biāo)志物等指標(biāo)水平，對老年晚期肺癌患者具有重要意義。在下一步研究中，本課題組將尋找新的信號分子和目的基因，為本實驗所反映的現(xiàn)象做出進(jìn)一步論證和分析。

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(編校：王儼儼)

Effect of formoononetin on endostatin, VEGF, MMP-2 and bFGF in hydrothorax and serum and tumor biomarkers of elderly patients with advanced lung cancer

ZHANG Lei, REN Zhong-haiΔ, XUE Yong-fei

(Department of Internal Medicine-Oncology, Nanyang Central Hospital of Henan Province, Nanyang 473000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of formoononetin on endostatin (ES), vascular endothelial growth factor (VEGF), matrix metalloproteinases 2(MMP-2), basic fibroblast growth factor (bFGF) in hydrothorax and serum, and tumor biomarkers of patients with elderly advanced lung cancer.Methods67 cases elder with advanced lung cancer were selected and randomly divided into two groups.33 cases in control group were treated with conventional therapy of NP chemotherapy regimen, 34 cases in experiment group were combined with formononetin.The changes of ES, VEGF, MMP-2, bFGF, tumor marker levels in hydrothorax and serum and life quality evaluation were compared.ResultsCompared with control group, the contents of ES, VEGF, MMP-2, bFGF in hydrothorax and serum of experiment group significantly decreased (P<0.05); the carcino embryonie antigen (CEA), neuron specific enolase (NSE), cytokeratin-19-fragments (CYFRA21-1), and carbohydrate antigen 125 (CA125) in serum of experiment group significantly decreased (P<0.05); the life quality evaluation improved better of experiment group (χ2=4.96,P<0.05).ConclusionFormononetin has better clinical effect in treatment of elderly patients with advanced lung cancer patients.It could effectively improve the quality of life, reduce ES, VEGF, MMP-2, bFGF and other indicators in hydrothorax and serum, which has the vital significance to the clinical therapy.

formononetin; advanced lung cancer; endostatin; vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinases 2; basic fibroblast growth factor; tumor biomarkers

張蕾，女，本科，主治醫(yī)師，研究方向：腫瘤內(nèi)科，E-mail：zhangleiyis@163.com；任中海，通訊作者，男，碩士，主任醫(yī)師，研究方向：腫瘤內(nèi)科，E-mail：renzhonghai@medmail.com.cn。

R734.2

A

1005-1678(2015)08-0154-04