肺炎鏈球菌臨床檢驗(yàn)分析

于洋

摘要 探討由肺炎鏈球菌感染患者的臨床檢驗(yàn)分析方法及細(xì)菌特性。方法選取2011年3月-12月，我院收治的由肺炎鏈球菌感染患者20例，臨床通過(guò)取痰、膿液、腦脊液、血液等方式對(duì)鏈球菌進(jìn)行檢驗(yàn)分析。結(jié)果在35% C0環(huán)境行菌種生存活動(dòng)降低，生存率30%，10%C0環(huán)形中菌種的生存率85%，菌種的生存條件經(jīng)培養(yǎng)分析顯示在10%C0環(huán)境中生長(zhǎng)更好。最適溫度35℃，最適pH7.6～8.0。對(duì)比生存率顯示，p<0.05，表示差異有統(tǒng)計(jì)意義。結(jié)論 通過(guò)鑒別診斷對(duì)菌種進(jìn)行分型，細(xì)菌培養(yǎng)確定菌種在不同溶液及環(huán)境下成陰性或是陽(yáng)性。在分析培養(yǎng)下確定不同的生存環(huán)境下細(xì)菌的活動(dòng)能力。

關(guān)鍵詞 肺炎鏈球菌；檢驗(yàn)方法

肺炎鏈球菌俗稱肺炎雙球菌。該菌廣泛分布于自然界，主要寄生在人類上呼吸道，大多數(shù)人鼻咽腔中有本菌存在。根據(jù)莢膜抗原的不同，可分為84個(gè)血清型，多數(shù)菌株不致病，少部分強(qiáng)致病菌株，主要引起人類化膿性感染和大葉性肺炎。選取2011年3月-12月，我院收治的由肺炎鏈球菌感染患者20例，對(duì)20例患者臨床菌種檢驗(yàn)分析進(jìn)行總結(jié)，報(bào)告如下。

1臨床資料與方法

1.1一般資料 選取2011年3月-12月，我院收治的由肺炎鏈球菌感染患者20例，患者年齡3-40歲，平均年齡35歲，20例患者中，大葉性肺炎患者10例，6例呼吸道功能異常，4例由酒精及藥物中毒引起，肺炎鏈球主要引起人類大葉性肺炎。75%的成年人肺炎鏈球菌肺炎及50%以上嚴(yán)重的肺炎鏈球菌菌血癥。臨床菌種采集根據(jù)疾病的不同采集相應(yīng)的標(biāo)本。通常取痰、膿液、腦脊液、血液等。

1.2標(biāo)本采集 根據(jù)疾病的不同采集相應(yīng)的標(biāo)本。通常取痰、膿液、腦脊液、血液等。最好在用藥前采集標(biāo)本。采集菌種所使用的器皿應(yīng)清潔無(wú)菌，采集標(biāo)本時(shí)避免污染，盡快送檢。自肺部咳出的痰，應(yīng)選擇鐵銹色或膿性分泌物部分送檢。診斷菌血癥、敗血癥，采血時(shí)應(yīng)選擇在寒戰(zhàn)、高熱時(shí)。采血量應(yīng)在5～10 ml。

1.3檢驗(yàn)方法 直接涂片檢查 除血液標(biāo)本外，其他標(biāo)本均可使用該方法。經(jīng)革蘭或亞甲藍(lán)染色后鏡檢，見(jiàn)符合肺炎鏈球菌形態(tài)特點(diǎn)，周圍有較寬的透明區(qū)，經(jīng)莢膜染色確定為莢膜者，可初步報(bào)告。莢膜腫脹試驗(yàn) 可作為肺炎鏈球菌的快速診斷。取純培養(yǎng)菌液l滴和肺炎鏈球菌診斷血清l滴再加一接種環(huán)亞甲藍(lán)染液，混勻后加蓋片油鏡檢查。如莢膜顯著增厚，即莢膜腫脹試陽(yáng)性[1] 。

1.4細(xì)菌培養(yǎng) 增菌培養(yǎng)：血液、腦脊液經(jīng)葡萄糖硫酸鎂肉湯增菌后，肺炎鏈球菌均勻渾濁生長(zhǎng)并有綠色熒光。分離培養(yǎng)：膿液、腦脊液沉淀物或經(jīng)無(wú)菌鹽水洗滌過(guò)的痰液，接種血平板，35℃l8～24小時(shí)培養(yǎng)后，觀察菌落生長(zhǎng)情況，再取可疑菌落作進(jìn)一步鑒定。

1.5統(tǒng)計(jì)分析利用spss19.0軟件對(duì)臨床數(shù)據(jù)處理，審核資料數(shù)據(jù)計(jì)量采用t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示p<0.05，表示臨床差異有意義，有顯著效果。

2結(jié)果 在20例患者中根據(jù)不同病因?qū)颊叩奶?、膿液、腦脊液、血液進(jìn)行抽取檢驗(yàn)及分離培養(yǎng)顯示，20例患者中12例患者抑菌圈 >18mm，為陽(yáng)性，在35% C0環(huán)境行菌種生存活動(dòng)降低，生存率30%，10%C0環(huán)形中菌種的生存率85%，菌種的生存條件經(jīng)培養(yǎng)分析顯示在10%C0環(huán)境中生長(zhǎng)更好。最適溫度35℃，最適pH7.6～8.0。對(duì)比生存率顯示，p<0.05，表示差異有統(tǒng)計(jì)意義。

3討論 當(dāng)出現(xiàn)某種降低這種抵抗功能的因素時(shí)，肺炎鏈球菌可引起感染，如①呼吸道功能異常：病毒及其它感染性因子損傷呼吸道粘膜上皮細(xì)胞；某些異常因素（如過(guò)敏）導(dǎo)致粘液的過(guò)度分泌，使侵入的病原菌受到保護(hù)；各種原因?qū)е碌闹夤茏枞案鞣N原因?qū)е碌睦w毛功能損傷；②酒精及藥物中毒：酒精及某些藥物中毒可抑制吞噬細(xì)胞的活性及咳嗽反射，有利于病原菌的吸入；③循環(huán)系統(tǒng)功能異常及任何原因?qū)е碌姆纬溲?、心功能衰竭；④其它：營(yíng)養(yǎng)缺陷、體質(zhì)虛弱、貧血、血清補(bǔ)體水平低下等。肺炎鏈球菌肺炎常突然發(fā)病，表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)、胸膜劇烈疼痛、咳鐵銹色痰。10%～20%的患者可于高熱期伴發(fā)菌血癥。其病理表現(xiàn)主要是最初肺泡內(nèi)有大量纖維蛋白滲出液，繼之是紅細(xì)胞和白細(xì)胞向肺泡內(nèi)滲出，最終導(dǎo)致病變部位肺組織實(shí)變[2] .

肺炎鏈球菌革蘭染色陽(yáng)性，呈矛頭狀排列，尖端向外。在痰及膿液中可單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。無(wú)鞭毛及芽孢，在體內(nèi)可形成莢膜。營(yíng)養(yǎng)要求較高，必須在含有血液血清或葡萄糖的培養(yǎng)基中才能良好生長(zhǎng)。本菌為兼性厭氧菌，但在10%C0環(huán)境中生長(zhǎng)更好。最適溫度35℃，最適pH7.6～8.0。在血平板上，35℃24小時(shí)可形成細(xì)小、灰白色、透明或半透明、表面光滑的扁平菌落。菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。培養(yǎng)稍久，可產(chǎn)生自溶酶而使菌落中央塌陷，邊緣隆起，呈臍狀。

肺炎鏈球菌能分解多種糖類，如：葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。多數(shù)新分離的菌株分解菊糖，有的也可不分解。菊糖分解、膽汁溶菌及奧潑托欣（optochin）試驗(yàn)肺炎鏈球菌均陽(yáng)性，借此可與甲型溶血性鏈球菌相鑒別。該菌不產(chǎn)生靛基質(zhì)，不液化明膠[3] 。

鏈球菌主要致病物質(zhì)：莢膜是肺炎鏈球菌的主要侵襲力，失去莢膜其毒力減弱或消失；肺炎鏈球菌溶血素0類似A群鏈球菌SL0，抑制淋巴細(xì)胞的增殖、中性粒細(xì)胞趨化及吞噬。脂磷壁酸具有黏附作用；而神經(jīng)氨酸酶則與細(xì)菌在黏膜上皮細(xì)胞定植、繁殖、擴(kuò)散有關(guān)。

通過(guò)本檢驗(yàn)研究顯示，20例患者中12例患者抑菌圈 >18mm，為陽(yáng)性，在35% C0環(huán)境行菌種生存活動(dòng)降低，生存率30%，10%C0環(huán)形中菌種的生存率85%，菌種的生存條件經(jīng)培養(yǎng)分析顯示在10%C0環(huán)境中生長(zhǎng)更好。最適溫度35℃，最適pH7.6～8.0。對(duì)比生存率顯示，p<0.05，表示差異有統(tǒng)計(jì)意義。通過(guò)鑒別診斷對(duì)菌種進(jìn)行分型，分離培養(yǎng)中明顯查別均屬生活環(huán)境特性及性狀。

參考文獻(xiàn)

[1] 王靜靜，宋曉萍，王海靜.臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)分析 . 中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)（中旬刊） .2014，06： 3924-3924.

[2] 羅湘蓉，袁平，李紅凌，金婷婷，胡方芳，袁軍 .肺炎鏈球菌臨床分布及其耐藥性分析. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床. 2014，03： 361-362，364.

[3] 曹焱 .下呼吸道感染患者病原菌檢驗(yàn)的臨床分析. 中外醫(yī)療 .2014，33（03）： 186，188.