三種不同檢驗方法用于陰道細(xì)菌檢驗的比較分析

摘要：目的 通過對陰道細(xì)菌檢驗中三種不同檢測方法的比較，探討臨床最佳檢驗方式。方法 選取本院2012年5月～2014年5月收治的陰道疾病患者84例，所有患者均采集陰道分泌物并分別開展革蘭染色法、PCR檢驗法以及細(xì)菌培養(yǎng)法，獲取檢驗結(jié)果后依次開展統(tǒng)計學(xué)處理與分析。結(jié)果 PCR檢測法和細(xì)菌培養(yǎng)法的檢出率均顯著高于革蘭染色法，組間比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但細(xì)菌培養(yǎng)法與PCR檢測法比較結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 在陰道細(xì)菌檢驗中采用PCR檢測法不但能夠確保良好的檢出率，同時該種方法操作簡易，值得廣泛推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：革蘭染色法；PCR；細(xì)菌培養(yǎng)法；陰道細(xì)菌檢驗；比較分析

陰道細(xì)菌感染是當(dāng)前臨床婦科中的多發(fā)疾病類型[1]，一旦發(fā)生感染情況不但會對患者產(chǎn)生陰道炎的相關(guān)疾病，伴隨病情進(jìn)展也容易引發(fā)盆腔炎、異位妊娠等嚴(yán)重疾病[2]，對女性生殖道健康存在較高威脅。本研究針對存在陰道感染疾病患者分別開展了3種不同的檢驗方法，旨在提高臨床檢驗的準(zhǔn)確性，現(xiàn)將研究內(nèi)容報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究中84例陰道疾病患者均為本院2012年5月～2014年5月所收治，所有病例均存在明顯的陰道不適、瘙癢以及炎性癥狀，并且同時伴隨白帶分泌物總量增多的表現(xiàn)。本組病例年齡為22～45歲，平均（29.4±5.8）歲。

1.2 方法

1.2.1儀器與試劑 革蘭氏染色試劑盒有青島海博生物技術(shù)有限公司所提供，同期采用該公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基，實驗應(yīng)用的顯微鏡為日本奧林巴斯公司生產(chǎn)的CX41型，并應(yīng)用中國藥品生物制品檢驗所提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1.2.2 檢測方法 本組病例均給予截石位，采用陰道鏡將宮頸有效顯露，再應(yīng)用無菌棉簽獲取病患陰道后穹窿部位的分泌物，獲取標(biāo)本后置于生理鹽水試管中待檢，然后依次開展以下三種檢測方法。

1.2.2.1 革蘭染色法 首先將清潔玻片放置于95%的乙醇中進(jìn)行浸泡處理，取出后進(jìn)行擦拭與晾曬保證干燥無菌。然后提取試管中分泌物標(biāo)本均勻在玻片上進(jìn)行涂抹，再采用顯微鏡設(shè)備進(jìn)行觀察與記錄。

1.2.2.2 PCR檢測法 提取試管內(nèi)分泌物樣本，應(yīng)用離心機(jī)有效分離10min后獲取上清液，取堿性裂解液注入標(biāo)本中，再行高溫加熱，維持溫度為98℃，加熱時間為10min。然后將獲取樣本再行5min離心處理，提取上清液開展DNA模板制作。在該種檢驗方法中進(jìn)行陽性與陰性比較時需在模板制作過程中采用相同的PCR試劑，將無DNA添加的樣本作為陰性組，存在PCR擴(kuò)增的樣本作為陽性組，再行臨床比較。針對PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢查時首先需25μL混合物，加蓋30μL無菌石蠟油后便能夠開展PCR循環(huán)。具體循環(huán)標(biāo)準(zhǔn)為58℃、72℃、94℃各1min，95℃5min，在完成32次循環(huán)后再予72℃5min。

1.2.2.3細(xì)菌培養(yǎng)法 在試管中提取樣本后以無菌條件為基礎(chǔ)將其接種至培養(yǎng)基中，然后將標(biāo)本置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，保持35℃完成孵育處理。有效防止48h再在標(biāo)本中選擇有效菌落，采用臨床生化檢驗標(biāo)準(zhǔn)完成具體檢測步驟。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 本研究采用SPSS 19.0軟件，檢驗結(jié)果比較均應(yīng)用χ2檢驗，P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

3種檢驗方法的檢測結(jié)果比較情況如表1所示，PCR檢測法和細(xì)菌培養(yǎng)法與革蘭染色法比較均存在統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；PCR檢測法與細(xì)菌培養(yǎng)法比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

陰道感染疾病在婦科臨床中較為常見[3]，其發(fā)病機(jī)制主要為引導(dǎo)上皮細(xì)胞表層糖原在細(xì)菌的侵害下使局部桿菌酸堿平衡發(fā)生變化，伴隨桿菌數(shù)量的急劇下降，細(xì)菌的危害程度不斷提升，進(jìn)而形成陰道炎等相關(guān)病癥[4]。通過對患者陰道分泌物進(jìn)行細(xì)菌檢驗科充分了解致病菌的具體類別，也能良好判斷疾病進(jìn)展程度，是臨床診斷的主要依據(jù)措施，也能為臨床治療提供更為可靠的指導(dǎo)性建議。

本研究旨在分析臨床陰道細(xì)菌檢驗中的最佳方法，分別對患者開展了革蘭染色法、PCR檢測法以及細(xì)菌培養(yǎng)法，通過檢驗結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)PCR檢測法與細(xì)菌培養(yǎng)法的檢驗效果明顯好于革蘭染色法，其陽性檢出率更為滿意，筆者分析革蘭染色法的偏差較高主要由于脫色處理不當(dāng)而造成，以往研究也證實該種檢驗方法的可靠程度較差[5]，與本次研究結(jié)果一致。但前兩者比較差異并無統(tǒng)計學(xué)意義，提示此兩組方法均能獲得良好的臨床效果。細(xì)菌培養(yǎng)實驗長期以來一直是臨床檢驗的主要依據(jù)措施，但其開展過程的難度較高，無法保證基層醫(yī)院的廣泛推廣。而PCR檢測法的可操作性更為滿意，僅需應(yīng)用相關(guān)試劑盒便可順利完成DNA模板制作，可充分提高臨床工作效率，減輕臨床檢驗醫(yī)師工作壓力。

綜上所述，在陰道細(xì)菌檢驗中采用PCR檢測法能夠確保良好的檢出率，其檢出效果明顯好于革蘭染色法，同時該種方法操作簡易，其可操作性亦顯著高于細(xì)菌培養(yǎng)法，是值得廣泛推廣的陰道檢驗方法。

參考文獻(xiàn)：

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[4]劉劍.分析常用的四種檢驗方法在細(xì)菌性陰道炎診斷中的臨床價值[J].中國實用醫(yī)藥，2013，11（33）：53-54.

[5]吳祥如.實驗室對陰道細(xì)菌的兩種檢驗方法對比[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2013，10（32）：18.

編輯/蘇小梅