穴位注射足三里對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠治療效果的實(shí)驗(yàn)研究

摘要：目的 探討穴位注射足三里治療潰瘍性結(jié)腸炎的臨床效果及其治療作用的可能機(jī)制。方法 健康SPF級(jí)SD小鼠60只，雌雄各半，分為六組，治療1w后進(jìn)行DAI及肉眼病理組織學(xué)評(píng)分。結(jié)果 模型組小鼠的DAI評(píng)分及病理學(xué)評(píng)分顯著高于對(duì)照組。針刺組、穴位注射黃芪注射液組、穴位注射生理鹽水組、SASP組的DAI評(píng)分及病理學(xué)評(píng)分顯著低于模型組，單純針刺效果弱于穴位注射黃芪注射液組，單純針刺和穴位注射生理鹽水組無(wú)明顯差異。結(jié)論 穴位注射黃芪注射液對(duì)于小鼠實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎有一定的療效， 效果優(yōu)于單用針刺足三里、穴位注射鹽水組、SPAP組。

關(guān)鍵詞：穴位注射；黃芪注射液；足三里；潰瘍性結(jié)腸炎

潰瘍性結(jié)腸炎又稱非特異性潰瘍性結(jié)腸炎（UC），是一種慢性直腸和結(jié)腸炎性疾病。近年來(lái)，選用黃芪注射液穴位注射治療UC在臨床上取得較滿意效果。本研究運(yùn)用潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型證實(shí)其治療作用，為仿穴位注射治療慢性潰瘍性結(jié)腸炎的臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 健康SPF級(jí)SD小鼠60只，雌雄各50%，體重約25g左右，購(gòu)于魯抗動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)正常飼養(yǎng)1w，均為健康，隨機(jī)分為6組 ，每組10只，各組體重統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無(wú)顯著差異（P>0.05）。

1.2藥物與試劑 柳氮磺吡啶腸溶片（上海信誼天平藥業(yè)有限公司），三硝基苯磺酸（國(guó)藥集團(tuán)），黃芪注射液（神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：Z13020999）。

1.3實(shí)驗(yàn)設(shè)備 顯微鏡。

1.4方法

1.4.1實(shí)驗(yàn)造模 小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后，除正常對(duì)照組外，禁食不禁水24h，固定小鼠后，用帶7號(hào)針頭硅膠導(dǎo)管從肛門插入至場(chǎng)內(nèi)4cm，注入200微升由50%乙醇和5mgTNBS組成的混合藥液將，倒置小鼠30s，使藥液到達(dá)全結(jié)腸，然后放回全籠飼養(yǎng)。

1.4.2實(shí)驗(yàn)分組與治療方法 60只小鼠隨機(jī)分為6組，每組雌雄各50%，每組各10只。

1組：針刺組。穴取足三里，進(jìn)針后，實(shí)行捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法，針刺1次/d，連續(xù)針灸1w；兩組：穴位注射黃芪組。穴取足三里，注射黃芪注射液，注射1次/2d，注射1w；3組：穴位注射生理鹽水組。穴取足三里，注射生理鹽水，注射1次/2d，注射1w；4組：SASP組。使用SASP水溶液灌胃，灌胃1次/2d，灌胃1w；5組：模型組。造模后不治療，與治療組做相同的捆綁固定；6組：正常組。作為各項(xiàng)指標(biāo)的正常對(duì)照。

治療1w后，各組大鼠禁食不禁水24h，全麻下取遠(yuǎn)端結(jié)腸約8cm，沿縱軸剪開腸管并用冰鹽水沖洗干凈，平鋪、固定，觀察炎癥及潰瘍發(fā)生情況，進(jìn)行局部結(jié)腸大體損傷評(píng)分。然后取病變明顯處結(jié)腸2cm標(biāo)本經(jīng)40g/L甲醛固定、石蠟包埋后切片進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察炎癥浸潤(rùn)、黏膜糜爛及潰瘍等情況。

1.5觀察指標(biāo)

1.5.1疾病活動(dòng)評(píng)分（DAI） 每日記錄動(dòng)物體重、毛發(fā)狀態(tài)、大便性狀和便血情況，進(jìn)行疾病活動(dòng)評(píng)分（DAI）。疾病活動(dòng)評(píng)分（DAI）=（體重下降分?jǐn)?shù)+大便性狀分?jǐn)?shù)+便血分?jǐn)?shù)）/3。

1.5.兩組織學(xué)損傷評(píng)分 光鏡下觀察炎癥浸潤(rùn)、黏膜糜爛及潰瘍等情況，采用Fedorak積分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)損傷評(píng)分。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，各項(xiàng)指標(biāo)用均數(shù)或均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組組間比較分別采用t檢驗(yàn)及方差分析。

2 結(jié)果

見表1。

造模各組在造模后第2d即出現(xiàn)疾病發(fā)作，模型組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中炎癥持續(xù)，無(wú)明顯自愈傾向；而相對(duì)于模型組，各組在治療后出現(xiàn)DAI降低（P<0.05），提示各種治療均可改善小鼠潰瘍性結(jié)腸炎炎癥程度；穴位注射黃芪組DAI、組織學(xué)損傷評(píng)分、結(jié)腸炎癥指數(shù)評(píng)分低于單純針刺組、穴位生理鹽水注射組和SPAP組；針刺組、生理鹽水穴注組、之間各指標(biāo)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

病理切片（HE染色）結(jié)果顯示，空白組小鼠結(jié)腸結(jié)構(gòu)完整，腺體清晰，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；對(duì)照組小鼠結(jié)腸結(jié)構(gòu)不完整，腺體破壞，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；鹽水組小鼠結(jié)腸結(jié)構(gòu)不完整，腺體破壞，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；黃芪組小鼠結(jié)腸結(jié)構(gòu)完整，腺體清晰，隱窩完整，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；針刺組小鼠結(jié)腸結(jié)構(gòu)輕度破壞，腺體不完整，部分炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為UC是多種致病因素相互作用的結(jié)果，其中與免疫機(jī)制密切相關(guān)，是以遺傳因素為背景，感染和環(huán)境因素通過(guò)啟動(dòng)腸道免疫和非免疫系統(tǒng)，致使腸粘膜對(duì)抗原呈現(xiàn)高敏反應(yīng)，發(fā)生免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，釋放大量細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致腸粘膜炎癥和組織的損傷[1]。而中醫(yī)認(rèn)為本病病位在大腸，屬中醫(yī)\"久痢\"、\"血痢\"、\"滯下\"等范疇，其病因病機(jī)為感受邪毒， 局部經(jīng)絡(luò)阻塞， 氣滯血瘀， 血肉腐敗所致[2]，《素問·太陰陽(yáng)明論》說(shuō)：\"飲食不節(jié)， 起居不時(shí)者， 陽(yáng)受之則入六腑， 陰受之則入五臟， ……入五臟則腹?jié)M閉塞， 下為飧泄， 久為腸\"。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，黃芪注射液穴位注射具有藥物和穴位雙重效果，一方面利用刺激足三里以調(diào)理腸胃的作用，另一方面強(qiáng)化了黃芪藥物的作用，具有一舉兩得的效果，具有起效快、療效高、無(wú)毒副作用的優(yōu)點(diǎn)，值得臨床推廣應(yīng)用。

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[3]楊甲三. 針灸腧穴學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 1989： 145.

編輯/哈濤