HPLC 測定清熱解毒顆粒中有效成分含量的方法研究

摘要：目的 探討高效液相色譜法在測定清熱解毒顆粒中有效成分含量中的作用。方法 本研究應用HPLC建立了一種測定清熱解毒顆粒中有效成分含量的分析方法，流動相為甲醇-水。結(jié)果供試品溶液連續(xù)進樣5次的RSD（%）均小于1.0，重復性良好。考察供試品溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果 顯示其RSD分別為0.24%，這表明該方法的穩(wěn)定性良好；按\"方法\"中的色潛條件測定吸收峰面積值，峰面積值基本穩(wěn)定，其RSD為0.87%，這表明其精密度良好。平均回收率為100.55%，RSD=1.42%。批號130401、130404、130412的含量RSD分別為1.61%、1.73%、1.50%。結(jié)論 HPLC能實現(xiàn)連翹苷與有關(guān)物質(zhì)的有效分離，連翹苷峰形好，含量測定結(jié)果重復性好；操作簡便、結(jié)果準確、靈敏度高，具有實際應用意義。

關(guān)鍵詞：HPLC；清熱解毒；有效成分；含量

為了有效控制清熱解毒顆粒中有效成分含量，本研究應用HPLC建立了一種測定清熱解毒顆粒中有效成分含量的分析方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10A高效液相色譜儀（日本島津公司）；島津 SPD-10Avp 紫外可見檢測器（日本島津公司）；C-R6A數(shù)據(jù)處理機。Shim-Pack VP-ODS C18 150mm×4.6mm 5μm 色譜柱；AD-2型百萬分之一電子天平（美國）；BP210S型電子天平（德國）；AS6150D型超聲清洗器（天津）。

1.2 試藥 連翹苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號：130520）。甲醇為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。清熱解毒顆粒（江西禹欣藥業(yè)有限公司，批號：130401、130404、130412）。

1.3 方法 ①色譜條件：流動相為甲醇-水（50：50），色譜柱為Shim-Pack VP-ODS C18 150mm×4.6mm 5μm。流速：1.0 ml/min；進樣量：20μl，流動相經(jīng)0.45μm濾器濾過。檢測波長為274nm，進樣量為20μl。②對照品溶液的制備：精密稱取連翹苷對照品適量，用甲醇稀釋至刻度，制成每1ml含連翹苷0.1mg的溶液，即得[1]。③供試品制備：精密稱定清熱解毒顆粒18g，研細，置入錐形瓶中，精密加入甲醇100ml，稱定重量，置水浴中回流1h，放冷，稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣用水20ml 使之溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，30ml/次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，20ml/次，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適應性實驗 取對照品溶液20？滋l注入液相色譜儀，按照上述色譜條件，記錄色譜圖，色譜峰見圖1。

圖 1 連翹苷的HPLC檢測結(jié)果

2.2 線性關(guān)系考察 精密吸取連翹苷對照品溶液（0.103g/L）2.0，4.0、6.0、8.0、10ml分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別進樣20μl，記錄色譜圖，記錄樣品的峰面積，以進樣量作為X軸，峰面積作為Y軸，得到回歸方程：Y= 12321 X+4635，r=0.9994（n=5），這表明連翹苷質(zhì)量濃度為0.021～0.103g/L范圍內(nèi)，連翹苷的質(zhì)量濃度與色譜峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3 重復性試驗 取同一批號供試品溶液（批號：130401）5份，按照供試品溶液制備方法制備并測定，RSD為0.62%，這表明該方法的重復性良好。見表1。

2.4 溶液的穩(wěn)定性試驗 見表2，結(jié)果顯示其RSD為0.24%，這表明該方法的穩(wěn)定性良好；上述試驗表明，樣品溶液0h與8h后峰面積無明顯變化，供試品溶液8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 精密度試驗 取供試品溶液，連續(xù)進樣5次，每次進樣量相同，按\"方法\"中的色潛條件測定吸收峰面積值，峰面積值基本穩(wěn)定，其RSD為0.87%，這表明其精密度良好。

2.6加樣回收率試驗 見表3。結(jié)果平均回收率為100.55%，RSD=1.42%。

2.7 樣品測定 按上述方法測定3批清熱解毒顆粒（江西禹欣藥業(yè)有限公司，批號：130401、130404、130412），結(jié)果批號130401、130404、130412的含量RSD分別為1.61%、1.73%、1.50%。見圖2。

圖 2 連翹苷的HPLC檢測結(jié)果

A 清熱解毒顆粒；B 對照品

3 結(jié)論

清熱解毒顆粒主要成份包括金銀花、連翹、水牛角濃縮粉、黃連、大青葉、玄參、地黃、知母、石膏等，具有清熱解毒之功效；本方辛涼透表，清熱解毒，養(yǎng)陰，主治溫病初起，里熱較甚，咳嗽咽痛[2]。用于治療流感、上呼吸道感染。方中君藥黃芩瀉實火，除濕熱，主治肺熱咳嗽，金銀花、連翹、大青葉、山豆根清熱解毒利咽，生地、天花粉、麥冬清熱滋陰生津以潤肺燥，石膏辛涼解肌，清熱瀉火，甘草調(diào)和諸藥，杏仁止咳。該制劑收載于《新藥轉(zhuǎn)正標準》中藥第四十一冊[3]。金銀花為該制劑主藥， 具有清熱解毒、涼散風熱的作用。顆粒劑是指藥材提取物與適宜的輔料或藥材細粉制成的顆粒狀制劑。中藥顆粒劑繼承了中藥沖劑等成藥便于攜帶、貯存與服用的諸多優(yōu)點，是一種優(yōu)良的劑型[4]。中藥顆粒劑是結(jié)合湯劑、酒劑和糖漿劑的特點而發(fā)展起來的一種中藥劑型，既保持湯劑吸收快、顯效迅速的特點，又克服了湯劑服用前臨時煎煮，久置易霉敗變質(zhì)的特點[5]。本處方藥味較多，藥物的有效成分復雜，為了既能保持中醫(yī)的傳統(tǒng)用藥特色，又能縮小服用劑量，結(jié)合顆粒劑特點，考慮采用顆粒劑為劑型。

本文的色譜條件（如檢測波長）基本參照2000年版《中國藥典》（一部）收載的\"連翹\"藥材含量測定項下的有關(guān)條件\"，并根據(jù)試驗情況，調(diào)整了流動相比例等參數(shù)。結(jié)果，供試品色譜中連翹苷與其它成分色譜峰分離理想，基線無干擾。本文研究結(jié)果顯示采用高效液相色譜法測定清熱解毒顆粒中連翹苷含量的方法，HPLC能實現(xiàn)連翹苷與有關(guān)物質(zhì)的有效分離，連翹苷峰形好，含量測定結(jié)果重復性好；操作簡便、結(jié)果準確、靈敏度高，具有實際應用意義。

參考文獻：

[1]費毅琴，聶晶.HPLC法同時測定清熱解毒軟膠囊中黃芩苷和梔子苷的含量[J].中國藥事，2012，26（5）：490-493.

[2]呂萍，張娜娜，張振巍，等.清熱解毒口服液HPLC指紋圖譜及4種主要成分的含量分析[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（2）：98-101.

[3]杜中惠.高效液相色譜法測定清熱解毒膠囊中綠原酸的含量[J].現(xiàn)代預防醫(yī)學，2012，39（118）：4821-4823.

[4]王媛，范全民.HPLC測定清熱解毒口服液中綠原酸與黃芩苷含量[J].中國藥品標準，2011，12（1）：35-37.

[5]張健，梁艷.高效液相法測定清熱解毒注射液中連翹苷的含量[J].中國實用醫(yī)藥，2010，5（14）：36.

編輯/許言