原發(fā)性干燥綜合征患者CD19+IgD+B細(xì)胞亞群與臨床特征的相關(guān)性研究

摘要：目的 探討原發(fā)性干燥綜合征患者外周血CD19+IgD+B/CD19+B細(xì)胞比例與患者臨床特點的相關(guān)性。方法 對我院68例確診的初發(fā)、未經(jīng)免疫抑制劑及激素治療的原發(fā)性干燥綜合征患者進(jìn)行CD19+IgD+B/CD19+B細(xì)胞亞群檢測，同時記錄患者抗干燥綜合征抗體、抗核抗體、唇腺病理改變，與CD19+IgD+B細(xì)胞亞群比例進(jìn)行相關(guān)性分析，所有患者在經(jīng)激素和羥氯喹治療3個月后復(fù)查CD19+IgD+B細(xì)胞亞群。結(jié)果 唇腺活檢浸潤灶指數(shù)FS（+）患者較FS（-）患者CD19+IgD+B細(xì)胞比例高（P<0.05）；在FS（+）患者中有生發(fā)中心患者外周血CD19+IgD+B細(xì)胞比例明顯高于生發(fā)中心陰性患者（p<0.05）；血清IgG球蛋白與CD19+IgD+B細(xì)胞比例呈正相關(guān)關(guān)系；抗SSB抗體陽性CD19+IgD+B細(xì)胞比例明顯高于陰性患者?？筍SA抗體、抗RO-52抗體、ANA抗體與CD19+IgD+B細(xì)胞比例無明顯相關(guān)性（P>0.05），SSB抗體滴度與CD19+IgD+B比例呈正相關(guān)關(guān)系。治療3月后復(fù)查CD19+IgD+B細(xì)胞比例較治療前明顯下降（P<0.05）。結(jié)論 CD19+IgD+B細(xì)胞比例與患者疾病活動度密切相關(guān)，可作為評價原發(fā)干燥綜合征治療效果的新方法。

關(guān)鍵詞：原發(fā)性干燥綜合征，CD19+IgD+B細(xì)胞，臨床特點

原發(fā)性干燥綜合征是一種累及外分泌腺的慢性炎性自身免疫性疾病，病理表現(xiàn)為受累組織中大量T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞浸潤，并產(chǎn)生大量的自身抗體及免疫球蛋白。原發(fā)性干燥綜合征免疫系統(tǒng)紊亂與B細(xì)胞的異常密切相關(guān)。在原發(fā)性干燥綜合征患者中存在B細(xì)胞在外分泌腺如唇腺組織中聚集形成異位生發(fā)中心，同時亞群紊亂，產(chǎn)生多種自身抗體[1]。研究發(fā)現(xiàn)，CD19+IgD+B細(xì)胞比例在原發(fā)干燥綜合征患者數(shù)量明顯增多，并且明顯高于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及系統(tǒng)性硬化癥患者，而CD19+CD38+B細(xì)胞比例明顯減少[2]。因此，CD19+IgD+B細(xì)胞在外周血中的比例可能反應(yīng)了患者機體內(nèi)免疫紊亂的程度，與患者自身抗體特征及臨床特征可能有一定的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 按照2012年美國風(fēng)濕病學(xué)會干燥綜合征分類（診斷）標(biāo)準(zhǔn)[3]，收集2013年1月～2014年3月于綿陽市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院，初次診斷原發(fā)干燥綜合征，且未經(jīng)激素和免疫抑制劑治療的患者臨床資料，共68例，其中女60例，男8例，年齡（36.84±16.5）歲，平均病程13.27±10.2月.

1.2 CD19+IgD+B細(xì)胞和CD19+B細(xì)胞亞群檢測：采用藻紅蛋白花青苷（PECY5）標(biāo)記的鼠抗人CDl9單克隆抗體、藻紅蛋白（PE）標(biāo)記的鼠抗人IgD單克隆抗體標(biāo)記患者及外周血B細(xì)胞。應(yīng)用金域檢驗中心Cytomics FC 500流式細(xì)胞儀及其分析軟件對CD19+IgD+B細(xì)胞亞群比例進(jìn)行分析。

對68例患者行糖皮質(zhì)激素+羥氯喹治療，治療前及治療3個月病情穩(wěn)定后檢測外周血CD19+IgD+B細(xì)胞亞群比例。

1.3臨床資料收集 收集患者抗核抗體譜、唇腺病理改變、免疫球蛋白，并將1）抗SSA抗體、抗SSB抗體、抗ANA抗體、Ro-52抗體與CD19+IgD+B細(xì)胞比例進(jìn)行相關(guān)性分析；唇腺病理FS+與FS-，生發(fā)中心陽性與生發(fā)中心陰性與CD19+IgD+B細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)性分析，經(jīng)激素及羥氯喹治療前后3個月CD19+IgD+B細(xì)胞比例變化進(jìn)行分析。

1.4計學(xué)處理 數(shù)據(jù)以χ±s表示，對于服從正態(tài)分布的計量資料采用了獨立樣本t檢驗，對于計數(shù)資料，采用x2檢驗。

2 結(jié)果

2.168例患者唇腺病理結(jié)果，F(xiàn)S+患者42例，F(xiàn)S-26例，42例FS陽性患者12例出現(xiàn)生發(fā)中心；68例患者抗ANA抗體陽性38例，陰性30例；所有患者抗SSA抗體、抗Ro-52抗體均為陽性，29例抗SSB抗體陽性；抗SSA抗體（+）者25例，抗SSA抗體（++）19例，抗SSA抗體（+++）24例；抗Ro-52抗體（+）41例，抗Ro-52抗體（++）19例，抗Ro-52抗體（+++）8例；抗SSB抗體+16，抗SSB抗體++7例；抗SSB抗體+++6例；抗ANA抗體1：100 11例，抗ANA抗體1：320 20例，抗ANA抗體1：1000 7例。所有68例患者均完成3月規(guī)范治療。見表1。

2.2 浸潤灶指數(shù)FS（+）患者較FS（-）患者CD19+IgD+B細(xì)胞比例高（P<0.05）；在FS（+）患者中有生發(fā)中心患者外周血CD19+IgD+B細(xì)胞比例明顯高于生發(fā)中心陰性患者（P<0.05）。見表2。

2.3 血清IgG球蛋白與CD19+IgD+B細(xì)胞比例呈正相關(guān)關(guān)系；抗SSB抗體陽性CD19+IgD+B細(xì)胞比例明顯高于陰性患者?？筍SA抗體、抗RO-52抗體、ANA抗體與CD19+IgD+B細(xì)胞比例無明顯相關(guān)性（P>0.05），SSB抗體滴度與CD19+IgD+B比例呈正相關(guān)關(guān)系。

2.4 治療3月后復(fù)查CD19+IgD+B細(xì)胞比例較治療前明顯下降（t=10.763，P=0.00）

3討論

原發(fā)性干燥綜合征特征性表現(xiàn)為B細(xì)胞異常改變。B細(xì)胞在pss發(fā)病過程中存在分化及選擇紊亂，一方面B細(xì)胞表達(dá)過度活躍，使外周血產(chǎn)生大量異常的自身抗體.出現(xiàn)高丙球蛋白血癥；另一方面B細(xì)胞亞群分布異常，B細(xì)胞選擇性浸潤外分泌腺等組織[4]，進(jìn)而激活腺體局部炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致涎腺和淚腺遭受破壞。原發(fā)性干燥綜合征患者外周血B細(xì)胞的成熟狀態(tài)通過細(xì)胞表面IgD及CD38蛋白鏈進(jìn)行區(qū)分，通過IgD及CD38表達(dá)的不同可將B細(xì)胞分為Bm1到Bm5[5，6]。而不同種類的B細(xì)胞在原發(fā)干燥綜合征患者機體內(nèi)產(chǎn)生著不同的作用，可能與患者的疾病活動狀態(tài)密切相關(guān)。

原發(fā)干燥綜合征主要侵犯外分泌腺，唇腺為最常受累的器官，唇腺活檢可查見大量淋巴細(xì)胞浸潤，SS患者外分泌腺浸潤的淋巴細(xì)胞中60%～70%是T淋巴細(xì)胞.B淋巴細(xì)胞約為20%～25%。巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等不足5%。病理組織中浸潤的T淋巴細(xì)胞中70%以上是CD4+T細(xì)胞[7]。也有報道，干燥綜合征唇腺組織主要以B淋巴細(xì)胞浸潤為主[8]。因此，B細(xì)胞在干燥綜合征病情活動與臨床特征之間有著密切聯(lián)系。干燥綜合征患者存在高表達(dá)IgD蛋白鏈的B細(xì)胞，我們的研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性干燥綜合征患者外周血存在CD19+IgD+B細(xì)胞高表達(dá)，且明顯高于正常對照組與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組患者。我們在經(jīng)規(guī)范化治療3月后復(fù)查外周血CD19+IgD+B細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)治療后CD19+IgD+B比例是明顯下降的。說明CD19+IgD+B與原發(fā)干燥綜合征疾病的活動密切相關(guān)，可以反映患者的疾病活動度。同時我們對患者唇腺活檢結(jié)果與CD19+IgD+B細(xì)胞比例進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，存在淋巴細(xì)胞浸潤灶的患者CD19+IgD+B比例是明顯增高的，而有生發(fā)中心存在的患者CD19+IgD+B又明顯高于生發(fā)中心陰性患者。這說明了CD19+IgD+B細(xì)胞比例可評估患者的疾病活動狀態(tài)及治療效果。

干燥綜合征患者體內(nèi)存在大量的自身抗體，最主要的自身抗體為抗核抗體ANA，抗干燥綜合征抗SSA抗體，抗干燥綜合抗SSB抗體，抗干燥綜合癥抗Ro-52抗體及球蛋白。這些抗體主要為B細(xì)胞分泌，這些抗體一方面作為干燥綜合征診斷的依據(jù)，另一方面反映了干燥綜合征患者疾病的活動和體內(nèi)B細(xì)胞免疫紊亂的程度。干燥綜合征主要為B細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，B細(xì)胞免疫紊亂及活躍程度可可能反應(yīng)了患者的疾病活動狀態(tài)。我們的研究發(fā)現(xiàn)，患者疾病活動積分與CD19+IgD+B比例呈現(xiàn)明顯的正先關(guān)關(guān)系，同時我們在治療前后對CD19+IgD+B比例進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，CD19+IgD+B比例在治療后疾病較穩(wěn)定的情況下比例是明顯降低的，這說明了CD19+IgD+B比例反應(yīng)了患者疾病的活躍程度，可以作為評價干燥綜合征疾病活動及治療療效的指標(biāo)。

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