INNOVANCE測定血漿D—二聚體的分析性能驗證

摘要：目的 驗證INNOVANCE測定血漿D-二聚體的性能指標。方法 參照美國臨床和實驗室標準化協(xié)會的相關(guān)文件，對INNOVANCE在Sysmex CA1500全自動凝血分析儀上檢測D-二聚體的性能進行驗證。結(jié)果 正常值和病理值質(zhì)控品批內(nèi)不精密度（CV批內(nèi)）分別為4.2%、2.1%，正常值和病理值質(zhì)控品總不精密度（CV總）分別為5.7%、3.3%。攜帶污染率0.23%。測定 2個水平標準品準確度試驗的相對偏倚分別為-0.21%、4.0%。驗證的線性范圍0.196～4.33mg/L FEU，線性方程y=0.977x+0.506，r=0.9993。最大稀釋倍數(shù)為16倍。結(jié)論 INNOVANCE在Sysmex CA1500全自動凝血分析儀上測定血漿D-二聚體達到臨床要求的不精密度、攜帶污染率、準確度、線性范圍和最大稀釋度，符合臨床檢測要求。

關(guān)鍵詞：D-二聚體；免疫比濁法；性能驗證

本研究參照美國臨床和實驗室標準化協(xié)會（clinical and laboratory standards institute，CLSI）相關(guān)文件，對INNOVANCE在Sysmex CA1500全自動凝血分析儀上測定血漿DD的分析性能進行驗證，為該檢測系統(tǒng)在臨床的應(yīng)用提供可靠依據(jù)。

1 資料與方法

1.1儀器與試劑 Sysmex CA1500全自動凝血分析儀（出廠編號：F8633，日本希森美康公司），INNOVANCE定量檢測試劑盒（試劑批號：56013427，德國西門子醫(yī)療診斷公司），原裝配套質(zhì)控品、校準品：正常值質(zhì)控品（N值，批號：560761）、病理值質(zhì)控品（P值，批號：560662）、校準品1（C1，批號：56056921）、校準品2（C2，批號：56056921）。

1.2血漿標本的準備 按照《臨床檢驗操作規(guī)程》采集靜脈血，3000r/min離心15min，排除溶血、脂血、黃疸、污染的血漿標本，取INNOVANCE檢測臨床患者血漿DD濃度接近廠家測定范圍上限4.4mg/L FEU和下限0.19 mg/L FEU附近的標本備用。

1.3方法

1.3.1不精密度驗證 參照CLSI EP5-A2文件，使用2個濃度水平（N值和P值）的定值質(zhì)控品，測定2批/d，重復(fù)測定2次/批，2批測定時間間隔≥2h，連續(xù)測定10d，每個濃度可收集40個數(shù)據(jù)，計算批內(nèi)和總不精密度（CV）。所得結(jié)果與廠商提供的性能指標進行比較。

1.3.2攜帶污染率驗證 參照CLSI EP10-A2文件，取高值和低值患者血漿標本各1份，連續(xù)測定3次高值標本，測定結(jié)果記為H1、H2、H3，立即連續(xù)測定低值標本3次，測定結(jié)果記為L1、L2、L3。攜帶污染率（%）= （L1-L3）/（H3-L3）×100%。攜帶污染率應(yīng)≤1.0%。

1.3.3準確度驗證 參照CLSI EP15-A文件，使用2個濃度水平（N值和P值）質(zhì)控品和2個批號校準品，分別重復(fù)測定3次取均值作為測定值。計算相對偏倚，相對偏倚=[（靶值-測定值）/靶值]×100%。要求質(zhì)控品的測定值要在各質(zhì)控參考值范圍以內(nèi)，校準品的相對偏倚應(yīng)在±10%的范圍以內(nèi)。

1.3.4線性范圍驗證 參照CLSI EP6-A2文件，取接近廠家測定范圍下限低值（L）和上限高值（H）混合血漿樣本，將低值和高值標本按：5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H進行配比，制備5個等間距不同稀釋濃度的樣本。每個水平重復(fù)測定3次，取均值作為實測值用Y表示，X表示各樣本的預(yù)期值。計算回歸方程：Y=bX+a，相關(guān)系數(shù)r值應(yīng)>0.98。

1.3.5稀釋度驗證 參照CLSI EP6-A2文件，取接近廠家測定范圍上限混合血漿樣本4.5mg/L FEU，根據(jù)儀器設(shè)定的稀釋比例，用配套稀釋液按照以下稀釋倍數(shù)手工進行配比稀釋：原倍、1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64。分別測定2次，將實測值與稀釋后的理論值進行比較，計算回收率?；厥章?（實測值/理論值） ×100%，回收率在90%～110%為可接受。

2 結(jié)果

2.1不精密度驗證結(jié)果 批內(nèi)不精密度和總不精密度（CV）測定結(jié)果見表1。

2.2攜帶污染率驗證結(jié)果 攜帶污染率驗證結(jié)果見表2。

2.3準確度驗證結(jié)果 測定2個不同批次質(zhì)控品（N值、P值）和2個批次的校準品（C1、C2）準確度結(jié)果見表3。

2.4線性范圍驗證結(jié)果 驗證的線性范圍為0.196～4.33mg/L FEU，線性方程y=0.977x+0.506，相關(guān)系數(shù)r=0.9993，線性驗證的回歸曲線見圖1。

圖1 INNOVANCE測定血漿DD的線性驗證回歸曲線

2.5稀釋度驗證結(jié)果 對DD濃度為4.5mg/L FEU的血漿標本進行稀釋測定，最大稀釋倍數(shù)為16倍時，回收率仍然在可接受范圍內(nèi)。稀釋度驗證結(jié)果見表4。

3 討論

臨床實驗室DD檢測的分析性能驗證的方案及性能標準缺乏統(tǒng)一的標準，不同方法學(xué)只能針對自身的特性采用最佳方案及標準進行驗證。我實驗室針對INNOVANCE檢測試劑在Sysmex CA1500全自動血凝分析儀檢測DD水平的不精密度、攜帶污染率、準確度、線性范圍及稀釋度進行性能評價，依據(jù)EP5-A2文件進行分析性能評價可以得到與時間相關(guān)的不精密度，其中以批內(nèi)不精密度及總不精密度最有意義，雖然測定結(jié)果低于廠商建立不精密度的數(shù)值，但就實驗室驗證而言，能滿足臨床需要，其他性能均達到驗證要求，可以較好的服務(wù)于臨床。

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編輯/哈濤