隔藥灸對(duì)UC大鼠血清IL—17、IL—23含量的影響

摘要：目的 探討隔藥灸對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎（UC）大鼠血清IL-17、IL-23的影響及其可能的調(diào)控機(jī)制。方法 將SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、隔藥灸組和西藥組4組，采用免疫法加局部刺激造模，用ELISA 法檢測(cè)大鼠血清IL-17、IL-23的表達(dá)水平。結(jié)果 UC大鼠血清IL-17、IL-23水平均高于正常大鼠（P<0.05）。治療后，隔藥灸組和西藥組大鼠血清IL-17、IL-23均較模型組顯著降低（P<0.05）而隔藥組在下調(diào)兩者明顯優(yōu)于西藥組（P<0.05）。結(jié)論 隔藥灸能夠調(diào)控UC大鼠血清IL-17、IL-23的水平，這可能是隔藥灸治療UC的作用機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：隔藥灸；潰瘍性結(jié)腸炎；大鼠；IL-17；IL-23

潰瘍性結(jié)腸炎是一種非特異性炎癥性腸病，免疫反應(yīng)異常被認(rèn)為是UC發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)，研究表明，隔藥灸在調(diào)節(jié)UC發(fā)病過程中Th1、Th2介導(dǎo)的免疫功能上具有良好的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái)研究表明Th17主要相關(guān)細(xì)胞因子，尤其是IL-17/IL-23炎癥軸在UC的發(fā)病中具有重要的作用[1，2]。本研究通過觀察UC大鼠血清中IL-17、IL-23表達(dá)的變化，探討隔藥灸治療潰瘍性結(jié)腸炎對(duì)IL-17、IL-23調(diào)控的可能作用機(jī)理。

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用體重為（200±10）g的雄性清潔級(jí)SD大鼠44只， 由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。所有動(dòng)物購(gòu)回后適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，即納入實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為正常組12只、模型組32只。

1.2主要試劑和儀器 藥餅配方（附子、肉桂等）購(gòu)自鷺燕藥業(yè)股份有限公司；柳氮磺吡啶（SASP）250mg/片購(gòu)自上海三維制藥有限公司；IL-17、IL-23 ELISA試劑盒購(gòu)自杭州力拓生物技術(shù)有限公司；2% 戊巴比妥鈉購(gòu)自北京普博斯生物。ELX808 酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Tck公司；低溫高速離心機(jī)LABOFUGE400R購(gòu)自德國(guó)HERAEUS；ELT-13V-85V34超低溫冰箱購(gòu)自美國(guó)HARIS公司。

1.3模型制備和模型鑒定 參照吳煥淦等[3]的方法采用免疫法加局部刺激造模。造模結(jié)束后， 隨機(jī)選取模型組和正常組大鼠各2只斷頭處死， 通過結(jié)腸HE染色， 鑒定造模是否成功。

1.4分組與治療 將造模成功的UC大鼠模型隨機(jī)分為隔藥組10只，模型組10只，西藥組10只。正常組大鼠，作與隔藥灸組相同的固定；模型組不作任何治療，只做與隔藥灸組相同的固定。隔藥灸組取穴\"天樞\(zhòng)"（雙）、\"氣海\"、\"中脘\"，藥餅配方為附子、肉桂等。艾炷大小約90mg，隔藥餅灸1次/d，每次每穴灸2壯，共灸14次。西藥組采用柳氮磺胺吡啶溶液灌胃。每日投藥量按成人（70kg、體重）與大鼠（200g體重）1：0.018比例根據(jù)《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》（李儀奎，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991年）配制SASP溶液，灌胃3ml/次，2次/d，共灌胃14d。

治療結(jié)束后， 用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，心臟取血6ml，注入肝素抗凝管內(nèi)，3600轉(zhuǎn)/min離心15 min，取上層血清3ml，測(cè)定各組細(xì)胞因子含量，取血結(jié)束后各組大鼠斷頸處死。

1.5檢測(cè)指標(biāo) 采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清IL-17、IL-23含量，具體步驟按ELISA試劑盒操作。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS18.0處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間差異比較用LSD-t（方差齊）、Games-Howell（方差不齊）。

2結(jié)果

各組大鼠血清IL-17、IL-23的水平，見表1。

3討論

在中醫(yī)學(xué)中，UC當(dāng)屬中醫(yī)\"下利\"、\"痢疾\"、\"腹痛\"、\"便血\"等范疇。脾胃虛弱是本病發(fā)病的基礎(chǔ)，病情纏綿難愈，遷延日久則脾腎陽(yáng)虛，古人云\"久瀉無(wú)火\"。故我們采用隔藥灸治療UC，以臟腑、氣血、經(jīng)絡(luò)為依據(jù)，以腧穴功效為基礎(chǔ)，以溫補(bǔ)脾腎，疏調(diào)腸腑氣血為治療原則進(jìn)行針灸處方，采用通十二經(jīng)、理氣血之艾草作為施灸材料，并設(shè)計(jì)制作了溫陽(yáng)、行氣活血之藥餅，在氣海、中脘、天樞進(jìn)行治療，寓意標(biāo)本兼治，三穴配合共奏溫養(yǎng)脾腎，通調(diào)氣血，調(diào)和陰陽(yáng)之功。

研究表明隔藥灸可以調(diào)整UC大鼠的腸道菌群紊亂，并可有效抑制TNF-α、IL-12的過度表達(dá)[4]；可以調(diào)節(jié)諸多基因的表達(dá)[5]等等。為進(jìn)一步探討隔藥灸治療UC的作用機(jī)理，本研究采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清IL-17、IL-23水平及隔藥灸對(duì)其影響進(jìn)行了研究。

Thl7細(xì)胞是一種新近發(fā)現(xiàn)的不同于Thl、Th2細(xì)胞的CD4+T細(xì)胞亞群，其以分泌IL-17而得名。早期研究發(fā)現(xiàn)IL-23基因敲除小鼠體內(nèi)不能產(chǎn)生Th17，表明IL-23在Th17分化中發(fā)揮重要作用[6]，IL-23 是Thl7細(xì)胞存活、增殖的重要因子[7]，可以增加記憶性CD4+ T淋巴細(xì)胞IL-17的產(chǎn)量，在擴(kuò)增或穩(wěn)定Thl7細(xì)胞表型方面發(fā)揮重要作用[8]。IL-23與Th17表面IL-23受體結(jié)合，促使Th17細(xì)胞穩(wěn)定擴(kuò)增， 從而表達(dá)大量效應(yīng)致炎細(xì)胞因子IL-17，破壞腸黏膜屏障、損傷腸上皮細(xì)胞，導(dǎo)致腸道炎癥[1]。IL-23作為IL-23/IL-17軸中炎癥的始動(dòng)因子， 而IL-17則為核心致炎因子， 促發(fā)炎癥的級(jí)聯(lián)放大，最終介導(dǎo)了腸道炎癥的發(fā)生和腸黏膜的損傷。研究發(fā)現(xiàn)IL-23/IL-17軸在炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制中可能處于關(guān)鍵地位，并有望成為新的治療靶標(biāo)。

本項(xiàng)研究結(jié)果顯示模型組、隔藥灸組、西藥組UC大鼠血清IL-17、IL-23水平明顯高于正常組，經(jīng)過治療后，隔藥灸組在降低血清的IL-17、IL-23水平優(yōu)于西藥組，筆者認(rèn)為這可能是隔藥灸治療UC的可能機(jī)制是調(diào)控二者的血清水平，同時(shí)這也是隔藥灸的優(yōu)勢(shì)之一。

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編輯/申磊