HPLC法測(cè)定腦力靜顆粒中三種維生素的含量

摘要：目的 采用高效液相色譜（HPLC）對(duì)腦力靜顆粒中三種維生素進(jìn)行含量測(cè)定研究，以更好的對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。方法 采用HPLC法進(jìn)行分析，安捷倫Extend-C18（4.6×150mm，粒徑5μm），流動(dòng)相：乙腈-0.01mol/L庚烷磺酸鈉與0.02mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液（用10%磷酸調(diào)節(jié)PH值3.0）（20：80）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。流速1.0ml/min，柱溫25℃。結(jié)果 該法操作簡(jiǎn)便，線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收均良好，結(jié)果滿意。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便易行，為風(fēng)痛寧片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供了方法參考。

關(guān)鍵詞：腦力靜顆粒；HPLC；維生素；含量測(cè)定

1 儀器與試劑

1.1儀器 高效液相色譜儀（島津，LC-10AT），超聲儀（上海聲源，SY3200），離心機(jī)（上海安亭，TDL-5）。

1.2 試劑 甲醇、庚烷磺酸鈉為色譜純，冰醋酸、三乙胺為分析純，重蒸水；維生素B1對(duì)照品（批號(hào)：100390-200703，含量99.9%）、維生素B2對(duì)照品（批號(hào)：100369-201103，含量99.1%）、鹽酸吡哆辛（VB6）對(duì)照品（批號(hào)：100116-201103，含量100.0%）均由中國(guó)食品藥品檢定院提供。腦力靜顆粒由安徽廣印堂中藥股份有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇 梯度洗脫，色譜柱：phenomenex-Prodigy C18250×4.6mm，5um；流動(dòng)相A：三乙胺-冰醋酸-甲醇-0.018mol/L庚烷磺酸鈉（0.2：7.5：200：800）；流動(dòng)相B：甲醇，梯度洗脫0、30、40、50、51min時(shí)，甲醇分別為0%、0%、40%、40%、0%；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。維生素B1、維生素B2、維生素B6的理論板數(shù)均在5000以上，分離度大于1.5。

2.2對(duì)照品溶液的制備 分別取維生素B1對(duì)照品20mg、維生素B2對(duì)照品10mg、維生素B6對(duì)照品20mg，精密稱定，置同一50ml量瓶中，加15%甲醇45ml，水浴加熱并超聲使溶解，取出，放冷，加15%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置25ml量瓶中，加15%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml約含維生素B10.032mg、維生素B20.016mg、維生素B60.032mg）。

2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取2.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加15%甲醇20ml，超聲處理（功率200W，頻率50kHz）30min，取出，放冷，加15%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.4缺維生素陰性對(duì)照溶液 按處方組成，取除維生素B1、B2、B6外的其余各藥，按工藝要求制成不含維生素的模擬制劑，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20μl，注入液相色譜儀，結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液對(duì)維生素B1、維生素B2、維生素B6含量測(cè)定均無(wú)干擾，專屬性強(qiáng)。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備與線性范圍的確定 分別精密稱取維生素B110.08mg、維生素B25.40mg、維生素B610.16mg置100ml量瓶中，用15%甲醇適量水浴加熱并超聲使溶解，放冷，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10ml分別至10ml量瓶中，用15%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案含量測(cè)定項(xiàng)下維生素B色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，以峰面積（S）對(duì)濃度（C）做二元一次線性回歸。

結(jié)果表明：維生素B1濃度范圍在10.08ug/ml～100.8ug/ml之間峰面積（S）與濃度（C）線性關(guān)系良好，其回歸方程S=30926C+75725，r=0.9997；維生素B2濃度范圍在5.40ug/ml～54.00ug/ml之間峰面積（S）與濃度（C）線性關(guān)系良好，其回歸方程S=86066C-34756，r=0.9991；維生素B6濃度范圍在10.16ug/ml～101.6ug/ml之間峰面積（S）與濃度（C）線性關(guān)系良好，其回歸方程S=15010C-7007.7，r=0.9996。

2.6中間精密度試驗(yàn) 取同一批樣品，按供試品溶液的制備項(xiàng)下的維生素B供試品溶液方法制備6份，在不同的儀器，按色譜條件項(xiàng)下的條件測(cè)定，結(jié)果Vb1含量的RSD為0.79%，Vb2含量含量的RSD為1.17%，Vb6含量的RSD為1.18%，結(jié)果表明：三種維生素中間精密度結(jié)果表明本法在不同儀器重現(xiàn)性較好。

2.7樣品的含量測(cè)定及限度 試驗(yàn)結(jié)果表明：三種維生素在不同規(guī)模試制的樣品中含量測(cè)定較一致。按理論處方量投料，考慮到制劑含量測(cè)定時(shí)各維生素的提取率（95%以上）及實(shí)際生產(chǎn)制劑過(guò)程中損失量及長(zhǎng)期留樣后降解量，因此，擬定將本品中維生素的含量限度定為：維生素B1不少于1.5mg/袋、維生素B2不少于0.75mg/袋、維生素B6不少于1.5mg/袋。

3討論

3.1流動(dòng)相的選擇 以不同流動(dòng)相等濃度洗脫，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，柱溫為35℃，結(jié)果含有庚烷磺酸鈉的流動(dòng)相分離效果好，且隨庚烷磺酸鈉濃度增大維生素B2與維生素B6分離度增大，但庚烷磺酸鈉濃度過(guò)大時(shí)陰性樣品對(duì)維生素B2有干擾；等濃度時(shí)維生素B1出峰時(shí)間比較長(zhǎng)，甲醇濃度加大對(duì)樣品的分離效果也不好。參照文獻(xiàn)最后確定以三乙胺-冰醋酸-甲醇-0.018mol/L庚烷磺酸鈉（0.1：3.75：100：400）為流動(dòng)相A，甲醇為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫[1～3]。

3.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 結(jié)合PDA光譜掃描圖，維生素B1在246nm、、維生素B2在267nm、維生素B6290nm波長(zhǎng)處有最大吸收，而維生素B2在樣品中濃度最低，故選擇中間波長(zhǎng)270nm作為本法的測(cè)定波長(zhǎng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑[S].第十九冊(cè)1998，162.

[2]中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.376～376.

[3]李祥勝，闞家義.腦力靜糖漿中3種維生素含量測(cè)定.安徽醫(yī)藥[J].2007，11（9）807～808.

編輯/葉致遠(yuǎn)