標(biāo)本存放對(duì)胰島素和C肽檢測結(jié)果的影響

摘要：目的 探討標(biāo)本放置時(shí)間和溫度對(duì)胰島素和C肽結(jié)果的影響，以期建立實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本存放標(biāo)準(zhǔn)。方法 30例標(biāo)本采用化學(xué)發(fā)光的方法檢測其胰島素和C肽水平，并置于室溫（21℃）、4℃和-20℃，測定不同保存時(shí)間的胰島素和C肽水平。結(jié)果 血清置-20℃溫度24h和1w，4℃溫度4h與即時(shí)檢測結(jié)果相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；血清置室溫溫度（21℃）1h，置4℃溫度12h與即時(shí)檢測結(jié)果相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；標(biāo)本經(jīng)室溫保存2、3h，4℃保存72h與-20℃保存4w（672h）后，胰島素和C肽水平顯著下降（P<0.01）。結(jié)論 標(biāo)本冷凍是準(zhǔn)確檢測血清胰島素和C肽的金標(biāo)準(zhǔn)，而室溫下保存可能降低分析物的檢測水平。血漿樣品儲(chǔ)存在4℃，應(yīng)在靜脈穿刺后4h內(nèi)進(jìn)行分析。

關(guān)鍵詞：胰島素；C肽；保存溫度；保存時(shí)間

Abstract：Objective To investigate the impact of storage time and temperature on test results of insulin and C-peptide， and to develop laboratory Standards for Samples Storage . Methods The serum insulin and C peptide levels in 30 blood samples were determined by chemiluminescence immunoassay. Samples were stored at room temperature， 4℃ and -20℃， and then analyzed at different times. Results Compared with Point-Of-Care Testing（POCT）， there was no substantial change in insulin and C peptide levels when blood samples stored at -20℃for 24 or 168 hours and 4℃for 4 hours（P>0.05）.At room temperature for 1 hour and 4℃ for 12 hours，There was significantly difference of insulin and C peptide levels when compared to POCT（P<0.05）. Significant changes were also observed for insulin and C peptide （decrease at 2 and 3 hours， room temperature； 72hours， 4℃； 672hours，-20℃）（P<0.01）.Conclusion Our study confirmed that sample freezing is the gold standard for accurate determination of serum insulin and C peptide， that storage at room temperature may decrease the analyte levels. Plasma samples should be stored at 4°C and analysed within 4 hours of venepuncture.

Key words：Insulin ； C peptide ；Storage temperature；Storage time

胰島素C肽檢測（INS，C-P）是目前臨床為診斷糖尿病和治療糖尿病最重要的輔助檢查[1]，為使胰島素C肽檢測（INS，C-P）結(jié)果準(zhǔn)確可靠，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室分析前、分析中、分析后質(zhì)量管理非常必要。國內(nèi)多數(shù)實(shí)驗(yàn)室缺乏標(biāo)本分析前后的管理標(biāo)準(zhǔn)。全血標(biāo)本保存時(shí)間及溫度的不同，胰島素C肽檢測（INS，C-P）結(jié)果可能會(huì)發(fā)生較大變化。本文通過不同溫度，不同時(shí)間存放標(biāo)本，探討標(biāo)本存放條件對(duì)胰島素C肽檢測（INS，C-P）結(jié)果的影響，以期建立實(shí)驗(yàn)室胰島素C肽檢測（INS，C-P）標(biāo)本存放標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)質(zhì)量管理有所改進(jìn)。

1資料與方法

1.1一般資料 標(biāo)本是隨機(jī)抽取本院30例患者標(biāo)本（空腹+餐后），患者32～79歲，男14例，女16例。標(biāo)本外觀無黃疸，無脂血和溶血。

1.2方法 30例標(biāo)本使用無添加試管采血，離心后血清。儀器采用北京科美東雅全自動(dòng)發(fā)光檢測儀。試劑為科美東雅INS和C-P試劑，批號(hào)INS 20130528，C-P 20130528，規(guī)格均為96管。試驗(yàn)分多次完成，即時(shí)正常檢測INS和C-P，同時(shí)取3份血清各1ml分別入室溫溫度（21℃）、4℃溫度冰箱內(nèi)、-20℃溫度冰箱內(nèi)。室溫溫度（21℃）內(nèi)血清分別1h、2h、3h進(jìn)行檢測。4℃溫度冰箱內(nèi)血清分別4h、12h、72h進(jìn)行檢測。-20℃溫度冰箱內(nèi)血清分別24h、72h、4w進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控 質(zhì)控品采用科美東雅公司提供的INS和C-P高低兩個(gè)質(zhì)控點(diǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間差異比較采用配對(duì)設(shè)計(jì)的兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1室溫結(jié)果 從表1中結(jié)果可見，即時(shí)結(jié)果與室溫溫度（21℃）1h結(jié)果發(fā)生差異（P<0.05），隨放置時(shí)間的延長，室溫檢測結(jié)果濃度不斷降低。即時(shí)結(jié)果與室溫溫度（21℃）2h，3h結(jié)果發(fā)生顯著差異（P<0.01）。

2.2 4℃結(jié)果 從表2中結(jié)果可見，即時(shí)結(jié)果與4℃溫度冰箱內(nèi)4h結(jié)果無變化，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨放置時(shí)間的延長，4℃溫度冰箱內(nèi)的結(jié)果濃度開始降低，即時(shí)結(jié)果與4℃溫度冰箱內(nèi)12h結(jié)果發(fā)生差異（P<0.05）。隨放置時(shí)間的再次延長即時(shí)結(jié)果與4℃溫度冰箱內(nèi)72h結(jié)果發(fā)生顯著差異（P<0.01）。

2.3 -20℃結(jié)果 從表3中結(jié)果可見，即時(shí)結(jié)果與-20℃溫度冰箱內(nèi)24h，1w結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但長時(shí)間放置后，即時(shí)結(jié)果與-20℃溫度冰箱內(nèi)4w結(jié)果發(fā)生顯著差異（P<0.01）。

3討論

胰島素C肽檢測（INS，C-P）可用于診斷Ⅰ.Ⅱ型糖尿病，用于判斷Ⅱ型糖尿病胰島素治療效果，指導(dǎo)臨床具有重要作用，對(duì)臨床診斷非常必要[2]。胰島素，C肽均從胰島素原分裂而成，每一個(gè)胰島素原分子均在胰島B細(xì)胞中特殊蛋白酶的作用下裂解為1分子胰島素，一分子C肽。胰島素分子量5734，C肽分子量3617，它們生物半衰期都很短，胰島素為15min而C肽也只有20min[3，4]，以上結(jié)構(gòu)和特性存放胰島素和C肽在室溫條件下極不穩(wěn)定，存放溫度和時(shí)間的變化可能對(duì)檢測結(jié)果有影響。從上表中可以看出，胰島素C肽在室溫溫度（21℃）保存1h后和4℃保存12h后與即時(shí)檢測相比，其結(jié)果就會(huì)發(fā)生統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異（P<0.05）。胰島素C肽在室溫溫度（21℃）保存2h和3h后檢測和4℃保存72h后與即時(shí)檢測相比，其結(jié)果既有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著差異（P<0.01），而-20℃保存72h后無變化，直到4w后結(jié)果與即時(shí)結(jié)果發(fā)生顯著差異（P<0.01）。以上結(jié)果表明同一份標(biāo)本室溫保存比4℃保存和-20℃保存結(jié)果更低，說明低溫能抑制酶的活性[4]，而長時(shí)間冷藏和室溫均使生物活性降低，結(jié)果出現(xiàn)錯(cuò)誤。說明標(biāo)本冷凍能有效減少干擾。因此在血液標(biāo)本的采集﹑運(yùn)輸﹑轉(zhuǎn)移﹑保管和分離過程中應(yīng)保持低溫環(huán)境，以最大程度降低生物活性。

面對(duì)免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量速度的要求，免疫項(xiàng)目檢測4h內(nèi)完成標(biāo)本的分離與檢測，所以我們以4℃保存4h為界限來評(píng)價(jià)胰島素C肽檢測（INS，C-P）標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)胰島素C肽檢測（INS，C-P）的質(zhì)量影響，結(jié)果在4h以內(nèi)可以滿足質(zhì)量要求。如有復(fù)查標(biāo)本可進(jìn)行-20℃保存，可穩(wěn)定4w，不會(huì)造成結(jié)果差異。確保胰島素C肽檢測（INS，C-P）的準(zhǔn)確性，保證實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量要求。

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編輯/申磊