海南糞箕篤根莖中總生物堿含量的測定

程彬　戴華　白麗麗

摘要[目的]建立海南糞箕篤總生物堿含量測定的方法。[方法]以鹽酸小檗堿為對照品，溴甲酚綠為酸性染料，在緩沖溶液pH=5.4條件下，于421 nm波長處測定其吸光度。[結(jié)果]糞箕篤在0～15.75 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 5），平均回收率為103.21%，RSD=0.30%。[結(jié)論]該法簡便、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于糞箕篤總生物堿的含量測定。

關(guān)鍵詞糞箕篤；生物堿含量；分光光度法；根莖

中圖分類號S567文獻標識碼A文章編號0517-6611（2015）16-067-02

Determination of Total Alkaloids in Rhizome of Stephania longa L. from Hainan Province

CHENG Bin1， DAI Hua2， BAI Lili1*

（1. School of Pharmaceutical Sciences， Hainan Medical University， Haikou， Hainan 571199； 2. School of Public Health， Hainan Medical University， Haikou， Hainan 571199）

Abstract[Objective] To establish a method for the determination of total alkaloids in Stephania longa L.from Hainan Province. [Method] With berberine hydrochloride as the control， bromocresol green as acid dye colorimetry， the content of total alkaloids in Stephania longa L. was determined by spectrophotometry at 421 nm and sodium citrate buffer solution at pH=5.4. [Result] The linear ranges of the total alkaloids were 0-15.75 μg/ml （r=0.999 5）. The average recovery was 103.21% （RSD=0.30%）. [Conclusion] The method is simple， accurate and reproducible， which can be used for content determination of total alkaloids in S. longa.

Key words Stephania longa L.； Alkaloids content； Spectrophotometry； Rhizome

糞箕篤（Stephania longa L.）為防己科千金藤屬植物，多年生草質(zhì)藤本，廣泛分布于廣東、福建、臺灣、海南等我國南部地區(qū)[1]。在海南全省各地可見，生于村邊或曠野灌木叢中，是天然的南藥資源。全株可入藥，味辛、性平，具有清熱解毒、利濕消腫、袪風(fēng)活絡(luò)、抑菌、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等功效[2-3]。該屬植物富含生物堿，近年來對該屬植物的化學(xué)成分及藥理進行研究[4-8]，但有關(guān)糞箕篤總生物堿含量的測定鮮有報道。筆者主要采用分光光度法，以鹽酸小檗堿為對照品，對海南糞箕篤根莖中的總生物堿進行含量測定，為糞箕篤及其千金藤屬其他植物的藥用開發(fā)與利用奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1儀器

UV1600型紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器有限公司）；PHS-3C型酸度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；B210S分析天平（北京賽多利斯有限公司）。

1.2試藥

鹽酸小檗堿標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號110713-201212，純度86.7%）；糞箕篤藥材（采自海南

文昌），經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院曾念開副教授鑒定為糞箕篤Stephania longa L.根莖，晾干粉碎后備用。所用試劑均為分析純，水為

蒸餾水。

1.3試驗方法

1.3.1試液配制。

1.3.1.1對照品溶液的制備。精密稱取在110 ℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品10.1 mg置于50 ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，按86.7%計算，即得175 μg/ml。

1.3.1.2供試品溶液的制備。糞箕篤粉末約2.0 g精密稱量6份，置于圓底燒瓶中，用85%乙醇回流2 h，濃縮后經(jīng)氯仿提取，于100 ml容量瓶中定容至刻度，低溫冷藏、備用。

1.3.1.3顯色液和緩沖液的配制。按藥典方法配制溴甲酚綠酸性染料溶液，以及pH=5.4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液[9]。

1.3.2吸收波長的選擇。精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液和供試品溶液各0.5 ml，置分液漏斗中，加檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液5.0 ml，溴甲酚綠溶液2.0 ml，搖勻，加入氯仿10.0 ml，充分振搖，靜置1 h，分出氯仿層，于200～600 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，同時以氯仿作為空白參比液。

1.3.3方法學(xué)考察。

1.3.3.1線性關(guān)系考察。精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，加水0.9、0.8、0.7、0.5、0.3、0.1 ml，按“1.3.2”項操作，充分振搖后，靜置1 h，分出氯仿層。室溫放置40 min后，在421 nm下測定吸光度值，同時以氯仿為空白對照。

1.3.3.2穩(wěn)定性考察。取供試品溶液，在室溫和室內(nèi)光照條件下密閉放置，分別在0、5、10、30、60、120 min時測定吸光度值。

1.3.3.3精密度試驗。精密量取對照品溶液0.5 ml，余下操作同“1.3.2”項，依次測得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.4重復(fù)性試驗。取供試品溶液6份，操作同“1.3.2”項，依次測得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.5加標回收試驗。取6份供試品溶液，分別加入175 μg/ml鹽酸小檗堿對照品溶液0.23 ml，依照“1.3.2”項操作，在421 nm波長處測定吸光度值。

1.3.4總生物堿含量的測定。取供試品溶液6份，每份0.5 ml，用氯仿定容至10.0 ml，按“1.3.2”項操作，分別測得吸光度值，根據(jù)標準曲線進行含量計算。

2結(jié)果與分析

2.1波長的選擇

取供試品與對照品在200～600 nm的波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果顯示（圖1），鹽酸小檗堿對照品溶液和供試品溶液均在421 nm處有吸收峰，而空白參比液在421 nm處沒有吸收，故該試驗選擇421 nm作為測定波長。

圖1對照品溶液（a）和空白參比液（b）全波長掃描圖

2.2方法學(xué)考察

2.2.1線性關(guān)系的考察。精確量取對照品溶液，在421 nm處測其吸光度。以吸光度值為縱坐標、濃度（μg/ml）為橫坐標繪制標準曲線（圖2），得出線性回歸方程為A=0.074 0C+0.014 5，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5，在濃度0～15.75 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2標準曲線圖

2.2.2穩(wěn)定性試驗。平行測定6次，得其RSD=0.20%（n=6），表明供試品溶液在0～120 min內(nèi)基本穩(wěn)定，滿足試驗要求。

2.2.3精密度試驗。平行測定6次，得其RSD=0.16%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.4重復(fù)性試驗。平行測定6次，得其RSD=2.20%（n=6），表明重現(xiàn)性較好，符合試驗要求。

2.2.5加標回收試驗。由表1可知，該法回收率為102.75%～103.57%，平均回收率為103.21%，RSD=0.30%（n=6），表明回收率較好，符合試驗要求。

表1加標回收率試驗結(jié)果

測量次數(shù)樣品含量μg加標量μg吸光度回收率%平均回收率∥%RSD%

134.0540.250.630 9103.46103.210.30

234.0740.250.628 1102.96

334.0040.250.629 2103.23

434.0540.250.626 6102.75

534.0940.250.631 9103.57

634.0346.460.629 8103.31

2.3總生物堿含量的測定平行測定6份試液，由表2可知，糞箕篤根莖中總生物堿含量為0.38%～0.40%，平均含量為0.39%，RSD=2.20%（n=6）。

表2糞箕篤根莖中總生物堿含量測定結(jié)果

序號吸光度含量∥%

10.313 30.40

20.297 30.38

30.297 00.38

40.308 00.40

50.305 70.39

60.310 30.40

平均值0.305 30.39

3結(jié)論與討論

采用分光光度法測定糞箕篤根莖中總生物堿含量平均為0.39%，操作簡便快捷，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準確可靠。溴甲酚綠顯色法測定總生物堿含量時，選擇合適的pH很重要，其他條件對測定結(jié)果影響較小[10]，故該試驗參考文獻[9]選定pH=5.4。該方法與液相色譜法比較，具有所用儀器簡單、操作方便、耗時少的優(yōu)點。

參考文獻

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