染色質(zhì)重塑因子ARID1A在胃癌中的表達(dá)及臨床意義

竇曉壇 李 麗 謝 穎 鄒曉平

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一。近年來，雖然胃癌的發(fā)病率有所下降，但病死率仍較高［1］。目前晚期胃癌的治療以化學(xué)治療為主，用于胃癌的靶向治療藥物還較少［2］。由于胃癌是一種異質(zhì)性很強的疾病，尋找與胃癌發(fā)病及預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)志物顯得尤為重要［3］。

染色質(zhì)重塑因子AT豐富結(jié)合域1 A（ARID1A）是SWI／SNF染色質(zhì)復(fù)合物家族的重要成員，ARID1 A失活導(dǎo)致的染色質(zhì)重塑可促進多種腫瘤的發(fā)生和進展，提示ARID1 A起到抑癌基因的作用［4］。目前有研究發(fā)現(xiàn)，ARID1 A在胃癌中存在高頻突變，并與PIK3CA和TP53突變相關(guān)，提示ARID1 A在胃癌中起到重要作用［5］。

本研究旨在通過免疫組織化學(xué)檢測ARID1 A在胃癌中的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為將其作為胃癌早期診斷、判斷預(yù)后的指標(biāo)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 資料

組織芯片購自上海卓立生物科技公司，包括2008年行手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本103例以及癌旁組織41例。其中男43例，女60例，年齡32～78歲，平均年齡58.6歲。所有患者術(shù)前均未進行任何化學(xué)治療和放射治療。根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進行分期，Ⅰ～Ⅱ期59例，Ⅲ～Ⅳ期44例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者56例，無轉(zhuǎn)移者47例。

1.2 免疫組織化學(xué)方法

標(biāo)本作4μm厚度的連續(xù)切片，經(jīng)脫蠟、水化處理后，檸檬酸鹽高溫高壓修復(fù)3 min，雙氧水30 min以阻斷外源性過氧化物酶，山羊血清37℃封閉20 min，兔抗人ARID1 A多克隆抗體（Abcam公司，1∶200稀釋，一抗）4℃過夜，山羊抗兔二抗（北京中杉金橋公司）37℃ 孵育40 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水透明封片。

1.3 結(jié)果判定

顯微鏡下計數(shù)ARID1 A陽性細(xì)胞，計算陽性表達(dá)的百分?jǐn)?shù)。根據(jù)細(xì)胞染色百分率分別計分：無陽性細(xì)胞計0分，陽性細(xì)胞＜25%計1分，25%～50%計2分，50%～75%計3分，＞75%計4分。根據(jù)染色強度分別計分：未染色計0分，弱染色計1分，中等染色計2分，強染色計3分。采用染色強度與細(xì)胞染色百分率評分相乘的計分方法，≤3分為陰性，＞3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。應(yīng)用χ2檢驗分析與臨床病理特征的相關(guān)性，Kaplan－Meier單因素分析和Cox多因素分析來分析與預(yù)后的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 ARID1 A在胃癌中的表達(dá)

在103例胃癌組織中，36例表達(dá)陽性，陽性率35.0%。而在41例癌旁組織中，23例表達(dá)陽性，陽性率56.1%。ARID1 A在胃癌組織中的陽性表達(dá)顯著低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1、圖2。

圖1 ARID1 A在胃癌中的表達(dá)

圖2 ARID1 A在癌旁組織中的表達(dá)

2.2 ARID1 A表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

ARID1 A的表達(dá)與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和 TNM 分期呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），即ARID1 A在腫瘤體積大、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ⅲ～Ⅳ期的胃癌組織中表達(dá)較低，而其與性別、年齡、Lauren分型、腫瘤浸潤深度無關(guān)（P＞0.05）。見表1。

表1 ARID1A蛋白在胃癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 ARID1A表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

Kaplan－Meier單因素分析顯示ARID1 A表達(dá)、腫瘤大小、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期與患者預(yù)后相關(guān)（P＜0.05），見圖3。Cox多因素分析結(jié)果顯示，ARID1 A表達(dá)是影響胃癌患者預(yù)后的獨立因素（P＜0.05），見表2。

3 討論

胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個涉及多種基因、多個步驟的復(fù)雜過程［6］。目前認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生不僅包括遺傳學(xué)的改變（即基因改變），如堿基插入或缺失，同時也包括表觀遺傳學(xué)改變。表觀遺傳學(xué)改變是指在基因核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因表達(dá)的可遺傳改變，其主要包括染色質(zhì)重塑、DNA甲基化和非編碼RNA［7］。染色質(zhì)重塑過程需要兩類復(fù)合物參與，一類是ATP依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合物，另一類是蛋白質(zhì)共價修飾復(fù)合物，如組蛋白乙?；?。ATP依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合物由多種亞基組成，通過影響局部染色質(zhì)結(jié)構(gòu)而激活或抑制基因轉(zhuǎn)錄［8］，其中ARID1 A是重要的亞基之一。

圖3 胃癌患者預(yù)后分析

表2 胃癌患者多因素預(yù)后分析

ARID1 A屬于SWI／SNF重塑復(fù)合物成員，人ARID1 A基因定位于第1號染色體1p35.3，包含20個外顯子，編碼一個由2 285個氨基酸殘基構(gòu)成，相對分子質(zhì)量約240 000的蛋白質(zhì)［9］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，ARID1 A在許多腫瘤中有特異性的突變，如在卵巢透明細(xì)胞癌中有50%的突變，在33%的子宮內(nèi)膜癌中也有突變［4，10］。研究表明 ARID1 A可能起到抑癌基因的作用。Katagiri等［11］運用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測ARID1 A在60例卵巢透明細(xì)胞癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ARID1 A在腫瘤中出現(xiàn)表達(dá)缺失，與FIGO分期和CA125水平相關(guān)。預(yù)后分析提示ARID1 A表達(dá)是卵巢癌的獨立預(yù)后因素。

目前有研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌中也存在ARID1 A的高頻突變，且這種突變在EB病毒感染和存在微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的胃癌亞型中頻率更高［5，12］。ARID1 A在胃癌中也起到抑癌基因的作用。Wang等［13］采用免疫組織化學(xué)和real－ti me技術(shù)檢測ARID1 A在胃癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)與非腫瘤組織相比較，ARID1 A在胃癌中的表達(dá)降低，并與T分期和分級相關(guān)，且預(yù)后分析提示ARID1 A是胃癌的獨立預(yù)后因素，Yan等［14］的研究也得出類似結(jié)論。但是 Wiegand等［15］的研究并未發(fā)現(xiàn)ARID1A是胃癌的獨立預(yù)后因素。本研究發(fā)現(xiàn)，與癌旁組織相比，ARID1 A在胃癌中的表達(dá)降低，且與腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期呈負(fù)相關(guān)，預(yù)后分析也發(fā)現(xiàn)ARID1 A是胃癌的獨立預(yù)后因子。以上研究提示ARID1 A可能參與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。

目前對于ARID1 A對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的機制研究還較少。Yan等［14］發(fā)現(xiàn)沉默ARID1 A后 E－鈣黏蛋白（E－cadherin）的表達(dá)也降低，熒光素酶報告基因和染色質(zhì)免疫共沉淀（CHIP）顯示ARID1 A與CDH1（編碼E－cadherin）啟動子區(qū)結(jié)合，調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。降低ARID1 A表達(dá)后，可促進胃癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），從而促進其侵襲和轉(zhuǎn)移。ARID1 A是否對胃癌細(xì)胞的其他生物學(xué)行為有影響，如增殖、凋亡、血管形成等，尚需進一步研究。

綜上所述，ARID1A是胃癌發(fā)生發(fā)展中的重要因子，與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，這可為研究胃癌的發(fā)生機制和尋找靶向治療靶點提供依據(jù)。

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