錫葉藤的化學(xué)成分

周興棟， 余紹福， 程 淼， 鄒惠亮， 劉百聯(lián)， 張 英， 周光雄

(暨南大學(xué)藥學(xué)院中藥及天然藥物研究所，廣東廣州510632)

錫葉藤 Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland 為五椏果科(Dilleniaceae)錫葉藤屬植物，屬常綠木質(zhì)藤本，在我國主要分布于廣東、廣西、海南、云南等熱帶及亞熱帶地區(qū)，生長在低海拔山地的疏林和灌木叢中［1］.其主要以根、葉為藥用部位［2］，是廣西壯族民間常用的藥材［3］.錫葉藤有收斂止瀉、固精、消腫止痛等功能，用于腹瀉、便血、痢疾、肝脾腫大、子宮脫垂、白帶、遺精、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎［4］.錫葉藤的乙醇提取物有較強(qiáng)抗心血管疾病和抗病毒活性［5］.目前有關(guān)錫葉藤的研究非常少，主要集中在植物形態(tài)和生藥材鑒定方面.為了深入探索錫葉藤的化學(xué)成分，促進(jìn)錫葉藤的藥用開發(fā)，我們在前期研究報(bào)道了其中檸檬素等11個(gè)黃酮或多酚類等11個(gè)化合物［6］的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對其體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇提取物進(jìn)行了成分的分離純化和鑒定研究，得到了原花色素A2、香草酸等一系列酚酸、三萜和甾體類化合物.

1 儀器與材料

Avance III 300 MHz核磁共振儀(德國Bruker公司);LCQ Advantage MAX質(zhì)譜儀(美國Finnign公司);Agilent 1200型高效液相分析色譜儀(美國Agilent公司);Agilent 1200型高效液相半制備色譜儀(美國Agilent公司);Welch Material XB-C18分析色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);Welch Material XBC18半制備色譜柱(10 mm ×250 mm，5 μm);EYELA(N-1000)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化器械株式會社);凝膠Sephadex LH-20(美國Pharmacia公司);薄層色譜硅膠預(yù)涂板(HSAF 254，200 mm×200 mm，煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所);ODS(50 μm，日本YMC公司);柱色譜硅膠(青島海洋化工廠);色譜純甲醇溶劑(山東禹王有限公司);分析純?nèi)軇?天津大茂化學(xué)試劑公司);氘代試劑(美國CIL公司).

實(shí)驗(yàn)所用藥材錫葉藤(地上部分)于2013年6月采自廣東省從化流溪河區(qū)域，經(jīng)暨南大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室周光雄教授鑒定為五椏果科錫葉藤屬錫葉藤［Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland］，該植物標(biāo)本(No.2013XYT004)保存于暨南大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室中藥標(biāo)本室.

2 提取與分離

將干燥的錫葉藤55 kg粉碎，用體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇加熱(85℃)回流提取3次.提取液減壓濃縮后得到的浸膏加水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚萃取物110 g，乙酸乙酯萃取物460 g，正丁醇萃取液旋蒸至近干，加體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇保存.

取乙酸乙酯層430 g進(jìn)行硅膠柱層析，經(jīng)氯仿－甲醇(v氯仿∶v甲醇=100∶0→0∶100)梯度洗脫，得到20個(gè)組分(組分A～T).各組分再通過硅膠柱層析、凝膠柱層析、HPLC制備及重結(jié)晶等分離方法，共分離得到13個(gè)化合物.其中，組分A、E、F的分離方法相同，先進(jìn)行硅膠柱層析，石油醚－乙酸乙酯梯度洗脫，再經(jīng)反復(fù)凝膠柱層析得到化合物.從組分A(1 g)中分離得到化合物11(6 mg);從組分E(3 g)中分離得到化合物2(50 mg)、3(5 mg)和12(11 mg);從組分F(10 g)中得到化合物4(7 mg)和9(21 mg).組分I(7 g)先進(jìn)行硅膠柱層析，氯仿－丙酮梯度洗脫，再經(jīng)凝膠柱層析、HPLC制備(分離條件:210 nm，流速6 mL/min，體積分?jǐn)?shù)為35%色譜甲醇－水等度洗脫)，得到化合物5(11 mg)和10(8 mg).組分K(10 g)先進(jìn)行硅膠柱層析，氯仿－丙酮梯度洗脫，重結(jié)晶得到化合物13(58 mg)，母液經(jīng)HPLC制備(分離條件:210 nm，流速6 mL/min，體積分?jǐn)?shù)為20%色譜甲醇－水等度洗脫)得到化合物7(13 mg)和8(12 mg).組分N(7 g)先進(jìn)行硅膠柱層析，氯仿－甲醇梯度洗脫，再經(jīng)凝膠柱層析，得到化合物6(44 mg).組分O(10 g)先進(jìn)行ODS層析，再經(jīng)凝膠層析，分離得到化合物1(23 mg).

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色針晶(甲醇)，ESI-MS m/z 599［M+Na］+.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為576.1HNMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.16(1H，d，J=2.0 Hz，H-12')，7.14(1H，d，J=2.1 Hz，H-12)，7.03(1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-16')，6.98(1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-16)，6.83(1H，d，J=1.5 Hz，H-15')，6.80(1H，d，J=1.7 Hz，H-15)，6.10(1H，s，H-6')，6.07(1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，6.01(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，4.41(1H，d，J=3.4 Hz，H-4)，4.27～4.21(1H，m，H-3')，4.06(1H，d，J=3.4 Hz，H-3)，2.95(1H，dd，J=17.2，4.9 Hz，Ha-4')，2.76(1H，dd，J=17.2，2.4 Hz，Hb-4');13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:100.3(C-2)，68.2(C-3)，29.4(C-4)，104.4(C-5)，157.2(C-6)，98.4(C-7)，158.3(C-8)，96.8(C-9)，154.4(C-10)，132.6(C-11)，115.8(C-12)，146.4(C-13)，145.8(C-14)，116.2(C-15)，120.5(C-16)，81.9(C-2')，67.1(C-3')，30.1(C-4')，102.6(C-5')，156.8(C-6')，96.6(C-7')，152.5(C-8')，107.4(C-9')，152.3(C-10')，131.4(C-11')，115.8(C-12')，146.9(C-13')，146.1(C-14')，116.1(C-15')，119.9(C-16').以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道一致，故鑒定化合物1為原花色素A2.

化合物2白色針晶(甲醇)，ESI-MS m/z 167［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為168.1HNMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.57(1H，dd，J=8.7，2.0 Hz，H-2)，7.54(1H，s，H-6)，6.84(1H，d，J=8.7 Hz，H-5)，3.87(3H，s，3-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:123.1(C-1)，113.7(C-2)，152.7(C-3)，148.7(C-4)，115.9(C-5)，125.4(C-6)，170.3(C-7)，56.4(3-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，故鑒定化合物2為香草酸.

化合物3白色針晶(甲醇)，ESI-MS m/z 197［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為198.1HNMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.32(2H，s，H-2，6)，3.88(6H，s，3，5-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:121.9(C-1)，108.2(C-2，6)，148.8(C-3，5)，141.5(C-4)，170.4(C-7)，56.9(3，5-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道一致，故鑒定化合物3為丁草酸.

化合物4白色粉末，ESI-MS m/z 193［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為 194.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.59(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，7.18(1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，7.06(1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6)，6.81(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.31(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，3.89(3H，s，3-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:128.0(C-1)，111.8(C-2)，149.5(C-3)，150.6(C-4)，116.6(C-5)，124.1(C-6)，147.1(C-7)，116.1(C-8)，171.2(C-9)，56.6(3-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，故鑒定化合物4為阿魏酸.

化合物5白色粉末，ESI-MS m/z 163［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為 164.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.58(1H，d，J=15.8 Hz，H-7)，7.44(2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.80(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，6.29(1H，d，J=15.8 Hz，H-8);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:171.2(C-9)，161.3(C-4)，146.8(C-7)，131.2(C-2，6)，127.4(C-1)，117.0(C-3，5)，115.8(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，故鑒定化合物5為對香豆酸.

化合物6白色粉末，ESI-MS m/z 169［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為 170.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.06(2H，s);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:122.2(C-1)，110.4(C-2，6)，146.5(C-3，5)，139.7(C-4)，170.7(C-7).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，故鑒定化合物6為沒食子酸.

化合物7白色粉末，ESI-MS m/z 183［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為184.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.04(1H，s，H-2)，7.04(1H，s，H-6)，3.81(3H，s，7-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:121.6(C-1)，110.2(C-2)，146.7(C-3)，139.9(C-4)，146.7(C-5)，110.2(C-6)，169.2(C-7)，52.4(7-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道一致，故鑒定化合物7為沒食子酸甲酯.

化合物8白色粉末，ESI-MS m/z 183［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為 184.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.18(1H，s，H-2)，7.20(1H，s，H-6)，3.85(3H，s，3-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:122.0(C-1)，112.3(C-2)，146.2(C-3)，140.5(C-4)，149.1(C-5)，106.3(C-6)，170.4(C-7)，56.7(3-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致，故鑒定化合物8為3-甲氧基沒食子酸甲酯.

化合物9白色針狀結(jié)晶(甲醇)，ESI-MS m/z 167［M-H］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為168.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.42(1H，s，H-2)，6.80(1H，d，J=7.6 Hz，H-5)，7.40(1H，dd，J=7.6，2.1 Hz，H-6)，3.82(3H，s，7-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:122.7(C-1)，117.5(C-2)，146.3(C-3)，151.8(C-4)，116.0(C-5)，123.8(C-6)，169.0(C-7)，52.4(7-OCH3).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報(bào)道一致，故鑒定化合物9為原兒茶酸甲酯.

化合物 10白色粉末，ESI-MS m/z 167［MH］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為168.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:5.80(2H，s，H-3，5)，2.59(3H，s，H-8);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:105.7(C-1)，166.0(C-2)，95.7(C-3)，166.4(C-4)，95.7(C-5)，166.0(C-6)，204.8(C-7)，32.9(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］報(bào)道一致，故鑒定化合物10為根皮苯乙酮.

化合物 11白色粉末，ESI-MS m/z 409［MOH］+.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為 416.1HNMR(CDCl3，300 MHz)主要特征信號1H-NMR(CDCl3，300 MHz)主要特征信號 δ:3.16(1H，dd，J=10.9，5.3 Hz，H-3)，2.35(1H，td，J=11.0，5.6 Hz，H-19)，0.73(3H，s，H-23)，0.76(3H，s，H-24)，0.80(3H，s，H-25)，0.92(3H，s，H-26)，0.94(3H，s，H-27)，1.00(3H，s，H-28)，4.66(1H，s，Ha-29)，4.54(1H，s，Hb-29)，1.65(3H，s，H-30);13C-NMR(CDCl3，75 MHz)δ:38.9(C-1)，27.6(C-2)，79.2(C-3)，39.1(C-4)，55.5(C-5)，18.5(C-6)，34.5(C-7)，41.0(C-8)，50.6(C-9)，37.4(C-10)，21.1(C-11)，25.3(C-12)，38.2(C-13)，43.0(C-14)，27.6(C-15)，35.8(C-16)，43.2(C-17)，48.2(C-18)，48.5(C-19)，151.2(C-20)，30.0(C-21)，40.2(C-22)，28.2(C-23)，15.6(C-24)，16.3(C-25)，16.2(C-26)，14.8(C-27)，18.2(C-28)，109.5(C-29)，19.5(C-30).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］報(bào)道一致，故鑒定化合物11為羽扇豆醇.

化合物 12白色粉末，ESI-MS m/z 455［MH］－.結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，確定其分子量為456.1H-NMR(C5D5N，300 MHz)主要特征信號δ:4.96(1H，d，J=2.1 Hz，Ha-29)，4.79(1H，s，Hb-29)，3.56(1H，td，J=11.2，4.3 Hz，H-19)，3.47(1H，t，J=7.8 Hz，H-3)，2.76(1H，td，J=11.9，3.2 Hz，H-13)，2.65(1H，dt，J=12.5，3.3 Hz，Ha-16)，1.94(1H，s，Ha-12)，1.90(1H，s，Ha-1)，1.88～1.82(2H，m，H-2)，1.81(3H，s，H-30)，1.76(1H，d，J=11.4 Hz，H-18)，1.67(1H，dt，J=12.6，2.8 Hz，Hb-1)，1.24(3H，s，H-23)，1.08(3H，s，H-27)，1.07(3H，s，H-26)，1.03(3H，s，H-24)，0.83(3H，s，H-25);13C-NMR(C5D5N，75 MHz)δ:179.2(C-28)，151.7(C-20)，110.3(C-29)，78.5(C-3)，57.0(C-17)，56.2(C-5)，51.3(C-9)，50.1(C-18)，48.1(C-19)，43.2(C-14)，41.4(C-8)，39.9(C-4)，39.6(C-1)，38.9(C-13)，37.9(C-22)，37.8(C-10)，35.1(C-7)，33.2(C-16)，31.5(C-15)，30.6(C-21)，29.0(C-23)，28.7(C-2)，26.4(C-12)，21.5(C-11)，19.8(C-30)，19.1(C-6)，16.8(C-24)，16.8(C-25)，16.7(C-26)，15.2(C-27).以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］報(bào)道一致，故鑒定化合物12為樺木酸.

化合物13白色粉末，經(jīng)薄層層析后噴香草醛－濃硫酸反應(yīng)，加熱時(shí)顯紫紅色.正離子ESI-MS給出m/z 599.6［M+Na］+峰和1175.7［2M+Na］+峰，提示化合物分子量為576.與β-胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品的薄層色譜比較，在多種溶劑系統(tǒng)中，其Rf值和顯色均與標(biāo)準(zhǔn)品一致.故鑒定該化合物為β-胡蘿卜苷.

4 結(jié)果與討論

錫葉藤乙醇提取物的乙酸乙酯部位經(jīng)過硅膠、ODS、sephadex LH-20等柱層析色譜技術(shù)，從中分離得到13個(gè)化合物.其中，黃酮類1個(gè):原花色素A2(1);8個(gè)酚酸及其酯類:香草酸(2)、丁香酸(3)、阿魏酸(4)、對香豆酸(5)、沒食子酸(6)、沒食子酸甲酯(7)、3-甲氧基沒食子酸(8)、原兒茶酸甲酯(9);2個(gè)三萜類:羽扇豆醇(11)、樺木酸(12);1個(gè)甾體類:β-胡蘿卜苷(13);1個(gè)其他類:根皮苯乙酮(10).除樺木酸(12)和β-胡蘿卜苷(13)外，其他均為首次從該種植物中分離得到.

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