解脲支原體感染對不育男性精液質(zhì)量的影響

周歡群， 周 文， 陸 杉

(廣東省中醫(yī)院大學城醫(yī)院生殖醫(yī)學科，廣東廣州510000)

生活習慣、環(huán)境等因素的變化導致不育癥患者數(shù)量劇增，而男性不育比例持續(xù)升高，精子質(zhì)量的下降是導致男性不育的直接因素［1］.支原體是一種介于細菌與病毒之間細小的原核微生物，常引起生殖道炎癥的發(fā)生，而解尿支原體是一種能夠通過性傳播的微小病原體，通過感染男性生殖道及附屬性腺并誘發(fā)炎癥，導致男性不育的發(fā)生［2－3］.據(jù)報道UU感染后男性精液質(zhì)量變化，包括精液體積、精子密度、活力、正常形態(tài)等水平的降低［4－8］.本研究主要研究在UU感染的男性不育患者中，精液常規(guī)參數(shù)、頂體酶、精子表面結(jié)合抗體水平及精漿彈性蛋白酶水平的變化，分析比較UU感染與精子運動、精子膜完整性、頂體反應(yīng)潛能、關(guān)鍵性酶分泌內(nèi)環(huán)境及局部免疫微環(huán)境的關(guān)系，綜合探討UU感染與男性不育相關(guān)性.

1 資料與方法

1.1 資料

(1)研究對象 廣東省中醫(yī)院大學城醫(yī)院門診就診男性不育患者中選取UU陽性46例，陰性97例，年齡(19～48)歲，平均年齡(31.67±4.99)歲.患者性生活正常，未采取任何避孕措施1年以上未孕，且未發(fā)現(xiàn)明顯睪丸、附睪、輸精管等異常，未見器質(zhì)性改變.

(2)樣本采集 取精前禁欲2～7 d，生理鹽水清洗手部及陰莖，通過手淫法取精，全部射入無菌無毒精杯，迅速放入37℃培養(yǎng)箱中，待精液完全液化后觀察.

1.2 方法

(1)計算機精液輔助分析 采用西班牙CASA系統(tǒng)進行常規(guī)精液參數(shù)分析，精子活力分為前向運動、非前向運動和不動3級，記錄每個患者的前向運動率及總活率.

(2)精子形態(tài)觀察 拉薄技術(shù)制作適當厚度精子涂片，采用珠海貝索巴氏染色試劑盒進行染色.按文獻［9］，計數(shù)200條精子，統(tǒng)計正常形態(tài)、頭部畸形、中段畸形及尾部畸形精子比例，并計算精子畸形指數(shù)與畸形精子指數(shù)，精子畸形指數(shù)(SDI)=缺陷總數(shù)/所數(shù)精子總數(shù)，畸形精子指數(shù)(TZI)=缺陷總數(shù)/缺陷精子數(shù).

(3)精子表面抗精子結(jié)合抗體(AsAb)檢測采用南京欣迪抗精子結(jié)合抗體(MAR)檢測試劑盒進行檢測，參照WHO5版標準，結(jié)合率R=(粘附于膠乳顆粒的活動精子數(shù)/計數(shù)的總活動精子數(shù))×100%，R＞50%為AsAb陽性.

(4)精子頂體酶水平檢測 采用深圳博瑞德精子頂體酶活性檢測試劑盒進行檢測，頂體酶活性小于58.5 μIU/106精子為異常.

(5)精漿彈性蛋白酶 采用深圳康華精漿彈性蛋白酶定量測定試劑盒檢測，精漿彈性蛋白酶質(zhì)量濃度測定大于1 000 ng/mL示泌尿生殖道確診感染.

1.3 統(tǒng)計學分析

SPSS 17.0統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，分別采用χ2檢驗和t檢驗對比例(%)數(shù)據(jù)和(均數(shù)±標準差)數(shù)據(jù)進行檢測，P＜0.05為有統(tǒng)計學差異.

2 結(jié)果

2.1 UU感染對精子活力及存活率的影響

對兩組患者精子活力進行分析，結(jié)果顯示，觀察組精子前向運動率、總活力及存活率均低于對照組，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05，表1)

表1 UU感染對精子活力及存活率的影響Table 1 Effects of UU infection on sperm motility and viability

2.2 UU感染對精子形態(tài)的影響

標準巴氏染色法觀察精子形態(tài)，參照WHO第5版分類統(tǒng)計精子畸形情況.結(jié)果顯示，與對照組比較，觀察組精子正常形態(tài)率降低，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05);觀察組精子頭、中、尾部畸形率，精子畸形指數(shù)及畸形精子指數(shù)均與對照組相似，且無統(tǒng)計學差異(P ＞0.05，表2)

2.3 UU感染對精子頂體酶活性的影響

與對照組相比，觀察組精子頂體酶活性降低，但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);觀察組頂體酶異常率顯著升高(P＜0.05，表3)

表2 UU感染對精子形態(tài)的影響Table 2 Effects of UU infection on sperm morphology

表3 UU感染對精子頂體酶活性的影響Table 3 Effects of UU infection on acrosin activity

2.4 UU感染對精液抗精子結(jié)合抗體水平的影響

與對照組相比，觀察組精子MAR試驗結(jié)合率(R)較高，但無統(tǒng)計學差異;在觀察組22例、對照組99例患者中AsAb陽性患者(R＞50%)均為0例，AsAb陽性率無統(tǒng)計學差異(P＞0.05，表4)

2.5 UU感染對精漿彈性蛋白酶水平的影響

與對照比較，觀察組患者精漿彈性蛋白酶水平無統(tǒng)計學差異(P＞0.05，表5).泌尿生殖道確診性感染(精漿彈性蛋白酶質(zhì)量濃度＞1 000 ng/mL)率分別為觀察組7/22、對照組6/27，觀察組高于對照組，經(jīng)卡方檢驗P=0.054，兩組無顯著差異.

表4 UU感染對對精液抗精子結(jié)合抗體水平的影響Table 4 Effects of UU infection on AsAb level

表5 UU感染對精漿彈性蛋白酶水平的影響Table 5 Effects of UU infection on seminal plasma elastase

3 討論

生殖道感染是引發(fā)男性不育的重要原因，而UU是目前誘發(fā)生殖道感染的主要因素.研究指出，UU是一種介于細菌與病毒之間的微生物，同時也是非淋性尿道炎的病原體之一［10］.UU能夠附著在精子的表面，其頸部形態(tài)發(fā)生改變，尾部出現(xiàn)卷曲，形態(tài)學上的改變使精子的活力、運動能力降低以及精子畸形率上升，影響精卵結(jié)合，從而引發(fā)不育［11］.

精子活力及存活率間接反映精子受精能力、膜通透性及轉(zhuǎn)運功能.本研究結(jié)果顯示，UU陽性患者精子前向運動率、總活力及存活率較對照組低，但無統(tǒng)計學差異.可能與UU感染頻率及時間、患者治療史、當次取精狀態(tài)及病例數(shù)相關(guān)，結(jié)合既往的研究結(jié)論［12－16］及本次結(jié)果統(tǒng)計的趨勢，精子活力應(yīng)該與UU感染聯(lián)系密切.

精子形態(tài)學觀察是精液分析中重要指標，精子正常形態(tài)低于4%可能會影響精子體外受精率［9］;有報道UU感染會導致精子正常形態(tài)率降低，從而出現(xiàn)不同程度畸形精子癥［17－19］，引起男性不育.本研究結(jié)果顯示，觀察組正常精子形態(tài)率低于對照組，有顯著性差異，表明UU感染能夠影響精子形態(tài).另外，精子畸形指數(shù)和畸形精子指數(shù)兩組之間并無明顯差異，提示UU感染與精子總畸形出現(xiàn)頻率及各類畸形出現(xiàn)頻率之間的關(guān)系尚需進一步的研究.

精卵結(jié)合是受精發(fā)生的前提條件，需要精子的頂體反應(yīng)，精子頂體會釋放精子頂體酶和透明質(zhì)酸酶，溶解透明帶，促使精子穿過透明帶并完成受精過程.精子頂體酶在此過程中發(fā)揮重要的作用.有研究指出，UU感染可引起精子頂體膜破損，影響頂體酶失活［20－21］.本研究中觀察組精子頂體酶活性低于對照組，但兩組之間無統(tǒng)計學差異，與部分研究者的結(jié)論相似，推測UU感染可能只引起精子質(zhì)膜的破損，而對頂體本身結(jié)構(gòu)并沒有損傷.

監(jiān)測血液及局部的抗精子抗體水平相是診斷免疫性不育的重要指標，其中精子表面結(jié)合抗體水平較血液更有臨床參考價值，常采用混合球蛋白抗精子抗體凝集實驗來檢測精子表面AsAb水平.報道指出，UU感染可引發(fā)AsAb的發(fā)生率上升，其誘發(fā)機制是通過進入前列腺管或刺激機體產(chǎn)生UU抗體，引發(fā)和精子膜蛋白的交叉反應(yīng)［22－23］.本結(jié)果顯示，觀察組AsAb陽性率稍高于對照組，但沒有顯著性差異，表明UU具有引起患者AsAb發(fā)生概率升高的可能性，但其不是誘發(fā)不育的主要原因.精漿彈性蛋白酶水平間接反應(yīng)泌尿生殖道感染情況，研究發(fā)現(xiàn)UU感染常引起附屬性腺炎癥發(fā)生，從而導致精漿彈性蛋白酶水平升高，精漿彈性蛋白酶水平測定常作為臨床診斷男性泌尿生殖道感染的重要參考指標［24－25］.本研究結(jié)果顯示兩組彈性蛋白酶水平無顯著性差異，而觀察組確診感染比率較對照組高;UU感染可導致精子正常形態(tài)率降低及頂體酶異常率升高，從而影響不育;UU對精子活力、存活率、抗精子結(jié)合抗體水平、頂體酶及精漿彈性蛋白酶水平的影響尚需進一步研究，同時應(yīng)當針對UU重復感染及合并感染患者精液質(zhì)量進行篩查.

［1］劉雙林，軒維存，韓寶生，等.男性不育諸因素分析研究［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2001，9(6):17 －18.

［2］王 婷，吳美娟，王志軍，等.176例男性不育癥患者精子質(zhì)量與生殖道感染的關(guān)系調(diào)查研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2013，23(18):3593 －3597.

［3］黃 珺，張 鈞，宋鐵軍，等.解脲支原體的致病性研究進展［J］.浙江大學學報:醫(yī)學版，2013，42(4):464－471.

［4］WANG Y，LIANG C，WU J Q，et al.Do Ureaplasma urealyticum infections in the genital tract affect semen quality［J］.Asian J Androl，2006，8(5):562 － 568.

［5］GDOURA R，KCHAOU W，CHAARI C，et al.Ureaplasma urealyticum，Ureaplasma parvum，Mycoplasma hominis and Mycoplasma genitalium infections and semen quality of infertile men［J］.BMC Infectious Diseases，2007，7:129.

［6］MALK R，ITZHAK K，BENJAMIN B，et al.In Vivo and In Vitro Impairment of Human and Ram Sperm Nuclear Chromatin Integrity by Sexually Transmitted Ureaplasma urealyticum Infection［J］.Biology of Reproduction，2000，63:1041 －1048.

［7］WANG Y，KANG L，HOU Y，et al.Microelements in Seminal Plasma of Infertile Men Infected with Ureaplasma urealyticum［J］.Biological Trace Element Research，2005，105:12 －17.

［8］張 艷，張 波.解脲支原體致病機制與耐藥機制研究進展［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2013，34(13):1715 －1717.

［9］世界衛(wèi)生組織人類精液檢驗手冊第5版［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，201l:180－193.

［10］DIEMER T，HUWE P，LUDWIGM，et al.Urogenital infection and sperm motility［J］.Andrologia，2003，35:283－287.

［11］黃茂萍，吳愛娟，鐘 備.探討男性不育癥患者解脲支原體、沙眼衣原體感染與精子質(zhì)量的關(guān)系［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10(Ⅱ):37 －40.

［12］張 煒，蔣昱楓，浦金賢.解脲支原體感染與精子動態(tài)、形態(tài)學分析［J］.中國血液流變學雜志，2012，22(2):321－322.

［13］張字紅，余伍忠，劉 麗，等.解脲支原體感染精液的精子動態(tài)分析［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2005，13(11):110－111.

［14］程 玲，王厚照，張 玲.解脲支原體感染對男性不育患者精DNA完整性和精液常規(guī)參數(shù)的影響［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2014，22(5):129 －130.

［15］徐志喜，李鐵強，白慧玲，等.解脲支原體感染對精液及精子膜功能完整性的影響［J］.第四軍醫(yī)大學學報，2003，24(2):129 －130.

［16］黃 靜，沈爾明，應(yīng)群華.精液解脲脲原體感染治療前后精子質(zhì)量的觀察［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2006，14(6):108－109.

［17］田豐豐，周友泉，張 玲.解脲支原體感染與精子形態(tài)改變相關(guān)性探討［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2011，19(11):105－106.

［18］RUSZ A，PILATZ A，WAGENLEHNER F，et al.Influence of urogenital infections and inflammation on semen quality and male fertility［J］.World J Urol，2012，30(1):23－30.

［19］BUSOLO F，ZANCHETTA R.The effect of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum on hamster egg in vitro penetration by human spermatozoa［J］.Fertil Steril，1 985，43(1):l10－l14.

［20］劉謇智，左文靜，沙艷偉，等.解脲支原體感染對精液主要參數(shù)和精子頂體酶活性的影響［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2003，11(4):99 －100.

［21］NUNEZ C R，CABALERO P，REDONDO C，et al.Ureaplasma Urealyticum reduces motility and induces membrane alterations in human spermatozoa［J］.Hum Reprod，1998，13(10):2756 －2761.

［22］胡建新，何 堅，孫兆林，等.解脲支原體感染與抗精子抗體陽性及其男性不育癥的關(guān)系［J］.臨床泌尿外科雜志，2008，23(8):615 －616.

［23］SHI J，YANG Z，WANG M，et al.Screening of an antigen target for immuno contraceptives from cross－reactive antigens between human sperm and Ureaplasma urealyticum［J］.Infect Immun，2007，75(4):2004 －2011.

［24］毛金觀.解脲支原體與精漿檸檬酸、彈性硬蛋白酶相關(guān)性分析［J］.生殖醫(yī)學雜志，2013，22(11):878－880.

［25］謝 軍，劉繼紅，陳 俊，等.精漿彈性硬蛋白酶、果糖和中性C－葡萄糖苷酶測定在梗阻性無精子癥診斷中的意義［J］.中國男科學雜志，2007，21:47－50