油樟葉多糖抗油脂氧化作用的研究

敖光輝，杜永華，魏琴，蔣惠，李玉杰

（1．內(nèi)江師范學(xué)院，四川內(nèi)江641112；2．宜賓學(xué)院·香料植物資源開發(fā)與利用四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川宜賓644000；3．宜賓學(xué)院生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，四川宜賓644000）

油樟葉多糖抗油脂氧化作用的研究

敖光輝1，杜永華2，*，魏琴2，*，蔣惠3，李玉杰3

（1．內(nèi)江師范學(xué)院，四川內(nèi)江641112；2．宜賓學(xué)院·香料植物資源開發(fā)與利用四川省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川宜賓644000；3．宜賓學(xué)院生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，四川宜賓644000）

采用蒽酮-硫酸法測(cè)定油樟葉總多糖含量，采用烘箱貯藏法測(cè)定油樟葉總多糖抗豬油和菜籽油氧化作用。結(jié)果表明，采用蒽酮-硫酸法測(cè)得油樟葉中總多糖含量為24.9mg/g；油樟葉粗多糖對(duì)豬油和菜籽油均具有較好抗氧化作用，且呈濃度依賴性；0.20%添加量的油樟葉粗多糖對(duì)豬油的抗氧化作用與0.02%BHT相當(dāng)；0.50%添加量的油樟葉多糖對(duì)菜籽油抗氧化作用相當(dāng)于0.02%BHT；BHT對(duì)油樟葉多糖抗豬油和菜籽油氧化作用均有協(xié)同增效作用；油樟葉多糖抗豬油氧化作用強(qiáng)于菜籽油。油樟葉多糖具有抗油脂氧化作用，BHT對(duì)其有協(xié)同增效作用。

油樟；多糖；抗氧化作用；油脂

油樟[Cinnamomum longepaniculatum（Gamble）N. Chao]是我國(guó)特有樟科（Lauraceae）樟屬（Cinnamomum）香料樹種，屬國(guó)家Ⅱ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生植物[1]。油樟葉富含芳香油，其含油量比香樟（C.camp hora（L inn.）Presl）葉高1～2倍，已成為香料、醫(yī)藥、日用和化工產(chǎn)品的重要原料來源[2]。油樟主產(chǎn)地四川宜賓已成為全國(guó)三大天然香料油的生產(chǎn)、加工和集散地之一，每年產(chǎn)油樟油近2 000 t，占全國(guó)總量70%[3]。然而，目前對(duì)油樟葉提取芳香油后殘?jiān)木C合利用研究極少，每年有近10萬噸油樟葉殘?jiān)浑S意拋棄，不僅浪費(fèi)資源，還破壞生態(tài)平衡。研究表明油樟葉脫油殘?jiān)拇痔崛【哂幸欢辜?xì)菌[4]、抗真菌[5]和鎮(zhèn)痛抗炎[6-7]等作用。本課題前期研究表明油樟葉中含有較多的多糖類成分，本研究采用蒽酮-硫酸法測(cè)定油樟葉中總多糖含量，采用烘箱貯藏法研究油樟葉總多糖抗油脂氧化作用，為油樟葉的綜合利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

油樟（C.longepaniculatum）葉采自宜賓油樟人工種植基地；新鮮豬板油（經(jīng)高溫濕法熬煉制備豬油）、菜籽油（現(xiàn)場(chǎng)壓榨）均不含任何添加劑，購自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（含量≥98%）購自于貴州迪大生物有限公司；其它化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 儀器

RE-52AA減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；TU-1901雙光束紫外可見光分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；LG-5A真空冷凍干燥機(jī)：上海市離心機(jī)機(jī)械研究所有限公司。

1.3 方法

1.3.1 油樟葉多糖的制備

新鮮油樟葉通過水蒸汽蒸餾去除芳香油后，60℃烘干粉碎，取40目～80目粉末100 g，按料液比1∶20用80%乙醇在85℃水浴回流4 h除去醇溶性物質(zhì)，過濾，殘?jiān)?0℃干燥后按料液比1∶20加水浸泡15 min，100℃水浴回流提取3 h，過濾，濾液減壓濃縮至約100mL，加入等體積的氯仿/正丁醇混合溶液（體積比=4∶1）振蕩30min，按sevage法去除蛋白質(zhì)，離心取水相清液，加入乙醇調(diào)至含醇量為80%，4℃靜置過夜，離心取沉淀，沉淀用無水乙醇、丙酮、乙醚反復(fù)洗滌，真空冷凍干燥得油樟葉粗多糖，計(jì)算得率。

1.3.2 多糖含量測(cè)定

1.3.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別精密吸取 40.0 mg/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和80.0 mg/L油樟葉粗多糖溶液各1.0mL于兩支5mL具塞試管中，分別加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4.0mL，密封試管口，搖勻后置冰浴冷卻2min，置沸水浴10min，自來水冷卻至室溫10min。以1.0mL蒸餾水代替葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為空白對(duì)照，在400 nm～800 nm掃描，選擇葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液的共有最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密稱取100.0mg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，蒸餾水定容至100mL，分別吸取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL加入6個(gè)100mL容量瓶中定容，分別吸取1.0mL于6支具塞試管中，按“檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇”項(xiàng)下顯色方法顯色，在622nm處測(cè)定吸光度。以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（C，mg/L）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求線性回歸方程。

1.3.2.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取40.0mg/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL，6份，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD值。

1.3.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取80.0mg/L油樟葉多糖溶液1.0mL，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制”項(xiàng)下方法顯色后，分別于0、20、40、60、80、100、120min測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD值。

1.3.2.5 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

精密稱取油樟葉粗多糖200.0mg，5份，分別精密加入30.0mg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并定容至100mL，取4mL稀釋至100mL，分別吸取1.0mL，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，計(jì)算平均回收率和RSD值。

1.3.2.6 樣品含量測(cè)定

精密稱取油樟葉粗多糖200.0mg，5份，用水溶解并定容至100mL，取4mL稀釋至100mL，即得80.0mg/L粗多糖溶液，分別吸取1.0mL，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，求得油樟葉中多糖平均含量、RSD值和油樟葉粗多糖純度。

1.3.3 抗油脂氧化作用測(cè)定

采用烘箱儲(chǔ)藏試驗(yàn)法[8]測(cè)定，稱取25 g豬油或菜籽油，置于50mL碘量瓶中，按0.02%、0.05%、0.20%、0.50%、1.00%的質(zhì)量百分比添加油樟葉粗多糖，以0.02%2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）和0.01%抗壞血酸（VC）為陽性對(duì)照，以純豬油或菜油為空白對(duì)照，70℃加熱攪拌30 min充分混勻，置（70±1）℃烘箱，每隔12小時(shí)攪拌1次，并交換在烘箱中的位置，每24小時(shí)參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》（GB/T 5009.37-2003）測(cè)定油樣過氧化值（POV）。同時(shí)以BHT為協(xié)同增效劑，油樟葉粗多糖和BHT分別按油樣質(zhì)量0.2%和0.02%的比例加入油樣進(jìn)行協(xié)同抗氧化試驗(yàn)。參考GB 10146-2005和GB/T 5538-2005對(duì)豬油和菜籽油POV的規(guī)定，設(shè)定豬油和菜籽油氧化誘導(dǎo)終點(diǎn)POV為0.2 g/100g。參考文獻(xiàn)[9]，將油脂的氧化過程歸為一級(jí)反應(yīng)，其反應(yīng)方程為L(zhǎng)n C=-kt＋Ln C0（式中C為油脂氧化后的過氧化值，C0為油脂初始過氧化值，k為速率常數(shù)，t為時(shí)間）根據(jù)該方程求出油脂氧化速率常數(shù)k，由回歸方程計(jì)算出油脂POV達(dá)到0.2 g/100 g時(shí)的氧化誘導(dǎo)時(shí)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 油樟葉總多糖含量測(cè)定

采用蒽酮-硫酸法測(cè)定油樟葉粗多糖的含量，結(jié)果表明葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和油樟葉粗多糖溶液經(jīng)蒽酮-硫酸法顯色后，在400 nm～800 nm范圍內(nèi)的最大吸收波長(zhǎng)分別為623 nm和621 nm，選擇622 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。在622 nm處繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線所得線性回歸方程為A=0.012 9C-0.007 6，R2=0.999 7，可見葡萄糖含量在20.0mg/L～70.0mg/L范圍內(nèi)線性良好。精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、加標(biāo)回收率試驗(yàn)、樣品重復(fù)性測(cè)定試驗(yàn)的RSD分別為2.02%、2.27%、2.38%和2.12%，可見蒽酮-硫酸法測(cè)定油樟葉粗多糖的精密度較好，穩(wěn)定性，樣品顯色后在2 h內(nèi)較穩(wěn)定，加標(biāo)平均回收率較高達(dá)97.31%，樣品含量測(cè)定重復(fù)性較好。100 g油樟葉中提取到3 124.5mg粗多糖（得率為3.12%），測(cè)得油樟葉中總多糖含量為24.9 mg/g，粗多糖純度較高達(dá)79.69%。孫崇魯[10]通過測(cè)定最佳提取工藝條件下提取液中總多糖含量所得香樟葉中總多糖含量為129.41mg/g，高于本試驗(yàn)制備的油樟葉中總多糖含量，可見開展油樟葉總多糖提取工藝研究是必要的。

2.2 油樟葉對(duì)豬油的抗氧化作用

采用烘箱法測(cè)定油樟葉粗多糖對(duì)豬油的抗氧化作用結(jié)果見圖1。

由表圖1可知，豬油經(jīng)高溫加速誘導(dǎo)后，隨著氧化時(shí)間的增加，各組POV逐漸升高。在豬油中添加不同濃度油樟葉粗多糖后，豬油的POV均低于純豬油空白組。隨著油樟葉粗多糖添加量的增加，POV逐漸降低。可見油樟葉粗多糖對(duì)豬油具有抗氧化作用，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。豬油中添加不同濃度油樟葉粗多糖后的氧化誘導(dǎo)時(shí)間見表1。

由表1可知，0.01%VC對(duì)豬油抗氧化作用最弱，氧化誘導(dǎo)時(shí)間為66.36 h，與對(duì)照相比誘導(dǎo)時(shí)間僅延長(zhǎng)了2.60%。這可能是由于VitC屬水溶性抗氧化劑，在油脂中溶解能力有限有關(guān)。當(dāng)油樟葉粗多糖添加量達(dá)到0.2%時(shí)，其抗氧化作用接近0.02%BHT，氧化誘導(dǎo)時(shí)間分別延長(zhǎng)了9.37%和10.13%，與李文清等[9]關(guān)于0.02%BHT使豬油氧化誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)9.30%的報(bào)道一致。添加0.50%和1.00%油樟葉粗多糖后的氧化誘導(dǎo)時(shí)間均長(zhǎng)于0.02%BHT，其氧化誘導(dǎo)時(shí)間分別延長(zhǎng)了12.13%和16.05%。0.2%的油樟葉粗多糖與0.02% BHT同時(shí)添加到豬油中后，其氧化誘導(dǎo)時(shí)間長(zhǎng)于單獨(dú)添加時(shí)的誘導(dǎo)時(shí)間。可見，0.2%添加量的油樟葉粗多糖抗豬油氧化作用與0.02%BHT相當(dāng)，0.50%和1.00%添加量油樟葉粗多糖抗豬油氧化作用優(yōu)于0.02%BHT，BHT對(duì)油樟葉粗多糖的抗豬油氧化作用具有協(xié)同增效作用。

2.3 油樟葉對(duì)菜籽油的抗氧化作用

菜籽油經(jīng)（70±1）℃高溫誘導(dǎo)后，不同時(shí)間段POV測(cè)定結(jié)果見圖2。

由圖2可知，隨著氧化時(shí)間的延長(zhǎng)，各組POV逐漸增加。純菜籽油空白組氧化速度最快，各階段的POV高于其它試驗(yàn)組。隨著油樟葉粗多糖添加濃度的增加，菜籽油POV逐漸減小。可見油樟葉粗多糖對(duì)菜籽油具有抗氧化作用，其抗氧化作用表現(xiàn)出劑量依賴性。不同添加量的油樟葉粗多糖對(duì)菜籽油氧化誘導(dǎo)時(shí)間的影響結(jié)果見表1。由表1可知，0.02%油樟葉粗多糖和0.01%VC對(duì)菜籽油氧化誘導(dǎo)時(shí)間均與菜籽油空白接近，其氧化誘導(dǎo)時(shí)間僅延長(zhǎng)3%左右，可見二者抗菜籽油氧化作用較差。當(dāng)油樟葉添加量達(dá)到0.50%時(shí)的菜籽油氧化誘導(dǎo)時(shí)間為37.53 h，與0.02%BHT相近（氧化誘導(dǎo)時(shí)間為37.22 h）。1.00%添加量的油樟葉粗多糖的抗氧化作用優(yōu)于0.02%BHT，與對(duì)照組相比，其氧化誘導(dǎo)時(shí)間分別延長(zhǎng)了12.79%和8.63%。在菜籽油中同時(shí)添加0.2%的油樟葉粗多糖和0.02%BHT的氧化誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)了10.81%，高于單獨(dú)添加時(shí)對(duì)菜籽油氧化誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)百分比。可見，0.50%添加量的油樟葉粗多糖對(duì)菜籽油抗氧化作用與0.02%BHT相當(dāng)，1.00%油樟葉粗多糖的抗氧化作用優(yōu)于0.02% BHT，BHT對(duì)油樟葉粗多糖抗菜籽油氧化作用具有協(xié)同增效作用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，油樟葉粗多糖對(duì)豬油的氧化誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)百分比均高于其對(duì)菜籽油的延長(zhǎng)百分比，可見油樟葉粗多糖對(duì)豬油的抗氧化作用優(yōu)于菜籽油。GB2760-2011中規(guī)定BHT在油脂中最大使用量為油脂質(zhì)量的0.02%，可見在油脂中添加一定量的油樟葉粗多糖可達(dá)到BHT抗氧化效果，具有一定開發(fā)利用前景。

3 結(jié)論

3.1 蒽酮-硫酸法測(cè)定油樟葉總多糖含量

采用蒽酮-硫酸法測(cè)定油樟葉中總多糖含量時(shí)，測(cè)定波長(zhǎng)為622 nm，葡萄糖濃度在20.0mg/L～70.0mg/L范圍內(nèi)線性良好，該方法精密度、穩(wěn)定性、加標(biāo)平均回收率、重復(fù)性均較好，測(cè)得油樟葉總多糖含量為24.9mg/g，該方法可用于油樟葉總多糖的含量測(cè)定。

3.2 油樟葉粗多糖抗油脂氧化作用

油樟葉粗多糖具有良好的抗油脂氧化作用，且具有劑量依賴性，添加0.2%油樟葉粗多糖的抗豬油氧化作用與0.02%BHT相當(dāng)，添加量達(dá)到0.50%和1.00%時(shí)，其抗氧化作用優(yōu)于0.02%BHT；添加0.50%油樟葉粗多糖抗菜籽油氧化作用相當(dāng)于0.02%BHT，添加量達(dá)到1.00%時(shí)，其抗氧化作用優(yōu)于0.02%BHT。BHT對(duì)油樟葉粗多糖抗豬油和菜籽油氧化作用均有協(xié)同增效作用。油樟葉多糖屬于功能性天然產(chǎn)物，除具有抗氧化作用外，可能還有其它功能作用，在油脂中添加一定量的油樟葉多糖比BHT等合成抗氧化劑更具優(yōu)勢(shì)。油樟葉多糖抗豬油氧化作用強(qiáng)于菜籽油，其在豬油的抗氧化劑開發(fā)應(yīng)用中價(jià)值更高。

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Antioxidant Activity of Cinnamomum longepaniculatum Leaves Polysaccharide on Edible Oil

AO Guang-hui1，DU Yong-hua2，*，WEI Qin2，*，JIANG Hui3，LI Yu-jie3
（1.Neijiang Normal University，Neijiang 641112，Sichuan，China；2.Key Lab of Aromatic Plant Resources Exploitation and Utilization in Sichuan Higher Education，Yibin University，Yibin 644000，Sichuan，China；3.College of Life Science and Food Engineering，Yibin University，Yibin 644000，Sichuan，China）

The content of Cinnamomum longepaniculatum leaves total polysaccharide was determined by themethod of anthron sulphuric. The antioxidant activities of C. longepaniculatum leaves polysaccharide on lard andcolza oil were investigated by Schaal method. The results showed that the content of polysaccharide in C.longepaniculatum leaves was 24.9 mg/g. The polysaccharide of C. longepaniculatum displayed potentialantioxidant activity against both lard and colza oil with a concentration dependence. The same antioxidant effectson lard were observed between 0.20 % polysaccharide and 0.02 % BHT. The antioxidant effects of 0.50 %polysaccharide on colza oil was similar to 0.02 % BHT. BHT and C. longepaniculatum leaves polysaccharideexhibited obvious synergistic effect against the oxygenation of lard and colza oil. The antioxidant effect ofpolysaccharide on lard was better than that on colza oil. The polysaccharide from C. longepaniculatum showpotential antioxidant properties on edible oil， and BHT has synergistic effect to this polysaccharide.

Cinnamomum longepaniculatum；polysaccharide；antioxidant activity；oil

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.07.004

2014-05-10

四川省基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（2011JY0050）；四川省青年科技創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)培育計(jì)劃項(xiàng)目（2011JTD0035）；四川省宜賓市科技局重點(diǎn)科技項(xiàng)（2012ZNY006）

敖光輝（1965—），男（漢），教授，本科，研究方向：植物學(xué)。

*通信作者