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    新疆栽培紅花根際土壤微生物群落磷脂脂肪酸生物標(biāo)記多樣性分析

    2015-04-02 07:23:32徐鴻斌王紹明蔣靜馬曉麗張霞于雄勝
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年12期
    關(guān)鍵詞:土壤微生物根際紅花

    徐鴻斌 王紹明 蔣靜 馬曉麗 張霞 于雄勝

    摘要:采用磷脂脂肪酸(PLFAs生物標(biāo)記法,分析相同栽培條件下5種新疆栽培紅花根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明,紅花根際土壤微生物磷脂脂肪酸生物標(biāo)記豐富,共檢測(cè)到48種磷脂脂肪酸,其中有32種為完全分布型生物標(biāo)記,16種為不完全分布型生物標(biāo)記;紅花根際土壤中PLFAs含量細(xì)菌>真菌>放線菌。不同紅花材料根際土壤微生物PLFAs生物標(biāo)記組成結(jié)構(gòu)存在差異。對(duì)紅花根際土壤特征PLFAs生物標(biāo)記細(xì)菌16 ∶[G-3]0、真菌18 ∶[G-3]1ω9c、甲烷氧化菌16 ∶[G-3]1ω5c和硫酸鹽還原菌10Me16 ∶[G-3]0比較可知,云紅5號(hào)的細(xì)菌16 ∶[G-3]0、真菌18 ∶[G-3]1ω9c、甲烷氧化菌16 ∶[G-3]1ω5c和硫酸鹽還原菌10Me16 ∶[G-3]0明顯低于其他4個(gè)品種紅花,新紅1號(hào)的細(xì)菌16 ∶[G-3]0、真菌18 ∶[G-3]1ω9c、甲烷氧化菌 16 ∶[G-3]1ω5c 和硫酸鹽還原菌10Me16 ∶[G-3]0含量最高。放線菌10Me17 ∶[G-3]0含量,5個(gè)紅花品種相近。

    關(guān)鍵詞:紅花;根際;土壤微生物;磷脂脂肪酸(PLFAs

    中圖分類號(hào): S1543文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(201412-0364-05[HS][HT9SS]

    收稿日期:2014

    基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):31160410;國(guó)家人力資源和社會(huì)保障部留學(xué)回國(guó)人員科技活動(dòng)項(xiàng)目(編號(hào):2011LX005。

    作者簡(jiǎn)介:徐鴻斌(1989—,男,浙江蕭山人,碩士研究生,從事植物學(xué)研究。E-mail:stephen89@126com 。

    通信作者:王紹明,教授,博士生導(dǎo)師。E-mail:westwild@vipsinacom。

    根際是一個(gè)由根系分泌物輸入高能量而導(dǎo)致微生物劇烈活動(dòng)的生態(tài)系統(tǒng)[1]。根際土壤微生物可影響土壤營(yíng)養(yǎng)的分解、轉(zhuǎn)化和植物的吸收利用,也是衡量土壤肥力和養(yǎng)分的重要指標(biāo)[2-5]。此外,根際土壤微生物種群結(jié)構(gòu)與作物產(chǎn)量密切相關(guān),微生物種群結(jié)構(gòu)失衡是導(dǎo)致藥用作物發(fā)病和減產(chǎn)的主要原因[6-8]。諸多研究結(jié)果表明,根際微生物在不同植物物種間存在差異[9-11],在同一植物物種的不同生長(zhǎng)階段和不同基因型間也存在差異[12-14]。探討作物與其根際土壤微生物多樣性之間的內(nèi)在聯(lián)系,對(duì)于了解作物品種遺傳特性、土壤適應(yīng)性和制定栽培管理方案具有重要參考意義[15]。國(guó)內(nèi)外科研工作者對(duì)此十分重視,并發(fā)展出BIOLOG平板法,磷脂脂肪酸生物標(biāo)記法(PLFAs和基于PCR的核酸分析等研究手段。PLFAs生物標(biāo)記法根據(jù)磷脂脂肪酸(phospholipid fatty acid,PLFA的結(jié)構(gòu)多樣性和生物特異性,能揭示某一類或某種特定微生物的存在及豐度,能夠準(zhǔn)確客觀地反映土壤中微生物量和群落結(jié)構(gòu)的差異,目前廣泛應(yīng)用于原位土壤微生物群落的多樣性研究。

    菊科植物紅花(Carthamus tinctorius L是一種集藥材、油料、染料和飼料為一體的特種經(jīng)濟(jì)作物[16],目前全球廣泛栽種,新疆是我國(guó)紅花的主要產(chǎn)區(qū),約占全國(guó)紅花種植面積及產(chǎn)量的80%[17]。紅花以其卓越的藥用和經(jīng)濟(jì)價(jià)值受到國(guó)內(nèi)外研究者的關(guān)注。但對(duì)于紅花的研究多集中在化學(xué)成分和藥理研究,近年來(lái),對(duì)紅花土壤根際微生物群落的研究逐漸增多,陸爽研究了紅花土壤微生物數(shù)量及影響因子分析,發(fā)現(xiàn)含水率、有機(jī)質(zhì)、有效氮是決定土壤微生物群落分布的主導(dǎo)因子[18];郭歡等研究了AM真菌對(duì)紅花根圍微生物多樣性特性的影響,發(fā)現(xiàn)AM真菌從時(shí)間和空間上影響紅花根圍微生物的多樣性特征[19]。

    本研究采用PLFAs技術(shù),以在同一試驗(yàn)田的5種栽培品種的紅花根際土壤為研究對(duì)象,探討相同栽培條件下,不同紅花品種對(duì)根際土壤微生物區(qū)系的影響,以及紅花品種與根際土壤微生物之間的內(nèi)在聯(lián)系。

    1材料與方法

    11試驗(yàn)地概況

    試驗(yàn)地位于新疆石河子大學(xué)試驗(yàn)田(40°16′584″N,[JP2]86°03′1587″E,區(qū)域氣候?qū)俚湫痛箨懶愿珊蛋敫珊禋夂颉D杲邓繛?00~500 mm,冬季平均積雪深度20~40 cm。年平均氣溫4~6 ℃,日平均氣溫>10 ℃的年積溫2 500~2 900 ℃,無(wú)霜期120~135 d。

    12供試材料

    供試紅花品種分別為新紅1號(hào)、新紅4號(hào)、云紅5號(hào)、裕民無(wú)刺和采毛紅花。

    13田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)和性狀調(diào)查

    試驗(yàn)于2013年4—9月在石河子大學(xué)試驗(yàn)田進(jìn)行。設(shè)計(jì)5個(gè)小區(qū),每個(gè)小區(qū)5行,行距20 cm,穴距15 cm,每穴播3~5粒種子,正常大田管理。5月10日播種,5月17日出苗,7月6日初花,整個(gè)生育期灌水3次。按生育期分別在蓮座期(5月28日、伸長(zhǎng)期(6月24日、盛花期(7月27日和種子成熟期(9月5日取根際土壤,同時(shí)對(duì)每個(gè)品種隨機(jī)挑選5株紅花,考查株高、分枝數(shù),花蕾數(shù)。

    14根際土壤取樣方法

    根際土壤取樣方法采用“抖根法”:先將植物根系從土壤中挖出,抖掉與根系結(jié)合松散的土壤,將與根系緊密結(jié)合在0~4 mm范圍的土壤用刷子搜集作為根際土壤。按“S”形隨機(jī)選5個(gè)點(diǎn)采集根際土壤混合土樣,取樣過(guò)程中去除凋落等有機(jī)質(zhì)。取回鮮土后,立即過(guò)篩,分裝保存于-80 ℃下,用于微生物脂肪酸多樣性PLFAs研究。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

    15磷脂脂肪酸(PLFAs檢測(cè)

    PLFA的提取過(guò)程和分析參考Frostegrd等[20]和ourtev等[21]的方法。步驟如下:

    取3 g土壤樣品于50 mL離心管,加入32 mL磷酸鹽緩沖液、4 mL氯仿和8 mL甲醇振蕩,遮光下水平振蕩 2 h后 1 000 r/min 離心15 min,在轉(zhuǎn)移液加入48 mL檸檬酸緩沖液和6 mL氯仿,4 ℃冰箱保存,遮光靜置過(guò)夜。取氯仿相氮?dú)獯蹈?,加? mL甲醇振蕩溶解充分,氮?dú)獯蹈?,重?fù)3~4次。氯仿溶解樣品,活性硅膠柱純化,收集甲醇相,N2吹干,0 ℃ 下保存。用1 mL甲醇甲苯溶解磷脂,1 mL OH甲醇溶液37 ℃水浴15 min,加2 mL正己烷氯仿混合液,03 mL 1 mol/L醋酸,2 mL去離子水混勻,1 000 r/min下離心15 min取上層有機(jī)相,N2吹干。用正己烷溶磷脂脂肪酸甲酯,轉(zhuǎn)移到GC內(nèi)標(biāo)管,加入20 μL內(nèi)標(biāo)并上機(jī)測(cè)定。

    PLFAs的檢測(cè)采用美國(guó)MIDI公司生產(chǎn)的微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)(Sherloc Microbial Identification Sysstem Sherlock MIS45進(jìn)行,包括美國(guó)Agilent6890N型氣相色譜儀,全自動(dòng)進(jìn)樣裝置、石英毛細(xì)管柱及氫火焰離子化檢測(cè)器。

    色譜條件為二階程序升高柱溫,170 ℃起始,5 ℃/min升至260 ℃,而后升溫至310 ℃,維持90 s;氣化室溫度250 ℃,檢測(cè)器溫度300 ℃;載氣為H2(2 mL/min,尾吹氣為N2(30 mL/min;柱前壓6895 kPa;進(jìn)樣量1 μL,進(jìn)樣分流比100 ∶[G-3]1,電子轟擊電離源(EI到質(zhì)譜檢測(cè),峰面積通過(guò)計(jì)算機(jī)自動(dòng)積分。

    16數(shù)據(jù)分析

    161根際微生物種類的PLFAs生物標(biāo)記的識(shí)別Tunlid等[22]曾發(fā)現(xiàn)直接從土壤中提取的PLFAs量可以準(zhǔn)確地表達(dá)土壤微生物的種類和生物量(表1。利用PLFAs的種類和數(shù)量對(duì)紅花材料的根際微生物群落進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)均采用單因子方差分析,所用軟件為SPSS190。[FL]

    [F(W14][HT6H][J]表1估算微生物生物量的磷脂脂肪酸[HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG12,W16,W28,W16W]微生物類型磷脂脂肪酸標(biāo)記參考文獻(xiàn)

    [BHDG12,W16Q4,W28Q3,W16Q5W]細(xì)菌12 ∶[G-3]0,14 ∶[G-3]0,16 ∶[G-3]0,i19 ∶[G-3]0,20 ∶[G-3]0[23-26]

    [BHDW]革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌a16 ∶[G-3]0,i16 ∶[G-3]0,a17 ∶[G-3]0,i17 ∶[G-3]0,i18 ∶[G-3]0[23,27]

    革蘭氏陰性細(xì)菌i15 ∶[G-3]0 3OH,16 ∶[G-3]1ω9c,17 ∶[G-3]1ω8c,cy17 ∶[G-3]0,i17 ∶[G-3]0 3OH[23,28]

    好氧細(xì)菌i14 ∶[G-3]0,a14 ∶[G-3]0,i15 2OH,a15 ∶[G-3]0,i15 ∶[G-3]0[27,29-30]

    假單胞桿菌18 ∶[G-3]1ω7[27]

    硫酸鹽還原細(xì)菌10Me16 ∶[G-3]0[25]

    甲烷氧化菌16 ∶[G-3]1ω5c[31]

    放線菌10Me 17 ∶[G-3]0,10Me18 ∶[G-3]0[28-29]

    纖維菌屬11Me 18 ∶[G-3]1ω7c[24,29]

    真菌18 ∶[G-3]3ω6c(6,9,12,18 ∶[G-3]1ω9c[32]

    嗜熱解氫桿菌18 ∶[G-3]0[24]

    伯克霍爾德菌cy19 ∶[G-3]0ω8c[28]

    原生動(dòng)物20 ∶[G-3]4ω6,9,12,15c[33][HJ][BG)F][F)]

    [FL(22]162紅花根際土壤微生物PLFAs的分布特性以5種供試紅花材料為指標(biāo),以檢測(cè)出的45種PLFAs為樣本,進(jìn)行單因子方差分析,構(gòu)建矩陣,以蘭氏距離為聚類尺度,類平均法進(jìn)行聚類分析。所用軟件為DPS 655。

    163PLFAs種類和含量及特征磷脂脂肪酸生物標(biāo)記在不同品種紅花間的差異用16 ∶[G-3]0指示細(xì)菌[20],18 ∶[G-3]1ω9c指示真菌[30],10Me17 ∶[G-3]0指示放線菌[25-26],16 ∶[G-3]1ω5c作為甲烷氧化菌[28],10Me16 ∶[G-3]0指示硫酸鹽還原細(xì)菌[22]進(jìn)行單因子方差分析,所用軟件為SPSS190。

    2結(jié)果與分析

    21紅花品種開(kāi)花期根際微生物群落PLFA生物標(biāo)記分布特性

    磷脂脂肪酸生物標(biāo)記PLFAs檢測(cè)結(jié)果表明紅花根際微生物群落PLFAs種類豐富,含有各類飽和、不飽和,分支和環(huán)狀的PLFAs生物標(biāo)記。試驗(yàn)共檢測(cè)出C12~C20共48種PLFAs生物標(biāo)記(表2。其中a14 ∶[G-3]0、i14 ∶[G-3]0、a15 ∶[G-3]0、i15 ∶[G-3]0、16 ∶[G-3]1ω7c等PLFAs生物標(biāo)記指示耗氧細(xì)菌;a16 ∶[G-3]0、i16 ∶[G-3]0、a17 ∶[G-3]0、i17 ∶[G-3]0等PLFAs生物標(biāo)記指示革蘭氏陽(yáng)性菌;17 ∶[G-3]1ω8c、cy17 ∶[G-3]0、i17 ∶[G-3]0 3OH等PLFAs生物標(biāo)記指示革蘭氏陰性菌;10Me17 ∶[G-3]0、10Me18 ∶[G-3]0等PLFAs生物標(biāo)記指示放線菌;18 ∶[G-3]3ω6c (6,9,12、18 ∶[G-3]1ω9c、18 ∶[G-3]1ω9c等PLFAs生物標(biāo)記指示真菌;20 ∶[G-3]4ω6,9,12,15c生物標(biāo)記指示原生生物。

    PLFAs生物標(biāo)記在5個(gè)紅花品種根際中的分布存在兩種類型:一類為完全分布,即PLFAs生物標(biāo)記在所有供試品種根際土壤中都分布,檢測(cè)到32種完全分布的生物標(biāo)記,包括i14 ∶[G-3]0、15 ∶[G-3]0、16 ∶[G-3]0、10Me16 ∶[G-3]0等;另一類為不完全分布,即PLFAs生物標(biāo)記只在某些紅花品種根際土壤中存在,此類PLFAs生物標(biāo)記共有16中,如16 ∶[G-3]0 N alcohol、a17 ∶[G-3]1ω9c、a16 ∶[G-3]0、i19 ∶[G-3]0等(表2。

    對(duì)紅花根際土壤微生物PLFAs進(jìn)行聚類分析,當(dāng)蘭氏距離為5時(shí),將PLFAs可分為3大亞群(圖1,亞群Ⅰ包含25個(gè)完全分布的PLFAs標(biāo)記和16個(gè)不完全分布PLFAs標(biāo)記,該亞群的特點(diǎn)是:磷脂脂肪酸含量低,變化幅度在0087 6 ~ 2664 9 nmol/g,含量最高的是18 ∶[G-3]0,含量最低的是a16 ∶[G-3]0;亞群Ⅱ包含i15 ∶[G-3]0,16 ∶[G-3]1ω7c,10Me16 ∶[G-3]0,cy19 ∶[G-3]0ω8c,18 ∶[G-3]1ω9c,18 ∶[G-3]1ω7c 共6個(gè)磷脂脂肪酸生物標(biāo)記,該亞群特點(diǎn)是屬于完全分布類型且分布量大;亞群Ⅲ只含有16 ∶[G-3]0一個(gè)磷脂脂肪酸標(biāo)記,其特征為完全分布,且分布量大。

    [FL]

    [F(W48][HT6H][J][WTH]表2不同紅花品種開(kāi)花期根際土壤微生物群落PLFAs標(biāo)記[WTB][HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W9,W6,W45W]磷脂脂肪酸生物標(biāo)記微生物類型[B(][BHDWG12,W45W]磷脂脂肪酸含量(nmol/g

    新紅1號(hào)新紅4號(hào)云紅5號(hào)裕民無(wú)刺采毛紅花[BW]

    [BHDG12,W9Q0,W6Q0,W9。5W][JP3]12 ∶[G-3]0細(xì)菌0115 1±0038 8a0±0b0±0b0±0b0±0b

    [BHDW]i13 ∶[G-3]0細(xì)菌G-0090 3±0034 2a0±0b0±0b0±0b0±0b

    i14 ∶[G-3]0耗氧細(xì)菌G+0417 6±0000 9a0236 7±0044 4b0226 8±0005 5b0255 8±0000 4b0420 0±0067 7a

    14 ∶[G-3]1ω5c放線菌0556 1±0010 6ab0439 3±0026 5a0546 4±0051 6ab0663 9±0085 0b0690 0±0030 7b

    14 ∶[G-3]0細(xì)菌G+0610 5±0045 2ab0413 3±0072 3a0409 8±0014 4a0526 2±0074 1ab0643 5±0069 9b

    i15 ∶[G-3]1G細(xì)菌0356 4±0137 7a0166 6±0034 0a0214 1±0066 3a0229 8±0057 0a0333 3±0165 4a

    i15 ∶[G-3]1I細(xì)菌0289 4±0030 4a0±0b0±0b0±0b0±0a

    a15 ∶[G-3]1A細(xì)菌0244 0±0020 0a0±0b0±0b0±0b0196 6±0026 8a

    i15 ∶[G-3]0耗氧細(xì)菌G+4148 3±0201 9a2815 2±0417 1b2496 3±0090 0b2803 1±0013 3b3624 1±0494 2a

    a15 ∶[G-3]0細(xì)菌G-2506 7±0099 5a1835 5±0223 0b1617 4±0109 7b1747 8±0046 1b2361 7±0151 5b

    15 ∶[G-3]1ω6c甲烷氧化菌0100 0±0044 2a0±0b0±0b0±0b0±0b

    15 ∶[G-3]0細(xì)菌G+0546 5±0033 1a0339 4±0048 3b0300 6±0003 6b0302 4±0036 6b0477 4±0085 4a

    i16 ∶[G-3]1H細(xì)菌0654 4±0006 3a0492 4±0106 9ab0405 8±0015 4b0412 9±0058 1b0514 2±0053 2ab

    16 ∶[G-3]0 N alcohol細(xì)菌G+0105 4±0007 5a0122 4±0001 8a0102 7±0014 8a0±0b0±0b

    i16 ∶[G-3]0 細(xì)菌G+2014 9±0000 4a1629 4±0246 6ab1322 8±0089 9b1425 8±0114 7b1866 0±0195 7ab

    a16 ∶[G-3]0嗜熱解氫桿菌0087 6±0006 3a0±0b0±0b0±0b0±0b

    16 ∶[G-3]1ω9c細(xì)菌G-0740 9±0032 8a0642 0±0015 5a0582 1±0064 7a0563 0±0048 7a0680 9±0076 8a

    16 ∶[G-3]1ω7c耗氧細(xì)菌G+3852 4±0125 5a3160 8±0248 9a2770 2±0333 7a2981 8±0531 1a3699 5±0370 2a

    16 ∶[G-3]1ω5c甲烷氧化菌2625 9±0192 9b2126 4±0294 8ab1716 3±0146 2a2064 7±0246 3ab2264 4±0286 6ab

    16 ∶[G-3]0細(xì)菌9617 7±0407 8c8862 3±0061 4bc6756 4±0353 6a8337 1±0151 1b9322 0±0148 7c

    i15 ∶[G-3]0 3OH細(xì)菌G+0214 4±0004 8a0±0b0±0b0±0b0±0b

    10 Me 16 ∶[G-3]0硫酸鹽還原菌6431 6±0075 4b6107 6±0139 4b4726 8±0521 5a5578 1±0191 0ab5877 5±0264 6b

    17 ∶[G-3]1 ANTEISO B/i I 細(xì)菌0513 4±0078 4a1112 6±0008 3a0 ±0a1136 9±0683 6a0±0a

    a17 ∶[G-3]1ω9c細(xì)菌G-0844 1±0201 7a0±0b0598 3±0100 4a0542 2±0036 3b0779 4±0123 9a

    i17 ∶[G-3]0 細(xì)菌G+1577 1±0043 2a1351 7±0182 9ab1076 0±0091 7b1084 6±0157 1b1340 4±0078 2ab

    a17 ∶[G-3]0 細(xì)菌G+1549 5±0006 0a1295 7±0102 6a1135 0±0080 9b1155 9±0098 2b1360 0±0083 5ab

    17 ∶[G-3]1ω8c細(xì)菌G-0796 1±0004 3a0717 4±0040 5a0621 3±0066 7a0624 2±0114 8a0853 4±0051 4a

    cy17 ∶[G-3]0 細(xì)菌G-2013 5±0132 7a1727 2±0189 6ab1378 6±0187 4b1472 5±0202 9ab1735 8±0129 0ab

    17 ∶[G-3]0節(jié)桿菌0628 6±0001 8a0488 5±0063 8b0397 5±0023 5b0398 9±0033 3b0533 4±0028 1ab

    16 ∶[G-3]1 2OH雷爾氏菌屬0573 7±0002 2a0470 8±0013 7b0442 4±0034 1b0501 5±0032 7ab0495 0±0009 9ab

    10Me 17 ∶[G-3]0 放線菌0502 2±0001 0a0364 4±0047 8b0340 5±0011 2b0294 0±0058 2b0386 0±0015 0ab

    i18 ∶[G-3]0 細(xì)菌0497 8±0186 3a0562 6±0104 4a0450 4±0002 6a0±0b0±0b

    18 ∶[G-3]3ω6c(6,9,12真菌0±0b0±0b0250 2±0012 5a0±0b0±0b

    18 ∶[G-3]2ω6,9c真菌2514 0±0051 0ab2015 5±0212 6ab1619 5±0002 3a1898 6±0540 6ab2712 0±0153 6b

    18 ∶[G-3]1ω9c真菌5541 5±0119 8a5209 7±0351 4a3964 8±0338 5b5200 8±0119 7a5566 1±0117 8a

    18 ∶[G-3]1ω7c假單胞桿菌6941 9±0103 6a6088 7±0437 1a5146 9±0831 8a6249 0±0252 5a6460 6±0423 0a

    18 ∶[G-3]0嗜熱解氫桿菌2664 9±0064 8a2385 3±0179 4ab2002 7±0088 8a2176 1±0180 3ab2508 8±0140 4ab

    11 Me 18 ∶[G-3]1ω7c纖維菌屬0770 2±0006 9a0661 3±0053 1ab0531 2±0069 1a0568 4±0088 8ab0697 1±0048 3ab

    i17 ∶[G-3]0 3OH細(xì)菌0725 2±0180 1a0721 1±0009 8a0682 9±0007 8a1067 3±0316 2a0751 1±0054 1a

    10Me18 ∶[G-3]0放線菌1444 7±0113 0a1199 6±0099 6ab1013 9±0011 4a1130 6±0016 6ab1245 8±0170 3ab

    19 ∶[G-3]1ω11c 細(xì)菌0397 7±0003 0c0±0a0273 0±0002 8b0400 9±0047 5c0285 5±0020 1b

    i19 ∶[G-3]1 I細(xì)菌0152 8±0046 2a0±0b0±0b0±0b0±0b

    i19 ∶[G-3]0 細(xì)菌0198 0±0018 2a0155 3±0020 3b0±0c0±0c0±0c

    cy 19 ∶[G-3]0ω8c伯克霍爾德菌4365 2±0163 5a3921 0±0448 1ab2711 6±0374 9b3225 4±0331 5ab3416 5±0273 8ab

    20 ∶[G-3]4ω6,9,12,15c原生動(dòng)物0640 8±0043 0ab0600 0±0079 1ab0477 6±0047 4a0573 2±0069 1a0691 2±0227 9b

    20 ∶[G-3]0 ISO細(xì)菌0±0a0±0a0±0a0526 9±0051 0b0±0a

    20 ∶[G-3]1ω9c嗜熱解氫桿菌0729 7±0050 9a0533 2±0105 3ab0420 9±0011 8ab0369 6±0034 3b0567 8±0102 0ab

    20 ∶[G-3]0細(xì)菌0447 1±0017 4a0349 3±0056 7a0261 8±0009 0a0295 0±0024 8a0409 4±0093 3a[HJ][BG)F]

    注:i、a、cy和Me分別表示異丙基、反異丙基、環(huán)丙基和甲基分支脂肪酸;ω后跟的數(shù)字表示出現(xiàn)雙鍵的碳原子位序;c和t 分別表示該雙鍵為順式構(gòu)型和反式構(gòu)型。數(shù)值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。同一行中,數(shù)據(jù)后不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<005。[F)]

    [FL(22]22不同紅花品種根際土壤中細(xì)菌、真菌、放線菌PLFAs生物標(biāo)記含量比較

    磷脂脂肪酸生物標(biāo)記16 ∶[G-3]0指示細(xì)菌,18 ∶[G-3]1ω9c指示真菌,10Me 18 ∶[G-3]0指示放線菌。這3類微生物在紅花根際土壤中的分布特點(diǎn)見(jiàn)圖2。總體而言,指示細(xì)菌的特征磷脂脂肪酸16 ∶[G-3]0在不同品種紅花根際土壤中的分布含量變化范圍為

    [F(W27][TPXHB1tif][F]

    676 ~ 962nmol/g;指示真菌的磷脂脂肪酸18 ∶[G-3]1ω9c次之,變化范圍為396 ~ 557 nmol/g;指示放線菌的磷脂脂肪酸10Me 18 ∶[G-3]0含量最低,變化范圍為101 ~ 145 nmol/g。同時(shí)由圖3可見(jiàn),不同紅花材料根際土壤微生物磷脂脂肪酸含量差異顯著,其中,16 ∶[G-3]0在新紅1號(hào)根際土壤中含量最高,PLFAs值為962 nmol/g,在云紅5號(hào)中最低,PLFAs值為676 nmol/g;18 ∶[G-3]1ω9c在 新紅1號(hào)中含量最高,PLFAs值為557 nmol/g,在云紅5號(hào)中最低,PLFAs值為396 nmol/g;10Me 18 ∶[G-3]0在5個(gè)紅花品種中含量相近。

    23不同紅花品種根際土壤甲烷氧化菌和硫酸鹽還原菌PLFAs生物標(biāo)記比較

    [F(W11][TPXHB2tif][F]

    [F(W11][TPXHB3tif][F]

    磷脂脂肪酸生物標(biāo)記16 ∶[G-3]1ω5c指示甲烷氧化菌,10Me16 ∶[G-3]0 指示硫酸鹽還原菌,它們?cè)?種紅花品種根際土壤中的含量比較見(jiàn)圖3。由圖3可知,10Me16 ∶[G-3]0的含量高于16 ∶[G-3]1ω5c 的含量,10Me16 ∶[G-3]0最高為新紅1號(hào),PLFAs值為643 nmol/g,最低為云紅5號(hào),PLFAs值為473 nmol/g;在5種紅花品種中,新紅1號(hào)的16 ∶[G-3]1ω5c生物標(biāo)記含量最高,為263 noml/g,含量最低的為云紅5號(hào),PLFAs值為 172 nmol/g。

    24紅花根際土壤微生物PLFAs生物標(biāo)記的生態(tài)學(xué)指數(shù)

    由表3可知,不同品種紅花根際土壤微生物PLFAs生物標(biāo)記的種類和含量存在差異,PLFAs生物標(biāo)記種類的變化范圍為35~46,含量變化范圍為5442 ~ 7336 nmol/g;磷脂脂肪酸生物標(biāo)記的生態(tài)學(xué)指數(shù)存在差異,其中Simpson指數(shù)均大于0934,Shannon-Wiener多樣性指數(shù)變化范圍為305~311,均勻度指數(shù)變化范圍為0534 1~0615 7。[FL]

    [F(W9][HT6H][J][WTH]表3PLFAs生物標(biāo)記、生態(tài)學(xué)指數(shù)和紅花品種特性[WTB][HTSS][STB]

    [HJ5][BG(!][BHDFG3,W6,W54W]紅花品種[B(][BHDWG12,W112,W272,W15W]磷脂脂肪酸標(biāo)記微生物PLFAs生物標(biāo)記生態(tài)學(xué)指數(shù)紅花品種特性

    [BHDWG12,W3,W82,W92。2,W82,W62,W82W][XXSX2-SX11]頻次總量(nmol/g[XXSX2-SX27]Simpson指數(shù)Shannon-Wiener指數(shù)均勻度指數(shù)[XXSX2-SX142]花蕾數(shù)(個(gè)株高(cm[BW]

    [BHDG12,W6,W3,W82DW,W92。2DW,W82DW,W62DW,W82DWW]新紅1號(hào)4673355 9±1944 6a0941 8±0000 1a3201 5±0002 5a0534 1±0001 3a70±126a7484±562a

    [BHDW]新紅4號(hào)3664221 2±7057 6ab0933 9±0003 2b3055 0±0025 0b0589 6±0014 7b114±266a9656±750bc

    云紅5號(hào)3760644 3±4085 9ab0938 1±0002 0ab3115 0±0030 0ab0609 5±0018 2b86±351a7820±950ab

    裕民無(wú)刺3554415 2±9628 7ab0933 9±0000 3b3050 5±0003 5b0603 5±0002 2b76±404a9220±1512abc

    采毛紅花3548594 2±3807 7b0936 0±0002 1ab3070 0±0019 0b0615 7±0011 7b114±594a10260±1191c[HJ][BGF]

    注:同列數(shù)據(jù)后不同小字字母表示差異達(dá)005顯著水平。[F]

    [FL(22]3結(jié)論

    土壤微生物與紅花生長(zhǎng)息息相關(guān),人們對(duì)于紅花的研究多關(guān)注在其藥理研究或栽培技術(shù)的探索,對(duì)紅花土壤微生物的研究較少,陸爽等[34]對(duì)新疆栽培紅花的生長(zhǎng)期土壤微生物群落結(jié)構(gòu)研究結(jié)果表明,微生物總數(shù)表現(xiàn)為伸長(zhǎng)期>種子成熟期>蓮座期>花期。郭歡等[35]研究了水肥處理對(duì)紅花根際化學(xué)計(jì)量特征的影響,結(jié)果表明施肥可以明顯提高紅花根際微生物生物C、N、P含量,合理的水肥配施有利于土壤養(yǎng)分的提高。

    本研究利用PLFAs法,分析新疆5種主栽紅花品種新紅1號(hào)、新紅4號(hào)、云紅5號(hào)、裕民無(wú)刺和采毛紅花根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的差異,研究結(jié)果表明:

    (1紅花根際土壤微生物磷脂脂肪酸生物標(biāo)記豐富,5種紅花根際土壤中存在大量完全分布型磷脂脂肪酸,同時(shí)也存在各自特有的不完全分布型種類,其中新紅1號(hào)特有磷脂脂肪酸有12 ∶[G-3]0、i13 ∶[G-3]0、15 ∶[G-3]1ω6c、a16 ∶[G-3]0、i19 ∶[G-3]0、19 ∶[G-3]1ω11c。Garcia-Villaraco等 [36] 研究結(jié)果表明,不同基因型的擬南芥的根際微生物群落之間差異顯著[24]。其他研究結(jié)果也證明不同植物種類,同種植物不同基因型,植物年齡及根際分泌物都能影響微生物種群結(jié)構(gòu)。

    (2 根際土壤微生物磷脂脂肪酸在生態(tài)學(xué)指數(shù):多樣性(Simpson、豐富度(Shannon、均勻度(Evenness等指數(shù)上無(wú)顯著差異,可能原因是幾種紅花品種之間親緣關(guān)系較近,其根際分泌物差異不明顯。

    由于微生物傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法只能得到可培養(yǎng)的土壤微生物信息,且僅占全部微生物不到1%的比例,因此本研究采用磷脂脂肪酸(PLFAs生物標(biāo)記法進(jìn)行研究,與傳統(tǒng)方法及生理學(xué)方法、分子生物學(xué)方法相比,具有以下優(yōu)點(diǎn):(1PLFA法能直接有效地從土壤中獲得微生物群落信息,適合微生物群落的動(dòng)態(tài)研究;(2磷脂脂肪酸成分不受質(zhì)粒損失或增加的影響,也幾乎不受有機(jī)體變化影響,試驗(yàn)結(jié)果更加客觀、可靠;(3實(shí)驗(yàn)條件要求低、操作難度小,且測(cè)試功能多;(4能定量描述環(huán)境樣品匯總的微生物群體,適合用于微生物群落的總體分析。因此,該方法在微生物多樣性的研究中得到越來(lái)越多的應(yīng)用。盡管PLFA法在分析土壤環(huán)境微生物中有許多優(yōu)勢(shì),但也存在不足。首先,由于并不知道土壤中所有微生物的特征脂肪酸,因此在許多情況下,土壤中存在的某種特殊脂肪酸無(wú)法與土壤中特定種類的微生物相對(duì)應(yīng),因而,磷脂脂肪酸分析方法不能對(duì)微生物在種或菌株水平上加以區(qū)分;其次,細(xì)菌和真菌能夠產(chǎn)生大量不同類型的磷脂脂肪酸,因而生長(zhǎng)條件的改變或環(huán)境脅迫都能導(dǎo)致脂肪酸類型的改變[37]。

    致謝:本研究土壤磷脂脂肪酸PLFAs的檢測(cè)在浙江大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院、水土資源與環(huán)境研究所實(shí)驗(yàn)室完成,徐建明教授和于勝雄同志等提供了實(shí)驗(yàn)條件并給予實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo),在此表示感謝!

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