酶抑制法蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)影響因素的分析探討

宋利學(xué)

當(dāng)前，蔬菜生產(chǎn)過(guò)程中農(nóng)藥被廣泛應(yīng)用、提高產(chǎn)量的同時(shí)，也存在一些不規(guī)范用藥現(xiàn)象，特別是農(nóng)藥殘留的超標(biāo)問(wèn)題，越來(lái)越引起社會(huì)各界關(guān)注。與此同時(shí)，酶抑制法蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)，以其檢測(cè)速度快、成本低、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，已成為現(xiàn)行最普遍的蔬菜農(nóng)殘快速檢測(cè)方法，在各類(lèi)檢測(cè)機(jī)構(gòu)、大型農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、大型超市、農(nóng)產(chǎn)品配貨中心等得到廣泛使用。本文著重分析探討人員、環(huán)境、試劑、樣品等多種因素對(duì)檢測(cè)的影響，以及如何通過(guò)對(duì)各因素有效控制，提高實(shí)驗(yàn)效率和檢測(cè)準(zhǔn)確性。

一、酶抑制法檢測(cè)原理

酶抑制法是基于有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的昆蟲(chóng)毒學(xué)原理實(shí)施檢測(cè)的，即這兩類(lèi)農(nóng)藥能夠抑制昆蟲(chóng)中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿酶的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲(chóng)中毒致死。經(jīng)過(guò)一系列特定的前處理方法，使酶催化乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度隨時(shí)間變化值，計(jì)算出抑制率，抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)，從而判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。

二、農(nóng)殘速測(cè)的特點(diǎn)

酶抑制法檢測(cè)蔬菜農(nóng)藥殘留具有簡(jiǎn)便、快捷、范圍廣、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等諸多優(yōu)點(diǎn)。如檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單易行，對(duì)檢測(cè)人員的能力水平要求低；分析時(shí)間短，樣品處理省去繁雜步驟；檢測(cè)范圍涵蓋有機(jī)磷、氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥，無(wú)需農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品；儀器、試劑價(jià)格低廉實(shí)用。

同時(shí)，也存在一些弊端，該方法只能適用定性檢測(cè)，無(wú)法做到單一農(nóng)藥品種的定量檢測(cè)，檢測(cè)中使用的酶、底物、顯色劑等具有一定的特異性，需要控制的條件比較多，易出現(xiàn)假陽(yáng)性的現(xiàn)象。

三、影響檢測(cè)準(zhǔn)確性的主要因素分析

1、人員操作

檢測(cè)人員操作的正確性和可靠性是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平高低的第一重要因素。人員操作因素主要反映在以下3個(gè)方面。

一是避免污染。使用移液器進(jìn)行試劑配置、對(duì)照液配置和樣品檢液的提取和配置過(guò)程中，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行，避免氣泡產(chǎn)生、槍頭污染、排液不凈等現(xiàn)象；二是熟練程度。在樣品中加入提取液后，需要震蕩搖勻，震蕩力度和時(shí)間需要一定的操作技能，如果震蕩過(guò)于劇烈，會(huì)使樣品中蔬菜色素增多，影響檢測(cè)結(jié)果；三是時(shí)間控制。樣品加入底物后，必須立即檢測(cè)，操作延遲對(duì)結(jié)果影響很大。如黃瓜的測(cè)試中，立即放入檢測(cè)的抑制率是22.8%，延遲1分鐘后再放入檢測(cè)，抑制率為82.4%。酶對(duì)底物的水解反應(yīng)是一個(gè)漸進(jìn)的過(guò)程。一般只要有足夠的時(shí)間，酶會(huì)將底物完全水解，吸光度值達(dá)到最大值，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，最好采用反應(yīng)初期3—5分鐘時(shí)的吸光度變化量來(lái)計(jì)算酶抑制率，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。

2、環(huán)境條件

環(huán)境條件的影響主要表現(xiàn)在以下兩個(gè)方面。

一是室內(nèi)溫度。酶抑制法是通過(guò)酶被抑制的程度來(lái)反映農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)，酶的活性極易受到環(huán)境溫度的影響，酶的正常作用最適溫度為37.5—38.5℃，如果溫度過(guò)高或過(guò)低，會(huì)抑制酶的活性，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若室溫達(dá)不到25℃，必須將酶液和顯色劑放入37℃恒溫水中15分鐘。二是防止交叉污染。實(shí)驗(yàn)室的待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、試劑藥品等必須分開(kāi)隔離存放，提取液、酶液、底物、顯色劑的移液器提取槍頭必須明確分開(kāi)，防止交叉污染。

3、器具試劑

主要包括檢測(cè)試劑、水、刻度器具、器皿等。檢測(cè)試劑如酶、底物粉劑等，未配置時(shí)必須放置在冰箱0℃以下冷凍保存。實(shí)驗(yàn)用水一定要使用無(wú)污染的蒸餾水，專(zhuān)門(mén)器皿存放；刻度器具如移液器，需要進(jìn)行檢定和自校，保證精密度達(dá)到相關(guān)要求；玻璃器皿，如燒杯、試管要經(jīng)過(guò)充分的沖洗、干燥，做到用后立即清洗，滴干后用干凈紗布蓋好，防止微量殘留部分交叉污染。

4、樣品因素

一是抽樣環(huán)節(jié)。抽樣時(shí)間、抽樣量、抽樣單元、抽樣部位、樣品封存和運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)，都要按照GB/T8855-2008新鮮水果和蔬菜取樣方法的要求，避免抽樣誤差；二是樣品制備。樣品要求切成1厘米大小的碎片，太小太碎會(huì)將蔬菜中的色素溶解到提取液中，影響檢測(cè)結(jié)果。如蔥、蒜、香菜、韭菜等蔬菜含有植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，可采取整體（株）浸提。

總之，通過(guò)對(duì)以上因素實(shí)施控制，可以最大限度地發(fā)揮該方法的效用，提高檢測(cè)效率和檢測(cè)的準(zhǔn)確性，以滿足各相關(guān)領(lǐng)域開(kāi)展蔬菜快速檢測(cè)的需求。