酸棗仁散的藥效學(xué)研究

王利利 ，俞明遠(yuǎn)，馬彤輝，湯林杰，徐霄龍，滕可導(dǎo)，劉鳳華，馬云飛，許劍琴

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀100193 ；2.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 昌平 102206）

酸棗仁湯源于我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)經(jīng)典《金匱要略》，人醫(yī)臨床上用于治療虛勞虛煩不得眠，怔忡恍忽，心悸盜汗，頭目眩暈，夜間盜汗，咽干口燥等病證[1]，利用酸棗仁湯治療失眠癥可以明顯延長(zhǎng)睡眠時(shí)間，同時(shí)加深睡眠深度，使神經(jīng)衰弱等癥狀得到改善。而獸醫(yī)臨床少見(jiàn)報(bào)道。在獸醫(yī)生產(chǎn)中，動(dòng)物在運(yùn)輸、轉(zhuǎn)群及仔豬斷奶過(guò)程中由于內(nèi)外界因素的改變會(huì)產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，如身體的損傷、情志的變化、行為的變化以及食欲差、消化功能紊亂、飼料利用率低、生長(zhǎng)遲滯、腹瀉等癥狀，嚴(yán)重時(shí)造成畜禽死亡，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失。研發(fā)中獸藥飼料添加劑應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)過(guò)程中以減緩環(huán)境應(yīng)激對(duì)家畜的影響，保證畜禽生產(chǎn)健康持續(xù)發(fā)展，有一定實(shí)用意義。本試驗(yàn)所用酸棗仁散由酸棗仁湯加減方改進(jìn)而成，由酸棗仁為君藥組成，水煎后，制成散劑，研究酸棗仁散對(duì)小鼠鎮(zhèn)靜、催眠、耐缺氧、耐高溫及鎮(zhèn)痛作用的影響，為應(yīng)用于中獸醫(yī)臨床提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物、藥品、試劑及主要設(shè)備 SPF 級(jí)昆明系小鼠，購(gòu)自北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（SCXK(京)2012-0001），小鼠體重為18～22 g。酸棗仁散（批號(hào)：20130601，生產(chǎn)單位：北京中農(nóng)勁騰生物技術(shù)有限公司中試產(chǎn)品）；戊巴比妥鈉（德國(guó)默克公司），安定片（北京益民藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20130307）；生理鹽水、凡士林、鈉石灰。動(dòng)物活動(dòng)箱：用無(wú)色有機(jī)玻璃制成的15 cm×25 cm×20 cm長(zhǎng)方形箱，其底部放入木屑?jí)|料。磨口廣口瓶，恒溫箱，熱板儀。

1.2 酸棗仁散對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響 將40 只雄性小鼠隨機(jī)分為4 組，每組10 只。分別為生理鹽水組（0.3 mL/只）、酸棗仁散劑低劑量組（5 g/kg體重）、中劑量組(10 g/kg 體重）和高劑量組（15 g/kg 體重），將散劑制成混懸液后灌胃給藥。以2 min 內(nèi)小鼠走動(dòng)時(shí)間及雙前肢向上抬舉次數(shù)為指標(biāo)，給藥前把小鼠投入箱中適應(yīng)5 min，記錄2 min的活動(dòng)數(shù)值作為正常值。分別在給藥后60 min和90 min，測(cè)定小鼠走動(dòng)時(shí)間及雙前肢向上抬舉次數(shù)[2]。

1.3 酸棗仁散對(duì)閾劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的協(xié)同作用 將50 只雄性小鼠隨機(jī)分為5 組，每組10 只，分別為戊巴比妥鈉組（閾劑量為60 mg/kg體重）、酸棗仁散低劑量（5 g/kg 體重）+閾劑量戊巴比妥鈉組、酸棗仁散中劑量（10 g/kg 體重）+戊巴比妥鈉組、酸棗仁散高劑量（15 g/kg 體重）+戊巴比妥鈉組、安定（2 mg/kg 體重）+戊巴比妥鈉組。酸棗仁散灌胃給藥，60 min 后再腹腔注射閾劑量戊巴比妥鈉，以翻正反射消失為入睡時(shí)間，從翻正反射消失至恢復(fù)時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間。試驗(yàn)在安靜、通風(fēng)、室溫18 ℃～22 ℃左右的環(huán)境下進(jìn)行[3]。

1.4 酸棗仁散對(duì)小鼠耐缺氧能力的影響 小鼠40只隨機(jī)分為4 組，每組10 只。設(shè)生理鹽水組、酸棗仁低劑量組（5 g/kg 體重）、中劑量組（10 g/kg 體重）和高劑量組（15 g/kg 體重），分別口服給藥3 天，于第3天給藥1 h后，將各組小鼠分別放入容積相同的（250 mL）的磨口廣口瓶?jī)?nèi)（每瓶1 只），瓶?jī)?nèi)裝有同等量（10 g）的鈉石灰，以吸收水分和二氧化碳。放入小鼠后，加蓋及瓶口涂以凡士林密封。以呼吸停止為死亡指征，記錄小鼠存活時(shí)間[4]。

1.5 酸棗仁散對(duì)小鼠耐高溫能力的影響 小鼠共40 只隨機(jī)分為4 組，每組10 只。設(shè)生理鹽水組、酸棗仁低劑量組（5 g/kg 體重）、中劑量組（10 g/kg 體重）和高劑量組（15 g/kg 體重），分別口服給藥3 天，于第3 天給藥1 h 后，將小鼠放入45 ℃的恒溫箱中，立即計(jì)時(shí)，并密切觀察。以最后1 次呼吸停止為指標(biāo)，記錄小鼠存活時(shí)間。

1.6 酸棗仁散對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用 取小鼠逐只放于（55±0.5）℃熱板儀上，記錄小鼠舔后足反應(yīng)所需時(shí)間（疼痛反應(yīng)潛伏期）作為小鼠的痛閾值，挑選痛閾值在5～30 s 內(nèi)的雌性小鼠40 只，隨機(jī)分為對(duì)照組、酸棗仁低、中、高劑量組，連續(xù)3 d 灌胃給藥，于末次給藥后1 h，分別將小鼠置于（55±0.5）℃的熱板上，測(cè)定痛閾值，并計(jì)算痛閾提高率。

痛閾提高百分率（%）=（給藥后痛閾-給藥前痛閾）/給藥前痛閾×100%

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 酸棗仁散對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響 給藥后60 min 和90 min，各給藥組均能顯著減少小鼠行走時(shí)間（P＜0.05），低、中、高劑量組與對(duì)照組相比均差異極顯著（P＜0.01），其中，高劑量組與低、中劑量組相比差異顯著（P＜0.05）（表1）。給藥后60 min 和90 min，各給藥組均可以顯著減少小鼠前肢上抬次數(shù)（P＜0.05），給藥后60 min，與對(duì)照組比較，高劑量組差異極顯著（P＜0.01），給藥后90 min，與對(duì)照組比較，低、中、高劑量組均差異極顯著（P＜0.01）（表2）。結(jié)果表明，酸棗仁散劑具有顯著抑制小鼠自發(fā)活動(dòng)的作用，其鎮(zhèn)靜效果明顯。

2.2 酸棗仁散對(duì)閾劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的協(xié)同作用 預(yù)試驗(yàn)得出戊巴比妥鈉閾劑量為60 mg/kg。酸棗仁低、中、高劑量組均可以增加戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間，其中酸棗仁散劑中劑量、高劑量組以及安定組與戊巴比妥鈉組相比，差異極顯著（P＜0.01），高劑量組與中劑量組比較差異極顯著（P＜0.01）（表3）。結(jié)果表明，酸棗仁散劑可顯著延長(zhǎng)閾劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間，具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用。

表1 酸棗仁散對(duì)小鼠走動(dòng)時(shí)間的影響（n=10）

表2 酸棗仁散對(duì)小鼠前肢上抬次數(shù)的影響（n=10）

表3 酸棗仁散對(duì)閾劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間的影響（n=10）

2.3 酸棗仁散對(duì)小鼠耐缺氧能力的影響 與對(duì)照組比較，酸棗仁散各劑量組均可以延長(zhǎng)密閉瓶?jī)?nèi)小鼠呼吸停止時(shí)間（P＜0.05），其中，中、高劑量組差異極顯著（P＜0.01），高劑量較低劑量組差異極顯著（P＜0.01）（表4）。試驗(yàn)結(jié)果表明，酸棗仁散劑可顯著提高小鼠的耐缺氧能力。

表4 酸棗仁散對(duì)小鼠耐缺氧能力的影響（n=10）

2.4 酸棗仁散對(duì)小鼠耐高溫能力的影響 與對(duì)照組相比，酸棗仁散各給藥組均可以延長(zhǎng)小鼠呼吸停止時(shí)間，中、高劑量組效果更好（P＜0.05）（表5）。結(jié)果表明，酸棗仁散可以提高小鼠耐高溫能力。

表5 酸棗仁散對(duì)小鼠耐高溫能力的影響（n=10）

2.5 酸棗仁散對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用 酸棗仁散低、高劑量組與對(duì)照組相比有一定鎮(zhèn)痛作用，但差異不顯著（表6）。

3 分析與討論

酸棗仁湯是傳統(tǒng)經(jīng)典鎮(zhèn)靜安神方，已有文獻(xiàn)報(bào)道，酸棗仁煎劑在小劑量時(shí)能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安靜，且鎮(zhèn)靜作用較恒定；稍大劑量則有催眠之效。其鎮(zhèn)靜、催眠作用的活性成分為水溶性的，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用與安定藥頗為類似[5]。隋宏等研究表明，酸棗仁合劑可以增加入睡小鼠的動(dòng)物數(shù)，抑制其自主活動(dòng)和生理代謝[6]。本方在原酸棗仁方的基礎(chǔ)上加入神曲，并制成散劑。

表6 酸棗仁散對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用（n=10）

本實(shí)驗(yàn)室藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，酸棗仁散劑灌胃給藥后，與對(duì)照組相比，小鼠自主活動(dòng)次數(shù)減少，且差異極顯著（P＜0.01），說(shuō)明酸棗仁散有明顯的鎮(zhèn)靜作用，且高劑量組（15 g/kg 體重）效果更好。我們又進(jìn)行了延長(zhǎng)戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間試驗(yàn)，觀察到酸棗仁散各劑量組均具有延長(zhǎng)戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間的作用，并有劑量依賴性，高劑量（15 g/kg 體重）組效果最好（P＜0.01），表明酸棗仁散有明顯的催眠作用。小鼠耐缺氧試驗(yàn)結(jié)果顯示，酸棗仁散各劑量組對(duì)常壓耐缺氧小鼠的存活時(shí)間與對(duì)照組相比顯著延長(zhǎng)（P＜0.05），表明酸棗仁散劑可明顯增加小鼠耐缺氧能力，且高劑量組（15 g/kg 體重）效果更好。小鼠耐高溫試驗(yàn)結(jié)果顯示，在高溫（45 ℃）下，酸棗仁散各劑量組小鼠存活時(shí)間與對(duì)照組相比均增加，且中劑量組（10 g/kg 體重）效果更好，表明酸棗仁散可以在一定程度上提高小鼠的耐高溫能力，但作用不顯著。鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果顯示，酸棗仁散低、高劑量組痛閾值有一定的提高，但與對(duì)照組相比差異不顯著，表明酸棗仁散劑對(duì)小鼠有一定程度的鎮(zhèn)痛作用，但效果不明顯。綜上所述，本方劑酸棗仁散具有明顯的鎮(zhèn)靜、安定、催眠和耐缺氧作用；有一定程度的耐高溫和鎮(zhèn)痛作用，但效果不顯著，有待后續(xù)試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。結(jié)合方劑組成分析，藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果與組方功能分解是相一致的，甚至有可能在實(shí)踐中起到其他功效。

本研究為酸棗仁散作為專用飼料添加劑用于仔豬斷奶、轉(zhuǎn)群及生產(chǎn)運(yùn)輸[7]等提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以期將環(huán)境應(yīng)激的危害降低到最小，保證畜禽生產(chǎn)健康持續(xù)發(fā)展。

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