淡黃花百合離體快繁技術(shù)研究

李 黛

(遵義師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，貴州遵義563002)

淡黃花百合(Lilium sulphureum Baker)為百合科百合屬多年生球根花卉，是我國衛(wèi)生部審批通過的首批藥食兩用植物［1］。目前，淡黃花百合的繁殖一般采用分球繁殖法，該法繁殖系數(shù)低，繁殖速度較慢，每株百合一年僅能得到1～3個子球，且需要培育2～3年才能達(dá)到開花年齡，因此生產(chǎn)成本高。在生產(chǎn)中也可以采用鱗片扦插法進(jìn)行繁殖，但扦插條件較難控制，若濕度小成活率較低，濕度過大又易腐爛，并且長期扦插繁殖極易導(dǎo)致病毒積累，嚴(yán)重影響百合的生長和品質(zhì)［2］。筆者曾經(jīng)也進(jìn)行過鱗片扦插繁殖試驗，增殖倍數(shù)也不高［3］。組織培養(yǎng)技術(shù)則可以解決以上問題，但目前有關(guān)淡黃花百合組織培養(yǎng)快繁技術(shù)的研究多以鱗片為外植體［4－9］，以珠芽為外植體的研究較少，張文娥等［10］用珠芽繁殖取得了較好的效果。筆者用正交試驗的方法探討了植物激素和蔗糖濃度對珠芽誘導(dǎo)形成的不定芽增殖培養(yǎng)的影響，旨在篩選出其不定芽增殖培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。

1 材料與方法

1．1 材料 以貴州務(wù)川野生淡黃花百合的珠芽為試材。野生淡黃花百合(Lilium sulphureum Baker)采自貴州務(wù)川縣山坡疏林地，種植于遵義師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院苗圃內(nèi)，于

2014年10月從生長健壯的淡黃花百合植株上剝?nèi)≈檠浚魉疀_洗30 min，于超凈工作臺上用75%乙醇消毒30 s后，再用0．1%的氯化汞消毒15 min，無菌水清洗5次以上，剝?nèi)ネ鈱喻[片后接種到1/2MS+0．1 mg/L IBA培養(yǎng)基上培養(yǎng)60 d，

轉(zhuǎn)接到MS+1．0 mg/L 6-BA+0．1 mg/L NAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)至苗高2 cm左右備用。培養(yǎng)基pH 5．8，培養(yǎng)溫度25℃左右，光照時間12 h/d，光強(qiáng)1 200 lx。

1．2 方法 采用正交試驗篩選不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基，

研究激素和蔗糖濃度對淡黃花百合珠芽誘導(dǎo)形成不定芽增殖的影響。所用基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，正交試驗采用L9(34)正交試驗表，6-BA、NAA、KT、蔗糖濃度4因素3水平試驗設(shè)計見表1。

表1 L 9(34)正交試驗

將上述珠芽誘導(dǎo)形成的不定芽接種到上述9組培養(yǎng)基中，每瓶1株，接10瓶，重復(fù)3次，培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計不定芽的數(shù)量和生長情況，并進(jìn)行方差分析。芽增殖正交試驗的培養(yǎng)條件與珠芽誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)條件相同。

2 結(jié)果與分析

將珠芽誘導(dǎo)形成的不定芽接種到上述正交試驗的9組培養(yǎng)基上，60 d后進(jìn)行觀察，絕大部分不定芽基部形成了大量的愈傷組織，部分不定芽產(chǎn)生了數(shù)量不多但較為粗壯的不定根。第1、5、7組培養(yǎng)基中不定芽的生長情況見圖1～3。

2．1 激素濃度對芽增殖的影響 由表2可知，在試驗濃度范圍內(nèi)，6-BA和NAA的濃度對不定芽增殖倍數(shù)的影響:隨著濃度的升高增殖倍數(shù)降低，即分別是0．5 mg/L ＞1．0 mg/L ＞1．5 mg/L 和0．05 mg/L ＞0．10 mg/L ＞0．20 mg/L，但6-BA的影響未達(dá)顯著水平，NAA的影響達(dá)到極顯著水平。KT對不定芽增殖倍數(shù)的影響在試驗濃度范圍內(nèi)則是0．2 mg/L最高，但當(dāng)濃度低于0．1 mg/L后，增殖倍數(shù)明顯降低，影響達(dá)極顯著水平。不定芽誘導(dǎo)率則是在6-BA和NAA濃度均較低的第1組培養(yǎng)基和KT濃度較高(0．2 mg/L)的第5組和第7組培養(yǎng)基中較高，分別是90%、90%和100%。愈傷組織誘導(dǎo)率除在第9組培養(yǎng)基和不定芽增殖倍數(shù)較高的第1、第5組培養(yǎng)基中稍低(分別為80%、90%和91%)外，其余均為100%。

2．2 蔗糖濃度對芽增殖的影響 由表2可知，蔗糖濃度對不定芽增殖倍數(shù)的影響:試驗濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出一定的規(guī)律，即20 g/L ＞30 g/L ＞40 g/L，其影響達(dá)極顯著水平;對愈傷組織形成的影響則表現(xiàn)為在蔗糖濃度為20 g/L的第1組、第5組和第9組培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)率均稍低，分別為90%、91%和80%，在蔗糖濃度為30 g/L和40 g/L的培養(yǎng)基中則均達(dá)到100%;但對不定芽誘導(dǎo)率的影響未表現(xiàn)出一定的規(guī)律。

表2 芽增殖L9(3)正交試驗結(jié)果

3 討論

該研究表明，當(dāng)培養(yǎng)基中未添加KT時，較低濃度的6-BA(0．5 mg/L)和 NAA(0．05 mg/L)有利于不定芽的增殖(第1組試驗)，當(dāng)添加0．2 mg/L的KT后，適當(dāng)增加6-BA和NAA的濃度仍能獲得較好的增殖倍數(shù)(第5組和第7組試驗)，其中第7組試驗中6-BA濃度達(dá)到1．5 mg/L仍有較高的增殖倍數(shù)，可能是因為6-BA濃度對不定芽增殖的影響并未達(dá)到顯著水平。而第3組試驗雖然KT的濃度也達(dá)到0．2 mg/L，但增殖系數(shù)仍不高，可能是因為NAA的濃度過高，NAA濃度對不定芽增殖的影響達(dá)到極顯著水平，所以NAA濃度的增加對不定芽增殖的影響較大，當(dāng)達(dá)到0．2 mg/L時，對不定芽增殖的抑制作用較明顯。

此外，在6-BA濃度為1．5 mg/L的第7組、第8組和第9組試驗中，未見玻璃化現(xiàn)象，其余幾組試驗都不同程度地出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，如何克服玻璃化現(xiàn)象有待進(jìn)一步研究;除不含KT的第1組、第6組和第8組極少或沒有形成不定根外，其余幾組試驗都或多或少形成了一定數(shù)量的不定根，說明附加KT后，有利于不定根的分化。

綜上所述，利用淡黃花百合珠芽誘導(dǎo)形成的不定芽進(jìn)行擴(kuò)繁，在試驗范圍內(nèi)不加KT時，6-BA和NAA濃度分別以0．5 mg/L和0．05 mg/L為最佳，添加 KT后，6-BA 濃度可提高至1．5 mg/L，NAA 濃度可提高至0．10 mg/L，考慮到玻璃化現(xiàn)象，以及在蔗糖濃度為30 g/L的第7組培養(yǎng)基中仍能獲得較好的增殖倍數(shù)，筆者認(rèn)為不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基應(yīng)為:MS+1．5 mg/L 6-BA+0．05 ～0．10 mg/L NAA+0．2 mg/L KT+20～30 g/L蔗糖。

［1］楊林莎，孫艷紅，方曉艷．中藥百合的研究進(jìn)展［J］．河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2002，17(1):74 －75．

［2］包滿珠．花卉學(xué)［M］．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2003．

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