野生和組培苗紅大戟藥材HPLC圖譜初步比較

黃浩　王碩　胡東南

摘 要：為了比較野生苗和組培苗紅大戟藥材的化學(xué)成分，以2 年生紅大戟野生和組培植株的根為材料，進(jìn)行HPLC圖譜初步分析。結(jié)果表明，野生苗和組培苗藥材在化學(xué)成分的類型、含量上均有明顯差異；種植生境和種苗來(lái)源可能是化學(xué)成分產(chǎn)生差異的主要原因。

關(guān)鍵詞：紅大戟 HPLC 指紋圖譜 化學(xué)成分

1 材料與方法

1.1 材料和儀器設(shè)備

紅大戟野生藥材采集于廣西寧明縣，生境為山坡灌木林，土質(zhì)為疏松壤土。組培苗的原始材料亦來(lái)自廣西寧明縣，按黃浩等方法[1-3]，經(jīng)外植體無(wú)菌處理、擴(kuò)繁、生根和移栽后，種植于廣西藥用植物園科研基地，種植地透光率為60 %的松樹林下，土質(zhì)為疏松壤土。所用于實(shí)驗(yàn)的藥材均為2 年生植株自然干燥的塊根。

美國(guó)VARIAN公司210型高效色譜儀，迪馬ODS C18色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5μm），KQ-5200型數(shù)控超聲儀 （昆山市超聲儀器有限公司），電子分析天平（CP2250D，Sartorius），甲醇、乙腈為色譜純（美國(guó)Fisher公司），水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

流動(dòng)相為乙腈A-0.1 %磷酸溶液B（梯度變化0～70 min，A 8 %-70 % ），流速0.65 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量10 μL，柱溫34℃。

1.2.2 樣品制備

將藥材打成粉，取粉末2.00 g，置于100 mL具磨口塞的錐形瓶中，精密加入80 %的甲醇溶液25.00 mL，搖勻，稱定重量。超聲處理1 h，放冷，再稱定重量，并用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，吸取一定量，以0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾備測(cè)。

1.2.3 方法學(xué)考察

精密度試驗(yàn) 取組培藥材制備的供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明，色譜圖中各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于1 %；相對(duì)峰面積的RSD小于1.5 %，符合指紋圖譜要求，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn) 取組培藥材制備的供試品溶液，分別在0、1、2、6、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明，各主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于2 %，相對(duì)峰面積的RSD小于1 %，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取組培藥材粉末2.00 g，共6份，照供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)平行樣品間各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD小于1.5 %；相對(duì)峰面積的RSD小于1.5 %，表明方法的重復(fù)性良好。

2 結(jié)果與分析

HPLC圖譜結(jié)果見圖1。從紅大戟組培和野生的HPLC圖譜中可看出，組培苗和野生苗藥材間的圖譜存在明顯差別，說(shuō)明其化學(xué)成分存在很大差別。在36.65 min時(shí)，組培苗藥材的HPLC圖譜中有一峰面積很大、但在野生藥材HPLC圖譜中并不存在的一種化學(xué)成分，即野生植物中不存在此成分。該化學(xué)成分是組培過(guò)程中少量基因發(fā)生變異造成還是生長(zhǎng)過(guò)程中生物轉(zhuǎn)化為其他成分所致，需在下一步進(jìn)行深入研究。在40～70 min的區(qū)間里，組培苗藥材只有3個(gè)特征峰，而野生藥材除了有相似的特征峰外，還有另外8個(gè)明顯的特征峰，這些特征峰代表的化學(xué)成分可能是在特定的生境中生長(zhǎng)，通過(guò)生物途徑逐漸轉(zhuǎn)化而來(lái)。從HPLC圖譜中的峰高和峰面積可看出，野生和組培苗藥材的化學(xué)成分含量也存在很大的差異。

3 結(jié)論

野生苗由種子長(zhǎng)出的苗，為有性繁殖，在化學(xué)成分上基本能保持與兩個(gè)親本相近；組培苗是通過(guò)生物技術(shù)的方法獲得種苗，屬于無(wú)性繁殖，理論上遺傳信息和化學(xué)成分原則上應(yīng)與親本完全相同，也應(yīng)與親本相同，但測(cè)試的結(jié)果表現(xiàn)出與野生植株在化學(xué)成分類型和含量上均有明顯差異，是否藥材來(lái)自不同來(lái)源的種苗，抑或是誘導(dǎo)過(guò)程中發(fā)生變異，還是不同生境或是用于實(shí)驗(yàn)的塊根生長(zhǎng)時(shí)間偏短（2 年）導(dǎo)致的差異，需進(jìn)一步研究。

由此可見，藥用植株的化學(xué)成分類型、含量很可能與植物的生境、種苗來(lái)源以及種植時(shí)間有一定的關(guān)系。在人工栽培藥用植物時(shí)，應(yīng)盡量模仿其野生生境，滿足其在生長(zhǎng)過(guò)程中生理和化學(xué)合成的不同需要，使藥材的化學(xué)成分、含量與野生藥材相近。試驗(yàn)結(jié)果可為其他藥用植物的人工栽培，特別是通過(guò)組織培養(yǎng)育苗的人工栽培提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃浩. 藥用植物紅芽大戟組織培養(yǎng)的研究[D].廣西大學(xué)，2006.

[2] 黃浩，韋鵬霄，岑秀芬，等. 紅大戟組培苗移栽試驗(yàn)[J]. 廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2007（5）： 19-21.

[3] 黃浩，文學(xué)，韋瑩，等. 藥用植物紅大戟快速繁殖技術(shù)研究[J]. 北方園藝，2011（4）： 196-198.