不同性別Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究*

李 娟，張德蓮，木拉力別克，李南方△，楊學磊，鄭靈玲，黃 昱 (.石河子大學醫(yī)學院，新疆 石河子 8000；新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院：.高血壓中心/新疆高血壓研究所；.臨床醫(yī)學研究 中心，烏魯木齊 8000；.北京大學醫(yī)學部醫(yī)學遺傳學系，北京 009)

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·論 著·

不同性別Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究*

李 娟1，張德蓮2，木拉力別克2，李南方2△，楊學磊3，鄭靈玲3，黃 昱4(1.石河子大學醫(yī)學院，新疆 石河子 832000；新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院：2.高血壓中心/新疆高血壓研究所；3.臨床醫(yī)學研究 中心，烏魯木齊 830001；4.北京大學醫(yī)學部醫(yī)學遺傳學系，北京 100191)

目的 了解Fabry病中不同性別患者α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)活性情況。方法 選取一個Fabry病家系的8例患者和13例健康者，應用干血片法測定經過GLA基因檢測確診的Fabry病患者和健康者α-Gal A活性并進行比較。結果 男性患者的α-Gal A活性[(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)]為健康對照者[(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)]的4.6%,女性患者[(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)]則為健康對照者的79.62%。男性半合子患者酶活性明顯下降(P<0.05)。α-Gal A活性檢測對男性半合子的靈敏度高于女性雜合子。結論 α-半乳糖苷A活性下降程度存在性別差異，男性半合子Fabry病患者酶活性明顯下降。

Fabry病; GLA基因; α-半乳糖苷酶

Fabry病是1898年由Anderson和Johann Fabry提出,故名Anderson-Fabry病,簡稱Fabry病。它是由于α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)先天性缺乏使其底物?；拾贝技喝擒?Gb3)和?；拾贝技憾擒盏哪┒税肴樘酋；荒鼙唤到膺M而不斷蓄積在體內，導致皮膚、心、腦、腎、胃腸、肺等組織器官損害,也是自Gaucher病后發(fā)現的第2種溶酶體貯積病(LSDs)[1-2]。因本癥缺乏特異性臨床表現，篩選體系尚不完善，其誤診率和漏診率都很高。目前針對Fabry病的診斷可以是通過在生化檢查中發(fā)現α-Gal A活性下降，在病理組織中找到特征性的嗜鋨性包涵體以及通過基因檢測發(fā)現GLA突變[3-4]。然而病理診斷為有創(chuàng)檢查，基因檢測則需要一定周期及較高的技術要求，而α-Gal A活性檢測是一快速、簡便、經濟的檢測手段，為此本研究通過對一個Fabry病家系中不同性別的患者和健康者的α-Gal A活性進行分析比較，了解Fabry病不同性別患者中α-Gal A的活性，以期為今后提高Fabry病的檢出率提供一定的理論基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取1個Fabry家系的8例Fabry病患者,其中男3例,女5例,平均(36.38±19.41)歲進行研究。8例中包括Fabry病先證者1例,先證者及其家系成員均經X染色體上GLA基因檢測確診為Fabry病,所有研究對象均知情同意。另對13例居住于同一地區(qū)的健康志愿者作為酶活性檢測健康對照組,其中男5例,女8例,平均(46.85±18.52)歲。

1.2 方法 α-半乳糖苷酶活性測定:應用干血片法測定肝素抗凝血漿α-Gal A活性,由北京大學醫(yī)學部醫(yī)學遺傳學系完成。熒光底物為5.0 mm 4-羥甲香豆素基-α-D-半乳糖基吡喃糖苷,抑制劑為0.1 mol/L N-乙酰-氨基半乳糖苷,標準物為4-羥甲香豆素，檢測濾紙上干燥血滴(約5.5 μL)的酶活性。正常參考范圍(100～500)×10-15mol/(d·spot)。

2 結 果

通過對13例健康對照組和8例Fabry患者組的α-半乳糖苷酶活性測定與比較發(fā)現：(1)對照組α-半乳糖苷酶活性平均值為(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)，其中在男性健康對照組為(152.76±14.32)×10-15mol/(d·spot)，女性健康對照組為(210.53±50.70)×10-15mol/(d·spot)，男女之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(2)Fabry病患者酶活性下降，平均值為(96.96±81.15)×10-15mol/(d·spot)，且與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.005)。(3)Fabry病患者中3例男性半合子患者α-半乳糖苷酶活性的平均值為(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)，是健康對照者的4.6%,明顯低于男性健康對照組(P<0.001)，α-半乳糖苷酶活性檢測靈敏度在男性半合子患者中為100%；5例女性雜合子患者的α-半乳糖苷酶活性的均值為(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)，為健康對照者的79.62%，雖然較女性健康對照者有所下降，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與男性患者相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。α-半乳糖苷酶活性檢測未能檢測出女性雜合子患者。健康對照組與Fabry病患者一般情況比較見表1，α-半乳糖苷酶活性對Fabry病男、女患者篩檢情況見表2，α-半乳糖苷酶活性在不同性別中的亞層分析情況見表3。

表1 2組一般情況的比較±s)

注：與對照組比較，*P<0.05。

表2 家系成員中男、女的基因檢測及酶活性情況(n)

表3 按性別分層后2組α-半乳糖苷酶活性的比較±s)

3 討 論

Fabry病是由于編碼α-Gal A的GLA基因發(fā)生突變，使鞘糖脂特別是三聚己糖神經酰胺沉積在溶酶體內，可引起多個系統(tǒng)臟器的損害[5]。Fabry病常見死亡原因是腎功能衰竭、腦血管意外和心肌梗死等。此外，由于α-Gal A代謝產物的沉積是一個漸進的過程，Fabry病的臨床表現也隨著年齡的變化而有所不同，男性半合子平均生存期較健康人群短20年，女性雜合子平均生存期則縮短約10年[6]。在歐洲針對Fabry病的酶替代療法已用于臨床治療，而國內尚無治療該病的特效藥物，對Fabry病的治療多為對癥治療[7]。所以早期準確地診斷Fabry病患者，從而盡早給予治療以減緩病情進展，成為Fabry病診療過程中非常重要的環(huán)節(jié)。

Fabry病的發(fā)病機制是由于α-Gal A活性缺陷導致機體內鞘糖脂異常代謝堆積致病,故酶活性測定可用于診斷Fabry病。1967年，Brady等首先提出Fabry病患者血中α-Gal A活性降低。本研究通過對一個經基因檢測確診的家系成員和健康對照者的α-Gal A活性進行分析比較，發(fā)現男性半合子患者酶活性明顯減低，僅是健康對照者的4.6%，而家系中女性攜帶者酶活性在正常范圍內，男性與女性患者之間的酶活性存在明顯差異，證實了α-Gal A活性檢測對于男性半合子具有非常高的敏感性及特異性，但是在女性雜合子患者酶活性檢測結果可在正常范圍內,從而使酶法診斷產生部分假陰性結果[8-9]。這一結果也與2005年Linthorst等[10]提出的在女性雜合子患者中，約有1/3因GLA基因上的特殊突變(如發(fā)生N215S突變)，其α-Gal A活性測定常在正常范圍一致。

總之，利用α-Gal A活性檢測在Fabry病女性患者篩查中易造成漏診，進而影響其自身的生活質量，增加后代的患病率。為此，針對家系中確診有Fabry病的患者以及Fabry病可疑的女性，在檢測α-Gal A活性的同時應進行基因檢測。此外，2011年，Paschke等[11]證實尿液Gb3總量和Gb3亞型可用于診斷女性Fabry病患者。但也有報道指出尿液和血漿中Gb3水平測定的可靠性和實用性還有待進一步探討[12]。因此，尋找無創(chuàng)、可靠、易測的生物標志物來快速診斷并評估Fabry 病女性患者的病情，提高Fabry病檢出率仍需進一步研究。

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[2]Mauer M,Glynn E,Svarstad E,et al.Mosaicism of podocyte involvement is related to podocyte injury in females with Fabry disease[J].PLoS One，2014,9(11):e112188.

[3]王朝暉，潘曉霞，陳楠.提高對法布里病臨床表現和實驗室新指標的認識[J].診斷學理論與實踐，2014，13(1)：20-23.

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[11]Paschke E，Fauler G，Winkler H，et al.Urinary total globotriaosylceramide and isoforms to identify women with Fabry disease:a diagnostic test study[J]． Am J Kidney Dis，2011，57(5):673-681.

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基金項目：福建省大學生創(chuàng)新性課題(2011257)。 作者簡介：陳金花，女，副主任技師，本科，主要從事血液檢驗方面的研究。

Study of alpha galactosidase A activity in different genders of patients with Fabry disease*

LIJuan1,ZHANGDe-lian2,Mulalibieke2,LINan-fang2△,YANGXue-lei3,ZHENGLing-ling3,HUANGYu4

(1.MedicalSchoolofShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang832000,China;2.HypertensionCenter/HypertensionInstituteofXinjiang;3.ClinicalMedicineResearchCenter,People′sHospitalofXinjiangUygurAutonomousRegion,Wulumuqi,Xinjiang830001,China;4.DepartmentofMedicalGenetics,DepartmentofMedicine,PekingUniversity,Beijing100191,China)

Objective To investigate the activity of α-galactosidase A(α-Gal A) in different genders of the patients with Fabry disease.Methods 8 patients with Fabry disease GLA gene detection diagnosed by and 13 healthy members in a family were selected and detected the α-Gal A activity by using the dried blood spots method.Results The α-Gal A activity in the male patients with Fabry disease was [(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)],which was only 4.6% of [(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)] in the healthy controls,whereas female patients was 79.62% of [(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)] in the healthy controls.The α-Gal A activity in hemizygous male patients was significantly lowered(P<0.05),the α-Gal A activity detection had higher sensitivity in male hemizygote than female heterozygous.Conclusion The gender difference exists in the decreased degree of α-Gal A activity.The enzymatic activity is significant reduced in male patients with hemizygotie Fabry disease.

Fabry disease； GLA gene； α-galactosidase A

新疆維吾爾自治區(qū)重點實驗室資助項目(XJYS0906)。

李娟，女，在讀研究生，主要從事心血管系統(tǒng)疾病方面的研究?！?/p>

，E-mail:Lnanfang2010@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.16.010

A

1672-9455(2015)16-2323-02

2015-02-15

2015-04-20)