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    兩種肌鈣蛋白檢測方法對脂血、黃疸和溶血的抗干擾評價

    2015-03-13 06:44:21陳少華孫永梅
    檢驗醫(yī)學與臨床 2015年17期
    關鍵詞:脂血濁法三酰

    陳少華,鄧 芳,孫永梅,李 明,張 揚

    (安徽省腫瘤醫(yī)院,合肥 230031)

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    ·論 著·

    兩種肌鈣蛋白檢測方法對脂血、黃疸和溶血的抗干擾評價

    陳少華,鄧 芳△,孫永梅,李 明,張 揚

    (安徽省腫瘤醫(yī)院,合肥 230031)

    目的 評價電化學發(fā)光法和免疫比濁法檢測肌鈣蛋白時對脂血、黃疸和溶血的影響。方法 采用已知范圍內的肌鈣蛋白標本與不同濃度的脂血、黃疸和溶血標本以一定比例混合,用ROCH E601電化學發(fā)光免疫分析儀和貝克曼DXC800生化分析儀分別檢測標本中的肌鈣蛋白濃度,觀察脂血、黃疸和溶血對肌鈣蛋白檢測結果的影響。結果 以偏差小于10.00%為可接受標準,脂血小于4.45 mmol/L對電化學發(fā)光法檢測肌鈣蛋白影響不大,而免疫比濁法在三酰甘油僅為1.03 mmol/L時即有537.04%的偏差;而黃疸在376 μmol/L時,電化學發(fā)光法檢測肌鈣蛋白的偏差小于10.00%,而免疫比濁法在總膽紅素為0.76 μmol/L時即有26.67%的偏差,遠遠小于說明書中1 020 μmol/L的聲明;溶血在血紅蛋白低于10 g/L時,電化學發(fā)光法檢測肌鈣蛋白沒有偏差,而免疫比濁法在血紅蛋白僅為1.5 g/L時即有537.04%的負偏差,小于說明書4.5 g/L的聲明。結論 在肌鈣蛋白處于正常參考值范圍內,脂血、黃疸和溶血對電化學發(fā)光方法檢測結果影響較小,基本和說明書一致;而使用免疫比濁的檢測方法,要盡量避免脂血、黃疸和溶血等因素干擾。

    肌鈣蛋白; 干擾; 電化學發(fā)光測定法

    肌鈣蛋白檢測對于急性心肌梗死的早期診斷有著重要的作用,據(jù)2007年美國臨床化學學會醫(yī)療實踐指南中,關于肌鈣蛋白的最大濃度至少有1次超過正常參考人群數(shù)值的第99百分位數(shù)作為心肌梗死的判斷標準,以總變異系數(shù)小于10%定義為最佳精密度[1-2]。但有數(shù)據(jù)提示其檢測結果受脂血、黃疸和溶血等因素的干擾,雖然不同的說明書對其抗干擾的數(shù)值進行了規(guī)定,但來自臨床的評價比較有限[3]。本研究評價電化學發(fā)光法和免疫比濁法檢測正常范圍內肌鈣蛋白時對脂血、黃疸和溶血的影響,現(xiàn)將相關情況報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑 儀器分別為羅氏Cobas E601 電化學發(fā)光免疫分析儀,校準液(批號174584)、試劑(批號179491)、質控物(批號175009)由羅氏公司提供;貝克曼DXC800全自動生化分析儀,試劑為川至(批號140311)、校準液(批號140717)、質控物(批號140005)。

    1.2 標本來源及制備 收集臨床患者和健康體檢者全血樣本,均無脂血、黃疸、溶血,并分別收集三酰甘油35.0 mmol/L、黃疸752 μmol/L和血紅蛋白40 g/L的臨床標本,通過生理鹽水稀釋,最終分別配為三酰甘油0、1.03、0.45、11.03、16.00、17.50 mmol/L,黃疸0、50、150、200、300、376 μmol/L和血紅蛋白0、1.5、4.0、5.0、10.0、20.0 g/L的濃度梯度,待測。

    1.3 檢測方法 混合標本分別用羅氏Cobas E601電化學發(fā)光免疫分析儀和貝克曼DXC800全自動生化分析儀重復檢測肌鈣蛋白3次并取平均值。計算干擾造成的偏差:偏差(%)=(干擾)/基礎濃度×100%。若偏差大于10.00%有影響,10.00%以內無影響。

    2 結 果

    2.1 三酰甘油對兩種方法檢測肌鈣蛋白的影響 三酰甘油濃度小于4.45 mmol/L對電化學發(fā)光法檢測肌鈣蛋白影響不大,而免疫比濁法在三酰甘油僅為1.03 mmol/L時即有536.67%的偏差。見表1。

    表1 三酰甘油對兩種方法檢測肌鈣蛋白的影響

    2.2 黃疸對兩種方法檢測肌鈣蛋白的影響 總膽紅素濃度376 μmol/L時,電化學發(fā)光法檢測肌鈣蛋白的偏差小于10.00%,而免疫比濁法在總膽紅素0.76 μmol/L時即有26.67%的偏差,遠遠小于說明書中1 020 μmol/L的聲明。見表2。

    表2 黃疸對兩種方法檢測肌鈣蛋白的影響

    2.3 溶血對兩種方法檢測肌鈣蛋白的影響 血紅蛋白低于10 g/L時,電化學發(fā)光法檢測肌鈣蛋白沒有偏差,而免疫比濁法在血紅蛋白僅為1.5 g/L時即有537.04%的負偏差,小于說明書4.5 g/L的聲明。見表3。

    表3 溶血對兩種方法檢測肌鈣蛋白的影響

    3 討 論

    2007年公布的“歐洲心臟病學會-美國心臟病學會基金會-美國心臟病協(xié)會-世界心臟聯(lián)合會”心肌梗死重新定義和美國臨床生化學會的心肌標志物在急性冠狀動脈綜合征中應用的臨床實驗室醫(yī)學實踐指南,均建議用心肌肌鈣蛋白I或T(cTnI或cTnT)作為急性心肌梗死的診斷標準生物標志物。肌鈣蛋白濃度升高或降低,必須至少1個濃度大于參考人群的第99百分位值,并且必須結合臨床、心電圖和影像學診斷結果[4]。電化學發(fā)光法和免疫比濁法是比較常見的方法,電化學發(fā)光法有較高的特異性和敏感性,但由于發(fā)光試劑使用配套產(chǎn)品,價格高,操作復雜,在很多急診檢測中使用開放系統(tǒng)、價格便宜和操作簡單的生化免疫比濁法[5];同時,由于肌鈣蛋白的檢測在臨床上常常作為急診項目,那么標本的狀態(tài)往往不可控制,脂血、黃疸和溶血標本是臨床最常見的不合格類型;再者由于肌鈣蛋白濃度隨病情進展有改變,標本重抽復檢也有一定的風險和困難,那么合理評估脂血、黃疸和溶血對檢測的偏差,對保證檢驗結果的快速準確有著重要的作用。

    脂血是臨床實驗室急診標本最常見的干擾因素,患者由于進食高脂飲食或者本身的高脂血癥,血漿或血清常呈現(xiàn)渾濁狀,若乳糜微粒過多可呈乳白色,所以也稱“乳糜血”。由于乳糜微粒的影響可使入射光產(chǎn)生散射,故對免疫比濁原理的方法學產(chǎn)生一定偏差[6-7]。本研究采用臨床常見的濃度梯度,結果表明脂血對兩種肌鈣蛋白檢測方法有較大的差異,電化學發(fā)光法在三酰甘油4.45 mmol/L濃度時偏差小于預定目標10.00%,可以接受,但在11.03 mmol/L時檢測結果出現(xiàn)25.00%的正偏差,小于試劑說明書上聲明的16.95 mmol/L(1 500 mg/dL),而免疫比濁法在三酰甘油1.03 mmol/L時,即出現(xiàn)高達536.67%的正偏差,提示脂血對此方法影響非常大,分析免疫比濁法是通過光學比濁法進行計算,而標本中的脂肪加大了濁度,對檢測結果形成了正偏差,故用此方法要避免脂血。

    健康人血漿里膽紅素的含量為1.71~17.10 μmol/L,但在很多病理狀態(tài)下如紅細胞破壞過多、肝臟疾病或者膽道梗阻時,膽紅素水平超過正常值出現(xiàn)黃疸血清,血中膽紅素越高,黃疸越重。本研究通過加入不同濃度臨床常見膽紅素形成不同程度的黃疸血清,檢測結果顯示,兩種方法檢測的肌鈣蛋白的結果隨著黃疸嚴重程度增加出現(xiàn)非線性變化,在0~376 μmol/L濃度范圍內電發(fā)光檢測方法的影響勉強可以接受,與試劑說明書一致(<0.01 ng/mL時偏差小于20.00%),但偏差正負不定,在50 μmol/L偏差最大為10.50%;而比濁法呈現(xiàn)隨血中總膽紅素濃度升高而正偏差越來越大的現(xiàn)象,在50 μmol/L偏差就達到25.60%,遠遠低于廠家說明書中在1 020 mmol/L時偏差10.00%的性能。

    溶血是臨床最常見的不合格標本原因,有各種原因造成,本研究結果表明隨著溶血程度的增加兩種方法對肌鈣蛋白檢測結果逐步下降,故存在著不同程度的負偏差,比濁法受溶血影響較大,在血紅蛋白稍微升高1.5 g/L即可出現(xiàn)-98.33%的偏差,與其說明書中抗干擾為4.5 g/L有較大的差距;而電發(fā)光的結果在1.5 g/L時偏差為0.00,說明結果沒有影響,而在血紅蛋白濃度達到10 g/L檢測結果產(chǎn)生了超過20.00%的負偏差,與其說明書中抗溶血濃度為小于10 g/L一致,和文獻報道基本一致[8]。試驗結果提示,在實際工作中如果因為溶血造成不合格標本檢測出現(xiàn)高值結果,可能提示臨床結果陽性。

    綜上所述,電化學發(fā)光法和免疫比濁法檢測肌鈣蛋白對脂血、黃疸和溶血的干擾有一定的抵抗能力,其中,電化學發(fā)光法對三酰甘油小于4.45mmol/L的脂血、總膽紅素小于376μmol/L的黃疸和血紅蛋白小于10g/L的標本沒有影響,與其說明書基本一致;而免疫比濁法抗干擾能力較弱,盡量避免脂血、黃疸和溶血。

    本試驗中羅氏Cobas E601電化學發(fā)光免疫分析儀和貝克曼DXC800全自動生化分析儀分別檢測的是肌鈣蛋白的T和I亞基,可能對結果有一定的影響。但有研究證實,兩者檢測有良好的一致性,方法上電化學發(fā)光法用的基本原理是雙抗夾心法,而生化分析儀上是免疫比濁法,有學者建議對不同方法學檢測不同位點的檢測方法不建議進行比對。但在實際工作中,不同的檢測系統(tǒng)檢測的結果在臨床診療有一定的延續(xù)性,作者認為臨床實驗室有義務主動對結果差異進行評估,以更好地對其檢測性能全面評價,為實驗室數(shù)據(jù)在臨床應用作出合理的指導。

    [1]張真路,周新.超敏肌鈣蛋白升高的臨床意義[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2014,37(7):555-558.

    [2]劉澤金,張真路,趙耿生,等.中國部分地區(qū)表面健康人群敏感型肌鈣蛋白I第99百分位值的建立[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2012,35(10):894-898.

    [3]Vermeer HJ,Thomassen E,de Jonge N.Automated processing of serum indices used for interference detection by the laboratory information system[J].Clin Chem,2005,51(1):244-247.[4]Apple FS,Collinson PO.Analytical characteristics of high-sensitivity cardiac troponin assays[J].Clin Chem,2012,58(4):54-61.

    [5]張春燕,宋凌燕,吳炯,等.三種敏感的心肌肌鈣蛋白I檢測方法分析性能評價及臨床應用[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2010,33(9):819-824.

    [6]彭華,戴盛明.高脂血標本對臨床檢驗項目的干擾及消除[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2010,31(10):1140-1142.

    [7]隆維東,黃冬悅,李堅,等.脂質清除劑Lipoclear消除脂血對常規(guī)生化項目檢測干擾的效果評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2014,35(1):72-74.

    [8]孫召東,王然,吳惠毅,等.溶血對兩種發(fā)光免疫分析法檢測心肌肌鈣蛋白I結果的影響[J].臨床檢驗雜志,2012,30(4):303-304.

    Evaluation on anti-interference of two kinds of troponin detection method on lipoidemia jaundice and hemolysis

    CHENShao-hua,DENGFang△,SUNYong-mei,LIMing,ZHANGYang

    (AnhuiProvincialTumorHospital,Hefei,Anhui230031,China)

    Objective To evaluate the influence of chemiluminescence and immune turbidimetry on lipoidemia,jaundice and hemolysis in detecting troponin.Methods The troponin samples with known range and different concentrations of lipoidemia,jaundice and hemolytic samples were mixed in a certain proportion.The ROCH E601 electrochemiluminescence immunoassay analyzer and and the Backman DX800 biochemical analyzer were adopted to detect the troponin concentration.The influence of lipoidemia,jaundice and hemolysis on the troponin detection result was observed.Results With a deviation of less than 10.00% as the acceptance criteria,lipoidemia <4.45 mmol/L had little influence on the troponin detection by the electrochemiluminescence immunoassay,but triglyceride only was 1.03 mmol/L by immune turbidimetry,the deviation was 537.04%;while jaundice was 376 μmol/L,the troponin deviation by electrochemiluminescence immunoassay was less than 10.00%,while jaundice was 0.76 μmol/L by the immune turbidimetry,the deviation was 26.67%,which was much less than 1 020 μmol/L in the statement of the instruction;the hemoglobin was less than 10 g/L in hemolysis,the troponin detected by the electrochemiluminescence had no deviation,but hemoglobin was only 1.5 g/L by the immune turbidimetry,the negative deviation was 537.04%,which was less than 4.5 g/L in the statement of the instruction.Conclusion In troponin normal reference value range,lipoidemia,jaundice and hemolysis have little influence on the results detected by the electrochemiluminescence,which is basically consistent with the instruction;while conducting troponin detection by using the immune turbidimetry should avoid the interference of factors such as lipoidemia,jaundice and hemolysis.

    troponin; interference; electrochemiluminescence assay

    陳少華,男,大專,檢驗師,主要從事臨床生化和質量控制工作研究?!?/p>

    ,E-mail:Dengfanger@sina.com。

    10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.031

    A

    1672-9455(2015)17-2563-02

    2015-03-10

    2015-03-15)

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