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    硫酸銅及順鉑鼓室內(nèi)給藥對(duì)大鼠內(nèi)耳銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響

    2015-03-12 02:57:58李俐華劉偉任基浩黃蕓王曼楊春平朱新華劉月輝
    聽力學(xué)及言語疾病雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:順鉑耳蝸

    李俐華劉偉任基浩黃蕓王曼楊春平朱新華劉月輝

    1南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(南昌 330006) ; 2中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科

    硫酸銅及順鉑鼓室內(nèi)給藥對(duì)大鼠內(nèi)耳銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響

    李俐華1劉偉2任基浩2黃蕓1王曼1楊春平1朱新華1劉月輝1

    1南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(南昌330006) ; 2中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科

    【摘要】目的了解銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(copper transport protein 1,CTR1)在大鼠內(nèi)耳的表達(dá)情況及硫酸銅和順鉑鼓室給藥對(duì)CTR1表達(dá)的影響。方法Wistar雄性大鼠24只,隨機(jī)分為4組,每組6只,Ⅰ組為正常對(duì)照組(非處理組) ;Ⅱ組為雙耳圓窗龕放置順鉑溶液(0.5 mg/ml)的明膠海綿;Ⅲ組為雙耳圓窗龕放置順鉑溶液(1 mg/ml)的明膠海綿;Ⅳ組雙耳圓窗龕放置硫酸銅溶液(0.02 mg/kg)的明膠海綿。采用免疫組織化學(xué)技術(shù),對(duì)各組耳蝸冰凍切片行CTR1蛋白的免疫組織化學(xué)染色,光學(xué)顯微鏡下觀察耳蝸組織中CTR1的表達(dá)情況;提取各組耳蝸組織總蛋白,應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測(cè)各組CTR1蛋白表達(dá)水平;提取耳蝸組織的總RNA,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組CTR1mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果Ⅰ~Ⅳ組大鼠的耳蝸各回Corti器、螺旋神經(jīng)節(jié)、血管紋的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上均有CTR1表達(dá),CTR1的平均光密度值呈降低趨勢(shì);各組耳蝸組織均有明顯的CTR1表達(dá),Ⅰ~Ⅳ組CTR1蛋白的光密度值分別為0.532±0.031、0.394±0.024、0.234±0.030和0.191±0.015,呈下降趨勢(shì),各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) ;各組耳蝸組織均有明顯的CTR1 mRNA表達(dá),Ⅰ~Ⅳ組光密度值分別為0.508±0.035、0.391 ±0.022、0.240±0.023和0.186±0.021,呈下降趨勢(shì),各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論CTR1在大鼠內(nèi)耳有豐富的表達(dá),其表達(dá)量可隨鼓室內(nèi)順鉑濃度增高而下降,且鼓室內(nèi)給予硫酸酮其表達(dá)量下降。

    【關(guān)鍵詞】銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1;順鉑;硫酸酮;耳蝸

    順鉑是常用的抗腫瘤藥物,但其具有耳毒性,順鉑致耳中毒的臨床表現(xiàn)為雙側(cè)對(duì)稱、不可逆的感音神經(jīng)性聾,其聽覺損害的嚴(yán)重程度與患者所接受的順鉑的累計(jì)劑量有關(guān)。順鉑引發(fā)的感音神經(jīng)性聾在腫瘤患者中占有相當(dāng)比例,且成為影響該藥使用甚至停藥的重要因素[1]。銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(copper transport protein 1,CTR1)是一種與銅及鉑具有高度親和力的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,新近研究顯示其參與了順鉑在細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn),其表達(dá)量受銅離子、順鉑濃度的調(diào)節(jié)[2]; More等[3]首次證明,CTR1在毛細(xì)胞內(nèi)有表達(dá),并且參與順鉑的轉(zhuǎn)運(yùn)。然而,在活體動(dòng)物內(nèi)耳中CTR1的表達(dá)以及銅離子和順鉑對(duì)其的相互影響了解甚少。為此,本研究旨在探討鼓室內(nèi)給予順鉑或者硫酸銅對(duì)CTR1在內(nèi)耳表達(dá)的影響,為順鉑耳毒性的干預(yù)研究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為Wistar雄性大鼠(購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司),體重為250~300 g,鼠齡8 W,耳廓反應(yīng)靈敏,外耳道無明顯的炎性分泌物,鼓膜完整,標(biāo)志清晰;動(dòng)物隨機(jī)分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組,每組6只。

    1.2用藥方法與劑量Ⅰ組為正常對(duì)照組(非處理組) ;Ⅱ組雙耳圓窗龕放置低濃度順鉑溶液(0.5 mg/ml,低濃度順鉑組)的明膠海綿;Ⅲ組雙耳圓窗龕放置高濃度順鉑溶液(1 mg/ml,高濃度順鉑組)的明膠海棉;Ⅳ組雙耳圓窗龕放置硫酸銅溶液(0.02 mg/kg,硫酸銅組)的明膠海綿。

    各組大鼠圓窗給藥方法:各組動(dòng)物常規(guī)麻醉后,左耳后切口,暴露聽泡,于聽泡背側(cè)打一直徑約3~4 mm小洞,暴露圓窗龕;用尖針將浸潤(rùn)生理鹽水、0.5 mg/ml順鉑、1 mg/ml順鉑、硫酸銅注射液的明膠海綿分別放置于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ組大鼠耳蝸圓窗龕處,微量注射器向聽泡內(nèi)注入少量的同種溶液;保持注藥時(shí)體位30 min,30 min后將放置于圓窗龕的明膠海綿取出,并吸干凈鼓室內(nèi)的殘余藥液,用口腔科牙膠閉合聽泡上的創(chuàng)面,縫合皮膚切口。

    1.3免疫組化檢測(cè)耳蝸CTR1耳蝸標(biāo)本制備:各組大鼠分別用過量的三溴乙醇麻醉后,斷頭取出左側(cè)聽泡(n=6),去除鐙骨,打開前庭窗和蝸窗,從蝸尖灌注4%的多聚甲醛溶液3次,并置于該溶液中24 h(4℃)。對(duì)側(cè)聽泡游離用于Western-blot檢測(cè)。固定的耳蝸經(jīng)0.1% PBS(pH 7.4)洗滌后10%的乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)脫鈣1周,每天更換脫鈣液1次。0.1% PBS洗滌3次,室溫下置入30%蔗糖溶液中24 h,沿蝸軸水平行冰凍切片(片厚10 μm)。

    耳蝸切片免疫組化染色:采用SABC法,步驟按試劑盒說明書,DAB顯色,陰性對(duì)照用PBS代替一抗。兔抗大鼠CTR1一抗購(gòu)自美國(guó)NOVUS生物公司,SP-9000試劑盒購(gòu)自北京中山生物有限公司。圖像分析:每只耳蝸取2張切片,觀察耳蝸底回血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)和Corti器,高倍顯微鏡(200倍)下Image Pro Plus 6.0系統(tǒng)計(jì)算平均光密度(average optical density,AOD) ;細(xì)胞質(zhì)或者細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒為陽性染色,不著色為陰性;應(yīng)用IPP6.0軟件對(duì)采集的圖像進(jìn)行分析,采用平均光密度值來(average optical density,AOD)表示細(xì)胞陽性染色的強(qiáng)弱。

    1.4Western-blot檢測(cè)耳蝸CTR1表達(dá)游離的右側(cè)聽泡(n=6)放入加有冰塊的PBS液體中,在解剖顯微鏡下打開聽泡,找到耳蝸,分離去除耳蝸周圍的肌肉和結(jié)締組織,去除聽泡外面骨質(zhì),用顯微剝離子鏟下剩余耳蝸組織,提取大鼠耳蝸組織蛋白,放入-80℃冰箱中凍存,所有用物均經(jīng)無酶處理。蛋白質(zhì)的提取:取出凍存的耳蝸組織,把剪切成細(xì)小的碎片。加入預(yù)冷的細(xì)胞裂解液,混勻(按照每20 mg組織加入100~200 μl裂解液) ;用玻璃攪拌棒勻漿,直到細(xì)胞充分裂解后,10 000~14 000 g離心3~5 min,取上清液,二喹啉甲酸蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度。用十二烷基硫酸納聚丙烯酰胺凝膠(SDS -PAGE )進(jìn)行電泳分離,轉(zhuǎn)膜封閉液室溫封閉1小時(shí),加一抗CTR1抗體(比例1: 500),孵育過夜,TBST洗3次,加辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗1 μl(比例1: 5 000),室溫孵育1小時(shí),TBST洗3次,ECL顯色并曝光顯影。凝膠成像分析系統(tǒng)對(duì)蛋白質(zhì)條帶掃描定量,掃描圖像電腦存檔。應(yīng)用Bandscan5.0軟件對(duì)Western blot的電泳條帶分析并且進(jìn)行光密度測(cè)定,光密度大小用CTR1與Beta-actin灰度值的比值來表示。

    1.5RT-PCR檢測(cè)耳蝸CTR1

    1.5.1引物設(shè)計(jì)根據(jù)GenBank檢索大鼠的Ctr1核苷酸序列長(zhǎng)度利用Primer Premier軟件設(shè)計(jì)特異性引物CTR1上游引物為F 5-ACACGGACGA-

    CAACATCACC-3,下游引物為R 5-CACCACCACAGCCTTCTTC-3,擴(kuò)增片段為497 bp。參照物Beta-actin上游引物為F 5-TCAGGTCATCACTATCGGCAAT-3,下游引物為R 5-AAAGAAAGGGTGTAAAACGCA-3,擴(kuò)增片段為281 bp。1.5.2總RNA的提取取下每組動(dòng)物耳蝸核,總重量為1 g (8~10個(gè)耳蝸核,包括耳蝸背側(cè)核及耳蝸腹側(cè)核)。采用異硫氰酸胍-酚-氯仿方法提取組織總RNA??俁NA提取完成后,紫外分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA濃度,重復(fù)檢測(cè)3次。

    1.5.3逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA(RT)具體步驟參照逆轉(zhuǎn)錄RT試劑盒說明書。

    1.5.4聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)反轉(zhuǎn)錄條件: 95℃,5 min→45℃,60 min→99℃,3 min→-20℃保存; CTR1 PCR及Beta-actin PCR反應(yīng)體系: cDNA 2 μl,10×PCR Buffer 2 μl,dNTP(10 Mm) 0.4 μl,上下游引物各0.2 μl(100 ng/μl),Taq酶(5 U/μl) 0.2 μl,PCR水補(bǔ)齊至20 μl;反應(yīng)條件: 95℃預(yù)變性5 min,95℃變性30 s,60℃復(fù)性35 s,72℃延伸50 s,共31個(gè)循環(huán),72℃延伸5 min。待反應(yīng)結(jié)束后,取PCR產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測(cè)。在紫外燈下觀察溴乙錠染色結(jié)果。應(yīng)用Bandscan5.0軟件對(duì)瓊脂糖凝膠電泳條帶分析并且進(jìn)行光密度測(cè)定,以積分光密度值表示。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件于Windows XP平臺(tái)下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多個(gè)樣本均數(shù)差異采用One-Way ANOVA方差分析進(jìn)行比較,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1動(dòng)物的一般情況觀察各組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)期間飲食、大小便良好,毛發(fā)光亮;未出現(xiàn)行為異常及死亡等情況,耳后傷口生長(zhǎng)良好;Ⅱ、Ⅲ組(順鉑圓窗給藥組)大鼠在麻醉蘇醒之后,出現(xiàn)不同程度的行走不穩(wěn)、耳廓反應(yīng)消失。

    2.2CTR1在大鼠耳蝸組織的免疫組化表達(dá)Ⅰ~Ⅳ組大鼠耳蝸組織中有豐富的CTR1表達(dá),主要定位于血管紋、螺旋神經(jīng)節(jié)、Corti器的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,胞核未見明顯染色; Corti器的內(nèi)外毛細(xì)胞和支持細(xì)胞均見陽性表達(dá),螺旋神經(jīng)節(jié)的染色深度要低于血管紋和Corti器(圖1) ;各組的耳蝸CTR1表達(dá)的平均光密度值呈逐漸降低趨勢(shì),各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) (表1)。

    表1 各組耳蝸CTR1表達(dá)的平均光密度值比較(珋x±s) (n=6)

    Ⅰ0.294±0.030 0.284±0.035 0.291±0.031Ⅱ 0.215±0.033 0.215±0.027 0.212±0.035Ⅲ 0.161±0.021 0.157±0.027 0.160±0.021 Ⅳ0.110±0.018 0.106±0.006 0.112±0.015

    2.3各組大鼠耳蝸組織CTR1的Western-blot檢測(cè)在正常耳蝸組織中CTR1蛋白濃度最高,其次依次為低濃度順鉑組、高濃度順鉑組、硫酸銅組(圖2) ;內(nèi)參照的beta-actin表達(dá)強(qiáng)度基本一致,因此排除了因?yàn)榈鞍追翘禺愋愿淖円鸬谋磉_(dá)強(qiáng)度的改變。

    在硫酸銅、順鉑圓窗給藥的干預(yù)下CTR1的表達(dá)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì),各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) (表2)。

    表2 各組耳蝸組織CTR1蛋白光密度和耳蝸核組織CTR1 mRNA的平均光密度比值比較(珋x±s) (n=6)

    圖1 Ⅰ組大鼠耳蝸的CTR1表達(dá)情況

    圖2 各組耳蝸組織中CTR1蛋白表達(dá)的Western-blot電泳圖

    2.4各組大鼠耳蝸核組織CTR1 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果抽提耳蝸核組織中總RNA,經(jīng)紫外線分光光度計(jì)量器檢測(cè)顯示OD260/OD280=1.9~2.0,明顯大于試劑盒抽提的最低低限1.6,顯示總RNA純度高;電泳結(jié)果顯示,28 s、18 s、5 s三條核糖體條帶清晰,無拖尾降解等現(xiàn)象,說明總RNA樣品完整,符合下一步實(shí)驗(yàn)的要求(圖3)。

    RT-PCR分析顯示,各組耳蝸核組織中均能夠檢測(cè)到CTR1 mRNA和內(nèi)參照beta-actin的表達(dá),在maker 500 bp左右可見CTR1的目地mRNA表達(dá)條帶(497 bp) (圖4),maker 300 bp附近檢測(cè)到了beta-actin目地基因表達(dá)條帶(281 bp),說明擴(kuò)增的產(chǎn)物具有較高的特異性。

    圖3 1.05瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)抽提的總RNA樣品

    圖4 大鼠耳蝸核CTR1 mRNA的RT-PCR電泳圖

    各組大鼠耳蝸核CTR1 mRNA的表達(dá)電泳條帶光密度值比較:在順鉑、硫酸銅給藥的干預(yù)下(Ⅱ~Ⅳ組) CTR1 mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)下降的趨勢(shì),各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) (表2)。

    3 討論

    CTR1最初在酵母菌中發(fā)現(xiàn),它是目前發(fā)現(xiàn)的最具有特異性的銅離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。CTR1廣泛存在于機(jī)體的組織內(nèi),脈絡(luò)叢、腎小管、眼睛、卵巢和睪丸等結(jié)締組織均有豐富的表達(dá)。CTR1通常定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)小囊泡頂端,主要發(fā)揮將銅離子轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)的作用[4]。More等[3]首次在C57BL/6的小鼠的內(nèi)外毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)、血管紋及周圍的神經(jīng)組織中檢測(cè)到CTR1的表達(dá),同時(shí)研究還顯示敲除CTR1基因的小鼠耳蝸對(duì)順鉑的攝取明顯減少,說明CTR1可能參與了順鉑在內(nèi)耳的轉(zhuǎn)入。本研究結(jié)果顯示Ⅰ~Ⅳ組大鼠的Corti器、螺旋神經(jīng)節(jié)、血管紋及其周圍組織均有大量的CTR1的表達(dá),與其在小鼠的表達(dá)相類似。

    CTR1的表達(dá)并不是恒定不變的,有研究者在卵巢腫瘤的細(xì)胞株培養(yǎng)中,加入一定濃度的銅離子和順鉑均可以使CTR1的表達(dá)迅速下降[5]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,通過改變食物中銅的含量,可以改變CTR1的定位,給動(dòng)物以低銅飲食,胞質(zhì)中小囊泡的頂端可見更多的CTR1表達(dá)[6]; CTR1聚集于囊泡頂端的作用可能是促進(jìn)食物中的銅轉(zhuǎn)入細(xì)胞質(zhì)中。高銅細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境也會(huì)對(duì)CTR1的表達(dá)產(chǎn)生影響,在培養(yǎng)的HEK293細(xì)胞加入高濃度的銅離子,則出現(xiàn)了CTR1蛋白的內(nèi)吞和降解[7],其機(jī)制可能是通過降解進(jìn)一步防止過量的銅離子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),以確保細(xì)胞內(nèi)銅離子保持在一定的濃度范圍之內(nèi),說明CTR1的正常表達(dá)是維持細(xì)胞銅離子平衡的關(guān)鍵因素。在活體組織內(nèi),CTR1的正常表達(dá)是維持體內(nèi)銅離子平衡的關(guān)鍵因素,CTR1的缺乏可使銅離子依賴的酶失活,引起細(xì)胞生理機(jī)制的紊亂甚至喪失[8]。從本研究結(jié)果看,在硫酸銅溶液圓窗給藥的干預(yù)下,大鼠耳蝸組織中CTR1蛋白及CTR1 mRNA的表達(dá)下降,可能是銅離子經(jīng)過圓窗膜滲入內(nèi)耳后,干擾了內(nèi)耳的銅離子平衡,表現(xiàn)為銅離子濃度的增加,為了維持原有的平衡,內(nèi)耳細(xì)胞通過下調(diào)CTR1的表達(dá)以減少或者阻止銅離子的轉(zhuǎn)入。此外,Ding等[9]研究顯示在低濃度順鉑(10、50及100 mM)的作用下毛細(xì)胞的損害要遠(yuǎn)高于高濃度的作用(400和1 000 mM),這可能與內(nèi)耳細(xì)胞對(duì)高濃度的順鉑耐藥性有關(guān)。本研究結(jié)果顯示低濃度順鉑組大鼠耳蝸及耳蝸核組織中CTR1的表達(dá)要高于高濃度順鉑組,推測(cè)低濃度順鉑組CTR1的表達(dá)量增加導(dǎo)致順鉑轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞的量也相應(yīng)的增加,因此對(duì)毛細(xì)胞的損害也更明顯。

    研究顯示在給老鼠的成纖維細(xì)胞和卵巢癌細(xì)胞中加入低濃度的順鉑溶液(2 μm)能夠使CTR1蛋白立即降解與消失,重新給予高濃度順鉑(10和200 μM)干預(yù),CTR1又重新出現(xiàn),推測(cè)CTR1消失與再現(xiàn)可能涉及到順鉑–CTR1復(fù)合物的胞吞或降解[10]。在肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞中加入順鉑之前先給予銅的螯合劑(BCS),能夠增加細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性[11],有作者推論其可能原因是銅的螯合劑降低了CTR1的濃度,進(jìn)而導(dǎo)致了耐藥性[12]。本研究經(jīng)大鼠鼓室分別給予了0.5 mg/ml和1 mg/ml兩種濃度的順鉑,兩組大鼠耳蝸及耳蝸核組織中的CTR1表達(dá)濃度均下降,且1 mg/ml組CTR1表達(dá)量低于0.5 mg/ml組;然而,如果繼續(xù)給予更高濃度的順鉑,是否也會(huì)出現(xiàn)類似結(jié)果,尚均需進(jìn)一步研究。

    銅離子是體內(nèi)銅/鋅超氧化物酶(Cu/Zn SOD)的重要組成部位,參與了細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、線粒體呼吸鏈電子傳遞和神經(jīng)遞質(zhì)合成等生理反應(yīng);由于CTR1在耳蝸的表達(dá)量可受銅離子調(diào)節(jié),而且本研究顯示,動(dòng)物圓窗給予硫酸銅后,耳蝸組織CTR1及耳蝸核組織CTR1 mRNA表達(dá)均下降明顯。因此,可以通過鼓室內(nèi)注射硫酸銅降低CTR1的表達(dá)量從而減少順鉑進(jìn)入內(nèi)耳的量以達(dá)到預(yù)防順鉑耳毒性的作用,這可能成為預(yù)防順鉑耳毒性的一種新方向。

    4參考文獻(xiàn)

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    (2014-12-16收稿)

    (本文編輯李翠娥)

    ·實(shí)驗(yàn)研究·

    Change of CTR1 Expression after Round Window Niche Copper Sulfate and Cisplatin Infusion

    Li Lihua*,Liu Wei,Ren Jihao,Huang Yun,Wang Man,Yang Chunping,Zhu Xinhua,Liu Yuehui
    (*Department of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery,The Second Affiliated Hospital of Nanchang University,Nanchang,330006,China)

    【Abstract】ObjectiveTo study the expression of copper transport protein 1 in the inner ear of rat and the changes of CTR1 expression after those round window niche copper sulfate and cisplatin infusion.Methods24 male wistar rats were randomly divided into 4 groups: Group I as the normal control group (nontreatment group) ; Group II as the round window niche cisplatin infusion group(0.5 mg/ml) ; Group III as the round window niche cisplatin infusion group (1 mg/ml) ; group IV as the round window niche copper sulfate infusion (0.02 mg/kg).The CTR1 protein was detected by the immunohistochemical (IHC) otaining and Western-blot,and the CTR1mRNA expression levels were detected by RT-PCR.Results The expression of CTR1 protein was observed in the cytoplasm and cell membrane of Corti organ cells,spiral ganglion cells and stria vascularis in all groups.The average optical densities of CTR1 protein was a downward trend.The expression of CTR1 protein was observed in four different groups.The optical density analysis of CTR1 showed that the optical densities were 0.532±0.031,0.394±0.024,0.234±0.030 and 0.191±0.015,respectively.There was a downward trend,and there were statistically differences among the groups (P<0.05).The CTR1 mRNA was observed in all groups.The optical density analysis of CTR1 mRNAbook=618,ebook=55had a downward trend and were statistically differences among the groups (P<0.05).Conclusion The CTR1 protein was abundantly expressed in Corti organ,spiral ganglion cells and stria vascularis of the cochlea.The round window cisplatin and copper sulfate infusion can change the expression of CTR1 proteins in inner ear.

    【Key words】Copper transport protein 1; Cisplatin; Copper sulfate; Cochlea

    通訊作者:任基浩(Email: jihao5114@ sina.com) showed that the optical densities were 0.508±0.035,0.391±0.022,0.240±0.02 and 0.186±0.021,respectively.It

    作者簡(jiǎn)介:李俐華,女,江西人,博士,主治醫(yī)師,主要研究方向?yàn)槎@的基礎(chǔ)研究及臨床嗓音疾病學(xué)。

    【中圖分類號(hào)】R764.5

    【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

    【文章編號(hào)】1006-7299(2015) 06-0617-05

    DOI:10.3969/j.issn.1006-7299.2015.06.012

    網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間:2015-9-10 16: 45

    網(wǎng)絡(luò)出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/42.1391.R.20150910.1645.020.html

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