治咳枇杷露的質量標準研究

張　婷

(安徽省淮北市食品藥品檢驗中心，安徽 淮北　235000)

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治咳枇杷露的質量標準研究

張婷

(安徽省淮北市食品藥品檢驗中心，安徽 淮北235000)

摘要:目的對治咳枇杷露的質量標準進行研究，提高質量控制水平。方法采用薄層色譜法對枇杷葉、薄荷腦、桔梗進行鑒別，采用氣相色譜法測定薄荷腦的含量。結果枇杷葉、薄荷腦、桔梗的薄層色譜斑點清晰，分離度好，專屬性強，陰性無干擾；薄荷腦的線性范圍為0.400 8～2.405 0 μg(r=0.999 9), 平均加樣回收率為99.4%(n=6)，RSD=0.19%。結論優(yōu)化后的質量標準方法易行、準確可靠, 可用于治咳枇杷露的質量控制。

關鍵詞:治咳枇杷露；薄層色譜法；氣相色譜法

治咳枇杷露收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第二十冊，由枇杷葉、百部、前胡、桔梗、桑白皮、薄荷腦制備而成。功能與主治為清肺熱、止咳、祛痰，用于風熱侵肺引起的口干作渴，咳逆痰多及支氣管炎咳嗽，兼治兒童傷風呃逆，咳嗽痰盛[1]。原質量標準比較簡單，只有相對密度、pH值、裝量等相應的檢查項，無薄層色譜鑒別和含量測定項。為了提高治咳枇杷露質量標準控制水平，分別對處方中的枇杷葉、薄荷腦和桔梗的薄層色譜鑒別方法進行研究，同時采用氣相色譜法測定薄荷腦的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器AGILENT 7890A氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器，島津Rtx-WAX色譜柱，Mettler AE-240電子分析天平。

1.2試藥薄荷腦對照品(批號：110728-200506)、萘對照品(批號：111673-200803)、枇杷葉對照藥材(批號：121261-200502)、桔梗對照藥材(批號：121028-200507)，均購于中國藥品生物制品檢定所；治咳枇杷露(安徽輝克藥業(yè)有限公司，批號：120829、130112、121202)，硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)，D101型大孔吸附樹脂(天津制膠廠)，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1枇杷葉TLC鑒別

2.1.1供試品溶液的制備取本品20 mL，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加水3 mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑為1.5 cm，柱高為8 cm)，以水50 mL洗脫，棄去水洗脫液，再用稀乙醇洗脫至洗脫液無色，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2對照藥材溶液的制備取枇杷葉對照藥材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，濾過，濾液同“2.1.1”項方法制成對照藥材溶液。

2.1.3陰性對照溶液的制備按處方比例取除枇杷葉外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.1.1”項方法制成陰性對照溶液。

2.1.4實驗方法吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—乙酸乙酯—冰醋酸(8∶4∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，枇杷葉陰性色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上無斑點，結果見圖1。

2.2薄荷腦TLC鑒別[2-3]

2.2.1供試品溶液的制備取本品15 mL，加石油醚(30～60℃)提取2次，每次15 mL，合并石油醚液，低溫濃縮至1 mL，作為供試品溶液。

2.2.2對照品溶液的制備取薄荷腦對照品，加石油醚(30～60℃)制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3陰性對照溶液的制備按處方比例取除薄荷腦外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.2.1”項方法制成陰性對照溶液。

2.2.4實驗方法吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷—乙酸乙酯(17 ∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，薄荷腦陰性色譜中，在與對照品色譜相應的位置上無斑點，結果見圖2。

注：1.枇杷葉對照藥材；2~4.樣品；5.缺枇杷葉陰性樣品。

注：1.薄荷腦對照品；2~4.樣品；5.缺薄荷腦陰性樣品。

2.3桔梗TLC鑒別[4-6]

2.3.1供試品溶液的制備取本品15 mL，加7%硫酸乙醇20 mL及水30 mL，加熱回流2 h，放冷，用三氯甲烷振搖提取3次，每次40 mL，合并三氯甲烷液，加水洗滌2次，每次40 mL，棄去水層，三氯甲烷液用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3.2對照藥材溶液的制備取桔梗對照藥材1 g，加水100 mL，煎煮1 h，濾過，濾液同“2.3.1”項方法制成對照藥材溶液。

2.3.3陰性對照溶液的制備按處方比例取除桔梗外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.3.1”項方法制成陰性對照溶液。

2.3.4實驗方法吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚-甲酸(10 ∶9 ∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，桔梗陰性色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上無斑點，結果見圖3。

注：1.桔梗對照藥材；2~4.樣品；5.缺桔梗陰性樣品。

2.4 薄荷腦含量測定

2.4.1色譜條件毛細管色譜柱：Rtx-WAX色譜柱(柱長30 m，內徑0.25 mm，膜厚0.25 μm)，柱溫：140℃；檢測器：FID，檢測器溫度：260℃；進樣口溫度：260℃，分流比為5 ∶1；載氣：氮氣，流速為1.0 mL·min-1；氫氣流速：40 mL·min-1；空氣流速為400 mL·min-1；氮氣尾吹，流速為30 mL·min-1；進樣量：2 μL。[6-7]

2.4.2內標溶液的制備精密稱取萘對照品160.73 mg，置25 mL量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內標溶液。

2.4.3對照品儲備液的制備精密稱取薄荷腦對照品100.21 mg，置50 mL量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液(每1 mL含2.004 2 mg薄荷腦)。

2.4.4供試品溶液的制備[7]精密量取本品50 mL，置500 mL圓底燒瓶中，加水250 mL，連接揮發(fā)油測定器，自測定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，加環(huán)己烷3 mL，連接回流冷凝管，加熱保持微沸3 h，放冷，將測定器中的液體移至分液漏斗中，冷凝管及揮發(fā)油測定管內壁用環(huán)己烷少量洗滌，并入分液漏斗中，分取環(huán)己烷液，水液再用環(huán)己烷提取2次，每次3 mL，用鋪有無水硫酸鈉0.5 g的漏斗濾過，合并環(huán)己烷液，置25 mL量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。

2.4.5陰性對照溶液的制備按處方比例取除薄荷腦外其余藥材，按制劑工藝制成陰性空白樣品，按“2.4.4”項方法制成陰性對照溶液。

2.4.6專屬性考察按照“2.4.1”項色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各2 μL,分別注入氣相色譜儀，結果見圖4。表明其他藥味不干擾供試品溶液中薄荷腦的測定。

混合對照品樣品陰性對照

圖4治咳枇杷露 GC 色譜圖

注：1.薄荷腦；2.萘。

2.4.7線性關系考察分別精密吸取對照品儲備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置10 mL量瓶中，再分別精密加入內標溶液1 mL，用環(huán)己烷定容至刻度，搖勻，精密吸取2 μL注入氣相色譜儀，按照“2.4.1”項色譜條件測定，記錄峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標，薄荷腦和內標物峰面積的比值為縱坐標，經(jīng)線性回歸，得回歸方程為：Y=0.607 5X-0.006 2(r=0.999 9)，結果表明，薄荷腦在0.400 8～2.405 0 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.4.8精密度試驗精密吸取同一對照品溶液，在“2.4.1”項色譜條件下重復進樣5次，以薄荷腦峰面積與內標物峰面積的比值計算，RSD為0.21%，表明本法精密度良好。

2.4.9重復性試驗取同一供試品(批號為120829)5份，按“2.4.4”項方法制成供試品溶液，在“2.4.1”項色譜條件下測定含量，薄荷腦的含量為0.17 g·L-1，RSD為0.09%，表明本法重復性良好。

2.4.10穩(wěn)定性試驗取制備好的供試品溶液(批號為120829)，在“2.4.1”項色譜條件下，每2 h進樣一次，以薄荷腦峰面積與內標物峰面積的比值計算，RSD為0.15%，表明本品在18 h內穩(wěn)定性良好。

2.4.11回收率試驗精密量取已知薄荷腦含量為0.17 g·L-1的供試品(批號為120829)6份，每份25 mL，置圓底燒瓶中，再分別精密加入薄荷腦含量為2.209 6 g·L-1的對照品溶液2.0 mL(精密稱取薄荷腦對照品55.24 mg，置25 mL量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得)，按“2.4.4”項下方法制備供試品溶液，在“2.4.1”項色譜條件下測定，平均回收率99.4%，RSD為0.19%，結果見表1。

表1　加樣回收率試驗結果

2.4.12樣品含量測定取不同批號樣品三批(批號分別為120829、130112、121202)，按“2.4.4”項下方法制備供試品溶液，在“2.4.1”項色譜條件下測定并計算薄荷腦的含量，結果分別為0.17、0.19、0.17 g·L-1。

3討論

3.1枇杷葉薄層色譜鑒別 枇杷葉的薄層色譜鑒別參照了有關文獻報道[7-8]，曾以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(12 ∶2 ∶0.2)為展開劑，展開后用10%硫酸乙醇溶液顯色、加熱，結果供試品和對照藥材斑點均不清晰，展距不理想，采用本文方法，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(8∶4∶0.1)為展開劑，展開后用5%香草醛硫酸溶液顯色、加熱，效果滿意。

3.2內標物的選擇薄荷腦屬于易揮發(fā)性物質，為了抵消進樣時揮發(fā)所帶來的誤差，故采用內標法測定薄荷腦的含量。經(jīng)查閱有關文獻[9-10]及參考藥典[7]，選用萘為內標物，且萘在該色譜條件下保留時間適中，峰形較好，分離度良好，而且陰性對照無干擾，使結果更加準確可靠。

3.3含量測定提取時間的確定試驗中曾取同一批樣品，照含量測定方法分別提取2、3、4 h，測得2 h含量結果偏低，3 h與4 h含量結果基本一致，說明樣品在3 h時已基本提取完全，故確定提取時間為3 h。

3.4柱溫的選擇曾參照藥典[7]將柱溫設為110℃，在其余色譜條件不變的情況下，薄荷腦和內標物的保留時間過長，且峰形不理想，將柱溫改為140℃后[11-12]，效果滿意，最終確定柱溫為140℃。

4結論

本文所建立的枇杷葉、薄荷腦、桔梗薄層鑒別方法，提取簡便，斑點清晰，陰性無干擾；薄荷腦含量測定方法經(jīng)方法學考察，結果表明線性關系、精密度、重復性、穩(wěn)定性及回收率均良好，方法可行；與原標準相比提高了治咳枇杷露的質量控制水平。

參考文獻：

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準.中藥成方制劑[S].第二十冊,1998: 172.

[2]蔣叔霏.虎梅顆粒中薄荷腦薄層色譜鑒別與虎杖苷含量測定[J].中國藥業(yè)，2013，22(19)：43-45.

[3]朱倩云，李成網(wǎng)，張潔，等.如意金黃乳膏質量標準的研究[J].安徽醫(yī)藥，2014，18(3)：446-449.

[4]喬志華，張朔生.羚羊感冒膠囊質量標準研究[J].山西中醫(yī)學院學報，2013，14(2)：42-43.

[5]許 勇，毛丹，陸繼偉，等.復方桔梗麻黃堿糖漿(Ⅱ)的質量標準研究[J].齊魯藥事，2012，31(10)：574-576.

[6]金傳山，張偉，桂雙英，等.不同產地桔梗中桔梗皂苷D及總多糖的含量比較[J].安徽醫(yī)藥，2014，18(2)：246-249.

[7]國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010: 471-472.

[8]韓桂茹，張文臣，安麗娜，等.金麻杏止咳片快速薄層色譜鑒別與3成分同時定量測定研究[J].中國藥業(yè)，2012，21(14)：41-43.

[9]文屏，郭巧技，羅婧，等.氣相色譜法測定清火膠囊中薄荷腦的含量[J].今日藥學，2013，23(9)：584-586.

[10] 來國防，張元杰，程 賓.氣相色譜法測定腫痛氣霧劑中薄荷腦和龍腦的含量[J].中國藥師，2013，16(2)：227-229.

[11] 王海波，宋漢敏，李振國.氣相色譜法同時測定關節(jié)止痛膏中樟腦、薄荷腦、水楊酸甲酯的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(7)：77-80.

[12] 汪劍飛.GC色譜法測定強力枇杷露中薄荷腦的含量[J].北方藥學，2012，9(12)：1-2.

◇臨床醫(yī)學◇

Study on the quality standard of Zhikepipa Mixture

ZHANG Ting

(HuaibeiFoodandDrugInspectionCenter，Huaibei，Anhui235000，China)

Abstract：ObjectiveTo study the quality standard of Zhikepipa Mixture and improve the quality control level．MethodsFolium eriobotryae，menthol and radix platycodonis in Zhikepipa Mixture were identified by TLC．The content of menthol was determined by GC． ResultsTLC spots were clear with high resolution and strong specialization and the negative control showed no interference．The linear range of menthol was 0.400 8～2.405 0 μg (r=0.999 9) and the average recovery was 99.4 % with RSD of 0.19 %(n=6)．ConclusionThe improved quality standard is simple，accurate and can be used for the quality control of Zhikepipa Mixture．

Key words：Zhikepipa Mixture；TLC；GC

(收稿日期：2014-04-08，修回日期：2014-09-12)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.02.020