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    流式熒光技術(shù)檢測CA242對胰腺癌的臨床診斷價值

    2015-02-27 01:51:28陳園園薛苗李銘一張樂之
    中華胰腺病雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:流式胰腺癌線性

    陳園園 薛苗 李銘一 張樂之

    ·論著·

    流式熒光技術(shù)檢測CA242對胰腺癌的臨床診斷價值

    陳園園 薛苗 李銘一 張樂之

    目的對流式熒光技術(shù)檢測血清CA242進行方法學評價,并評估其輔助診斷胰腺癌的臨床價值。方法 收集臨床確診的胰腺癌(140例)、肺癌等其他腫瘤(69例)、消化道良性疾病(48例)及健康體檢者(159名)的血標本,采用流式熒光發(fā)光法檢測血清CA242水平,并與常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法進行比較,評價流式熒光技術(shù)檢測CA242的敏感性和特異性。結(jié)果 流式熒光發(fā)光法的CA242檢測低限為0.89 U/ml,線性范圍經(jīng)驗證為1~500 U/ml。方法不精密度批內(nèi)變異系數(shù)(CV)為3.37%~5.30%,批間CV為7.43%~9.60%。與常規(guī)的ELISA法進行方法學比對,存在線性回歸方程Y=1.0398X-0.947,相關(guān)系數(shù)r=0.9687。受試者工作特征(ROC)曲線下面積為0.811±0.025(95%CI0.763~0.859),以18.625 U/ml為最佳臨界值,診斷胰腺癌的特異性達92.0%,敏感性為62.1%。結(jié)論 流式熒光技術(shù)檢測血清CA242具有時間短,高通量,多指標檢測的優(yōu)勢,值得臨床進一步推廣。

    胰腺腫瘤; 流式熒光技術(shù); 糖鏈抗原242; 實驗室技術(shù)和方法

    胰腺癌因具有高浸潤性、缺乏早期診斷方法、對化療不敏感而成為一種兇險的惡性腫瘤[1-3],在我國居惡性腫瘤發(fā)病第7位,發(fā)病率為7.28/106[4]。糖類抗原242(CA242)作為血清腫瘤標志物用于胰腺癌的輔助診斷具有重要價值[5-6],且在臨床應用較長時間。目前CA242常規(guī)檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附

    (ELISA)法,該法性能穩(wěn)定,用于臨床已有數(shù)十年時間。隨著臨床對項目檢測周期的要求提高,傳統(tǒng)ELISA方法因耗時較長而顯得落后。流式熒光法又稱xMAP、懸浮陣列、液相芯片等,它是以熒光編碼微球為核心,集流式原理、激光分析、高速數(shù)字信號處理等多種技術(shù)于一體的多指標同時進行分析的技術(shù)平臺,可一次同時準確定量檢測100種不同的生物分子,具有高通量、高靈敏度、多指標檢測等優(yōu)勢,可用于免疫分析、核酸研究、酶學分析、受體及配體識別分析等多方面、多領(lǐng)域的研究。目前該方法已逐漸進入臨床檢測的各個領(lǐng)域[7]。本研究采用流式熒光法檢測血清CA242水平,分析其檢測效能,評估其應用于臨床的診斷價值。

    材料與方法

    一、檢測標本

    收集2013年8月至2015年6月間第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院診治的血標本416例,包括胰腺癌140例,其他腫瘤69例(肺癌27例,肝癌13例,食管癌10例,乳腺癌6例,胃癌3例,食管癌、卵巢癌、子宮頸癌各2例,其他腫瘤4例),消化道良性疾病48例(慢性胰腺炎20例,急性胰腺炎15例,胰腺假性囊腫5例,慢性胃炎2例,肝炎2例,其他良性疾病4例),健康體檢者159名。各種疾病的診斷根據(jù)臨床癥狀、影像學檢查、實驗室檢查和(或)病理學檢查結(jié)果。

    二、檢測方法

    CA242定量檢測試劑盒(流式熒光發(fā)光法)由上海透景公司提供,多功能流式點陣儀為Luminex公司產(chǎn)品,型號Luminex200。嚴格按照試劑盒說明書進行檢測。

    三、統(tǒng)計學處理

    結(jié) 果

    一、流式熒光發(fā)光法最低檢測限及線性范圍

    流式熒光發(fā)光法檢測CA242的最低檢測限為0.89 U/ml,線性范圍上限為500 U/ml,下限為1 U/ml。將從臨床收集的接近線性范圍上限的高值CA242樣本(CA242 492.43 U/ml)和接近線性范圍下限的CA242樣本(CA242 1.12 U/ml)按1∶0、1∶4、2∶3、3∶2、4∶1、0∶1體積比混合成為6組等距濃度樣本,每個濃度樣本均重復檢測2次,各個濃度點實測值與理論值相關(guān)系數(shù)r=0.9928,說明CA242在聲明線性范圍內(nèi)線性良好。

    二、流式熒光發(fā)光法檢測的組內(nèi)、組間差異

    三、流式熒光發(fā)光法準確度與ELISA法比對

    162例血樣本在同天內(nèi)分別用流式熒光法與ELISA法檢測,兩方法間存在線性回歸方程:Y=1.0398X- 0.947,相關(guān)系數(shù)r=0.9687(圖1),表明兩種方法檢測CA242的相關(guān)性良好,系統(tǒng)誤差小,存在較好的可比性。

    四、不同疾病組血清CA242水平

    胰腺癌、其他腫瘤、胰腺及消化道良性疾病患者及健康人群的CA242水平分別為(159.96±277.40)、(31.02±107.95)、(32.76±114.62)、(4.69±4.97)U/ml。胰腺癌患者CA242水平顯著高于其他3組,差異均有統(tǒng)計學意義(P值均<0.001),其他腫瘤組、胰腺及消化道良性疾病組與健康人群組差異無統(tǒng)計學意義(P=0.692)。

    圖1 流式熒光發(fā)光法與ELISA法檢測CA242值的相關(guān)性

    五、ROC曲線分析

    416例臨床血清樣本的CA242的AUC為0.811±0.025,95%CI為0.763~0.859(圖2)。以18.625 U/ml為界,診斷胰腺癌的敏感性為62.1%,特異性為92.0%,陽性預測值為79.8%,陰性預測值為82.7%。

    圖2 CA242診斷胰腺癌的ROC曲線

    討 論

    CA242在1985年由Lindolm等分離出來,識別CA242的抗體來源于人大腸癌Colo205細胞株[10],其抗原決定簇是一種唾液酸化的碳水化合物[11]。CA242是胰腺重要的腫瘤標志物,它相對于CA19-9在相似敏感性下具有更高的特異性[12]。在不同良惡性疾病時,CA242、CA19-9的抗原決定簇出現(xiàn)的機會和程度并不相同。惡性腫瘤時,兩種抗原決定簇的出現(xiàn)均較正常時明顯增多。而良性疾病尤其是良性肝、胰、膽道疾病時,CA19-9常常會升高,但CA242不升高。因此,檢測CA242診斷惡性腫瘤比CA19-9和CA50更具特異性[6,12]。

    目前臨床檢測CA242的常用方法為ELISA法、化學發(fā)光法(CLIA)、蛋白芯片法等[6,12-14]。流式熒光技術(shù)檢測CA242是一種新方法,在流式熒光法平臺上利用藻紅蛋白(PE)標記CA242抗體,與血清中的CA242反應,加入交聯(lián)有抗CA242的捕獲單克隆抗體的熒光編碼微球的混懸液,最終形成了微球-捕獲抗體-CA242抗原-PE標記抗體的復合物。在流式點陣分析儀上,熒光編碼的微球可被微量液體傳送系統(tǒng)排成單列,通過兩束激光,一束判定微球的編碼從而決定被測腫瘤標志物的種類,另一束測定微球上的PE熒光強度,通過標準曲線,從而計算出待測血清中的CA242濃度。它是一種基于熒光編碼微球和流式技術(shù)臨床應用型高通量發(fā)光檢測技術(shù)[15],具有靈敏度高、線性范圍寬、精密度好等優(yōu)點[15-17]。10 mg/ml三酰甘油或1 mg/ml膽紅素不會干擾流式熒光法檢測,而ELISA法在8 mg/ml三酰甘油或0.6 mg/ml膽紅素水平以下才不受干擾。流式熒光技術(shù)反應特點屬于液相反應,反應效率高,可以大大縮短反應時間。

    本研究結(jié)果顯示,采用流式熒光技術(shù)整體反應時間僅為1 h,遠短于ELISA法4 h的反應時間;流式熒光技術(shù)的CA242定量檢測試劑盒靈敏度為0.1 U/ml,高于ELISA試劑盒1 U/ml的敏感性;流式熒光技術(shù)對CA242檢測的線性范圍較寬,其上線可達到500 U/ml;批內(nèi)、批間不精密度CV均<10%;流式熒光法與ELISA法的相關(guān)系數(shù)r=0.9687,存在較好的可比性。應用流式熒光技術(shù)檢測CA242診斷胰腺癌的特異性92.0%時,敏感性為62.1%,與文獻報道的特異性86.5%、敏感性70.3%接近[18]。流式熒光技術(shù)多重檢測的特點為多指標聯(lián)合檢測診斷胰腺癌提供了良好的方法學工具。

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    (本文編輯:屠振興)

    ·讀者·作者·編者·

    本刊已正式啟用稿件遠程管理系統(tǒng)

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    Value of flowcytometry fluorescence immunoassay of CA242 in the diagnosis of pancreatic cancer

    ChenYuanyuan,XueMiao,LiMingyi,ZhangLezhi.DepartmentofLaboratoryMedicine,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

    Correspondingauthor:ZhangLezhi,Email: 13661924186@163.com

    Objective To conduct a methodological evaluation on flowcytomotry fluorescence detection of serum CA242, and to evaluate its value in the diagnosis of pancreatic cancer. Methods The blood samples of 40 cases of pancreatic cancer, 49 cases of other tumors, 48 cases of benign digestive diseases and 159 healthy volunteers were collected. Fowcytometry fluorescence immunoassay was used to detect serum level of CA242, and it was compared with routine ELISA method to measure its sensitivity and specificity. Results The detection limit of CA242 by flowcytometry fluorescence immunoassay was 0.89 U/ml, the linear range was 1~500 U/ml after confirmation. The within-batch CV was 3.37%~5.30%, between batch CV was 7.43%~9.60%. When compared with routine ELISA, flowcytometry fluorescence immunoassay showed the equation of linear regression is Y=1.0398X-0.947,r=0.9687. Area under ROC curve was 0.811±0.025 (95%CI0.763~0.859), with 18.625 U/ml as the best cutoff value, the specificity was 92.0% and the sensitivity was 62.1%. Conclusions Flowcytometry fluorescence immunoassay for CA242 testing has the advantage of shorter detection time, miltiple sample and testing project detection, which is worth of clinical application.

    Pancreatic neoplasms; Flowcytometry fluorescence immunoassay; CA242; Laboratory techniques and procedures

    10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.06.003

    200433 上海,第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院實驗診斷科

    張樂之,Email:13661924186@163.com

    2015-07-14)

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