HPLC法測定太平糖克丸中馬錢苷的含量

★　賴杰仁第一作者：賴杰仁，高級工程師，執(zhí)業(yè)藥師。研究方向：中藥新制劑與新技術(shù)。Tel：079-88883，E-mail：smz_lai@63.com?！≈x二磊　(.九江市中醫(yī)醫(yī)院　江西 九江 33000；.江西省藥品科技開發(fā)部　南昌 33009)

HPLC法測定太平糖克丸中馬錢苷的含量

★賴杰仁1*第一作者：賴杰仁，高級工程師，執(zhí)業(yè)藥師。研究方向：中藥新制劑與新技術(shù)。Tel：0792-8188832，E-mail：smz_lai@163.com。謝二磊2(1.九江市中醫(yī)醫(yī)院江西 九江 332000；2.江西省藥品科技開發(fā)部南昌 330029)

摘要：目的：建立太平糖克丸中馬錢苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，Prontosil 120-5-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)，流動相為四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)；流速1.0mL/min；檢測波長236nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按馬錢苷峰計算應(yīng)不得低于4 000。結(jié)果：馬錢苷對照品進(jìn)樣量在0.030 2 g～3.017 7 g范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)，馬錢苷平均加樣回收率為97.24%，RSD值1.55%(n=6)。結(jié)論：本方法操作簡便，準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好。適宜用于測定太平糖克丸中馬錢苷的含量。

關(guān)鍵詞：太平糖克丸；馬錢苷；含量測定；高效液相色譜法

太平糖克丸系九江市中醫(yī)醫(yī)院自主研發(fā)的省重點(diǎn)?？铺悄虿】铺厣t(yī)院制劑，已取得醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑批準(zhǔn)文號。本品由山茱萸、生地、黃芪、女貞子等十余味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰，化濁降糖的功效，臨床應(yīng)用于2型糖尿病癥屬氣陰兩虛或無癥狀糖耐量減損者，安全可靠，療效顯著。中國藥典從2005版起將馬錢苷作為中藥材山茱萸的質(zhì)量控制指標(biāo)之一，基于馬錢苷在復(fù)方制劑中作為主要的指標(biāo)性成分，本文采用高效液相色譜法測定馬錢苷的含量，將馬錢苷的含量作為太平糖克丸的質(zhì)量評價指標(biāo)，旨在為本醫(yī)院制劑建立內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與藥品

Waters系列高效液相色譜儀，包括：Waters 600 controller, PDA2996型二極管陣列檢測器，Empower化學(xué)工作站；SHIMADZULC-2010AHT高效液相色譜儀，紫外可變波長檢測器，LC-solution色譜工作站；KQ5200B型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

馬錢苷對照品(含量測定用，99.2%，111640-201005，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇、四氫呋喃、乙腈均為色譜純，其他試劑為分析純。

太平糖克丸(批號：20120601、20120602、20120603、20120701、20120702、20120703、20120901、20120902、20120903、20120904，九江市中醫(yī)醫(yī)院研制)。

2.1色譜條件色譜柱：Prontosil 120-5-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)。流動相：四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)；流速：1.0mL/min；檢測波長：236nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按馬錢苷峰計算應(yīng)不得低于4000。

2.2檢測波長的確定用PDA檢測器對馬錢苷對照品與樣品溶液中與馬錢苷對照品相應(yīng)位置上的色譜峰在400～210 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果均在236nm波長附近處有最大吸收，故確定檢測波長為236nm。

2.3樣品溶液的制備

2.3.1對照品溶液的制備精密稱取于五氧化二磷減壓干燥12h的馬錢苷對照品15.21mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。精密移取對照品儲備液5mL，用50%甲醇定容至50mL容量瓶中，即得馬錢苷對照品溶液。

2.3.2供試品溶液的制備重量差異項(xiàng)下本品適量，研碎，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25.00mL，密塞，稱定重量，加熱回流60min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3陰性對照樣品溶液的制備除山茱萸以外，其余各藥材按太平糖克丸處方量制備陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法，制得缺山茱萸的陰性對照樣品溶液。

2.4方法的專屬性試驗(yàn)分別精密吸取供試品溶液、陰性對照樣品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果顯示馬錢苷峰形良好，基線平穩(wěn)，對照品、供試品在相同時間有一色譜峰，且陰性對照樣品無干擾，見圖1。

2.5線性關(guān)系考察分別吸取上述對照品溶液1,5，10，20μL，對照品母液10μL，注入液相色譜儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定對照品峰面積，以進(jìn)樣量與峰面積進(jìn)行回歸處理，回歸方程為：Y=1.58×106X+6.21×103(n=5)，馬錢苷對照品進(jìn)樣量在0.030 2～3.017 7 μg范圍內(nèi)樣品進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)。

2.6精密度試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定馬錢苷峰面積值，計算得對照品峰面積值相對標(biāo)準(zhǔn)差為0.2%，測定方法的精密度良好。

A.馬錢苷對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在0,1,3,5,7,9,12,24h，精密吸取照“2.3.2”項(xiàng)下制備的供試品(批號：20120701)溶液10L，測定供試品溶液中馬錢苷峰面積值，計算供試品馬錢苷峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)差為1.85%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)重量差異項(xiàng)下本品(批號：20120701)適量，研碎，取約1g，共6份，精密稱定，照“2.3.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，處理結(jié)果數(shù)據(jù)，平均含量為0.8786mg/g，RSD為1.62%，方法重現(xiàn)性良好。

2.9加樣回收率試驗(yàn)重量差異項(xiàng)下本品(批號：20120701，馬錢苷含量為0.8786mg/g)，研細(xì)，取6份，每份約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入含馬錢苷(濃度30.177μg/mL)對照品的50%甲醇混合溶液25.00mL，稱定重量，照“2.3.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計算加樣回收率(見表1)。樣品中馬錢苷平均回收率為97.24%，RSD值為1.55%(n=6)，馬錢苷回收率良好。

2.10耐用性試驗(yàn)重量差異項(xiàng)下本品(批號：20120701、20120702)，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，照“2.3.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別用A：Prontosil 120-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)、B：Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm)、C：Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)三種品牌的色譜柱，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定馬錢苷含量，馬錢苷含量的RSD值低于1.0%，見表1。

表1　不同色譜柱測定結(jié)果馬錢苷含量

表2　太平糖克丸中馬錢苷含量(n=4)

2.11樣品測定重量差異下本品10批次，研細(xì)，各取約1g，精密稱定，照“2.3.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計算馬錢苷含量(見表3),馬錢苷含量在0.6221～0.9136mg/g。根據(jù)表2測定結(jié)果，考慮藥材來源、配制操作等因素的差異影響，設(shè)以平均含量的80%為太平糖克丸馬錢苷含量的限度，即規(guī)定：本品每1g含山茱萸以馬錢苷(C17H26O10)計，不得少于0.60mg。

3討論

3.1流動相的選擇方法學(xué)研究實(shí)驗(yàn)中，分別比較了以甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸和四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液為流動相，考察馬錢苷的分離情況及峰形，結(jié)果以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)為流動相的分離情況及峰形為佳；故確定流動相為：四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)。

3.2供試品溶液制備的方法考察在供試品溶液的制備方法實(shí)驗(yàn)中，分別考察了加熱回流60min，超聲提取(功率300W，頻率25kHz)60min兩種提取方式，結(jié)果顯示，加熱回流提取較為充分，故采用加熱回流方式制備供試品溶液。分別選擇了30%甲醇、50%甲醇和甲醇為提取溶劑，考察提取溶劑的影響，結(jié)果以50%甲醇提取效果最好。分別加熱回流30,60,90min，考察結(jié)果顯示，加熱回流60min即可得滿意結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會.中國藥典·一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：597-598.

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征稿啟事

《江西中醫(yī)藥》所設(shè)的重點(diǎn)欄目有《明醫(yī)心鑒》、《滕王閣醫(yī)話》等。《明醫(yī)心鑒》以介紹名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)和中醫(yī)臨證心得為主，重點(diǎn)刊載中醫(yī)關(guān)于疑難病的診療經(jīng)驗(yàn)，要求觀點(diǎn)、方法新，經(jīng)驗(yàn)獨(dú)到?！峨蹰w醫(yī)話》主要反映中醫(yī)教學(xué)、科研、臨床的一得之見，要求以小見大，有感而文，語言生動流暢，可讀性強(qiáng)，富于知識性、趣味性。

Determination of Loganinin in Taiping Tangke Pills by HPLC

LAI Jie-ren1, XIE Er-lei2

1.JiujiangHospitalofTCM,Jiujiang332000,China；

2.JiangxiProvincialEngineeringResearchCenterforDrugandMedicalDeviceQuality,Nanchang330029,China.

Abstract:Objective: To establish a HPLC method for the content determination of Loganin in Taiping Tangke pills. Methods: Samples were determined by HPLC on the C18column(250mm×4.6mm,5μm). The column temperature was 30℃. The mobile phase was consisted of tetrahydrofuran - acetonitrile - methanol - 0.05% phosphoric acid (1∶8∶4∶87). The flow rate was 1.0 mL/min at UV detection wavelength of 236 nm. Results: The lincear range of Loganin was 0.030 2 g～3.017 7 g，r=0.999 9. The average recovery of Loganin is 97.24%，RSD=1.55% (n= 6). Conclusion: The method is convenient，accurate，specificity and reproducibility for quality control of Taiping Tangke Pills.

Key words:Taiping Tangke Pills；Loganin；Determination；HPLC

收稿日期：(2014-11-10)編輯：曾文雪

中圖分類號：R286.0

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B