4種中藥對(duì)30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

龐載元 吳賢麗 華毅

（攀枝花市中心醫(yī)院，四川 攀枝花 617067）

4種中藥對(duì)30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

龐載元 吳賢麗 華毅

（攀枝花市中心醫(yī)院，四川 攀枝花 617067）

目的：探討黃芩等4種中藥對(duì)廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用。方法：采用中藥抗菌試驗(yàn)試管法測(cè)定藥物的最低抑菌濃度（M IC）。結(jié)果：黃芩、連翹、黃連、金銀花對(duì)30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用，M IC均值分別為475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，與標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853的M IC相近。其中黃連的抑菌作用最強(qiáng)。結(jié)論：4種中草藥對(duì)30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌均有不同程度的抑菌作用，本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞0.05）。

黃芩；連翹；黃連；金銀花；廣泛耐藥銅綠假單胞菌；體外抑菌試驗(yàn)

隨著抗菌藥的廣泛使用，細(xì)菌的耐藥問題變得越來越突出，嚴(yán)重威脅著人類健康，己成為人們必須面對(duì)的難題，特別是廣泛耐藥菌的出現(xiàn)使臨床感染治療面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，由于缺乏有效的抗菌藥治療，已成為院內(nèi)感染致死的一個(gè)重要原因。

廣泛耐藥銅綠假單胞菌[1]是院內(nèi)感染的重要條件致病菌，對(duì)碳青霉烯類、氟喹諾酮類、氨基苷類及β-內(nèi)酰胺類抗菌藥同時(shí)耐藥，多黏菌素可能是目前對(duì)碳青霉烯類抗菌藥耐藥銅綠假單胞菌或鮑曼不動(dòng)桿菌最為有效的抗菌藥物之一，但毒副作用較大，臨床較少使用；替加環(huán)素具有廣譜抗菌活性，是目前治療廣泛耐藥菌感染的首選，但對(duì)銅綠假單胞菌無抗菌活性[2]。開發(fā)新的抗菌藥是克服該菌耐藥性的有效途徑，但新藥開發(fā)周期長(zhǎng)、投資大，醫(yī)藥經(jīng)費(fèi)負(fù)擔(dān)重。

中藥治療感染性疾病有悠久的歷史，常用的抗菌中草藥有近百種[3]，因而從中藥中篩選出能對(duì)廣泛耐藥銅綠假單胞菌具有較強(qiáng)作用的藥物或相關(guān)成分可能是一條捷徑。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，有關(guān)中藥抑菌的研究較多，但未見中藥對(duì)廣泛耐藥銅綠假單胞菌抑菌、殺菌的研究報(bào)道，因此，研究中藥對(duì)廣泛耐藥銅綠假單胞菌的體外抗菌活性具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

本實(shí)驗(yàn)采用中藥抗菌實(shí)驗(yàn)試管法，參考了有關(guān)文獻(xiàn)[4]并根據(jù)多年來的經(jīng)驗(yàn)作了適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

孵箱，1 000μL無菌吸頭，1 000μL加樣槍，帶帽無菌試管若干，比濁儀，API 0.85%3 m L無菌鹽水管，試管架若干。

1.2 菌株的選擇

收集近期（2010年4月 -2011年4月）來自本院和外地（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院）的廣泛耐藥銅綠假單胞菌30株，選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 27853，ATCC25922，ATCC25923做對(duì)比分析。

1.3 中藥的選擇

通過查閱文獻(xiàn)，選擇有抗菌活性的4種中藥配方顆粒（本院藥房提供），由四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)的黃芩、連翹、黃連、金銀花，產(chǎn)品批號(hào)分別為0906004，1011091，1008054，1001002。

1.4 中藥藥液的制備

取50 m L的無菌燒杯，用無菌蒸餾水溶解中藥配方顆粒，使其藥液相當(dāng)于生藥的質(zhì)量濃度為1 000 mg/m L。

1.5 細(xì)菌的培養(yǎng)與稀釋

將選定的實(shí)驗(yàn)菌株,接種血平板培養(yǎng)基37℃孵育24 h。取API 0.85%3 m L無菌鹽水管，挑取菌落配制成0.5麥?zhǔn)媳葷釂挝?，相?dāng)于菌含量1.5× 108cfu/m L。

1.6 最低抑菌濃度（M IC）的測(cè)定

按臨床標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）推薦的液體稀釋法測(cè)定實(shí)驗(yàn)菌株的M IC值。具體應(yīng)用倍比稀釋法對(duì)藥物進(jìn)行稀釋，稀釋液為梅里埃的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏專用肉湯。

1.7 操作步驟

在10支無菌試管中加入1 m L肉湯，于第1管加1 m L中藥（1 000 mg/m L），混勻后取出1 m L加入第2管，混勻后取出 1 m L加入第3管，反復(fù)操作至第9管，第10管不加藥液做陽性對(duì)照，在每個(gè)試管中加入 0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木?20μL，第9管不加菌液做陰性對(duì)照，充分混勻后放置37℃孵箱中培養(yǎng)，24 h后觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。在陽性對(duì)照管細(xì)菌生長(zhǎng)正常，陰性對(duì)照管無菌生長(zhǎng)的條件下，判斷無渾濁的試管的最小濃度即為M IC。以上所有無菌操作均需在生物安全柜中進(jìn)行。

2 結(jié)果

黃芩、連翹、黃連、金銀花對(duì)30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用，M IC均值分別為475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，與標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853的M IC相近。其中黃連的抑菌作用最強(qiáng)。見表1。

3 討論

由表1可見，黃芩、連翹、黃連、金銀花對(duì)30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用。其中黃連的抑菌作用最強(qiáng)。連翹和金銀花的抑菌作用與冷會(huì)勇[5]報(bào)道的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的抑菌作用相似，黃連的抗菌活性，與李建志[6]報(bào)道的銅綠假單胞菌體外抗菌活性相似。4種中藥對(duì)本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞ 0.05）。

表1 4種中藥對(duì)30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

選擇適當(dāng)?shù)慕o藥途徑方能發(fā)揮中藥的抗菌作用。常用的抗菌中藥有近百種，然而其抑菌濃度遠(yuǎn)高于抗菌藥[7]，按常規(guī)劑量口服血藥濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到抑菌濃度。以本試驗(yàn)為例：黃連M IC均值為60.94 mg/m L，按成人5 000 m L體液算，需要一次口服 304.7 g生藥才可能在體內(nèi)達(dá)到抑菌濃度，而黃連的常規(guī)劑量為2～ 10 g[8]，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到應(yīng)有的血藥濃度。如果用此劑量口服治療胃腸道感染，因?yàn)椴槐匚杖胙?，理論上能達(dá)到抑菌濃度；如果用此劑量口服治療肺部感染，因?yàn)檠帩舛冗h(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到抑菌濃度，感染治療難以奏效。

中藥治療呼吸道感染，吸入給藥是不錯(cuò)的選擇。由于呼吸道面積大，毛細(xì)血管豐富、致密，藥物吸收快，吸收速率僅次于靜脈給藥[8]，藥物用量少，可以克服口服血藥濃度過低的瓶頸，通過霧化吸入，藥物可直達(dá)病所。張衛(wèi)東[9]報(bào)道：13例患者用多黏菌素E進(jìn)行霧化吸入治療廣泛耐藥銅綠假單胞菌性肺炎取得較好臨床療效，有效率為69.2%，研究中13例均未發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。中藥霧化吸入治療肺炎[10-12]和上呼吸道感染[13-15]的報(bào)道較多，療效肯定。本研究資料顯示，雖然4種中藥對(duì)廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同的體外抗菌活性，但按常規(guī)劑量口服在體內(nèi)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能達(dá)到應(yīng)有的抑菌濃度。中藥霧化吸入治療廣泛耐藥菌引起的肺炎是值得一試的方法。

在中藥抗菌研究的過程中，前人的研究結(jié)果提示中藥在抗菌作用方面蘊(yùn)藏著巨大潛力。中藥的給藥途徑有很多，在應(yīng)用研究方面需要打破常規(guī)，不斷創(chuàng)新與開拓，才能使中藥更好地造福于人類。

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The Bacteriostatic Effect of Four K inds of Traditional Chinese Herbal M edicines on Thirty Strains of Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa

Pang Zaiyuan，Wu Xianli，Hua Yi(Center Hospital of Panzhihua City,Sichuan Panzhihua 617067，China)

Objective：To evaluate bacteriostatic effects of four kinds of Chinese herbal medicines,including baicalin,on the extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.M ethods:The antibacterial medicine test tube method for TCM was adopted to determine the minimum inhibitory concentration （M IC）of the tested drug.Results：Scutellaria,Forsythia,Coptis and Honeysuckle showed a different degree of bacteriostatic effect in vitro antibacterial test on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.The M IC mean value was 475.00,345.83,60.94 and 379.17 mg/m L respectively,which was sim ilar to the M IC of the standard strain ATCC27853,and Coptis chinensis showed the strongest inhibitory effect.Conclusion:Four kinds of Chinese herbal medicines had different antibacterial effects on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa，and there was no significant difference of bacteriostasis（P＞0.05）between the strains collected locally and from other places.

Scutellaria；Forsythia；Coptis；Honeysuckle；Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa；in Vitro Antibacterial Test

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.02.006

2014-10-08）

龐載元，男，副主任技師。研究方向：臨床微生物檢驗(yàn)。E-mail：yangfan621225@qq.com