• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    金納多注射液對脂多糖致急性肺損傷大鼠肺組織中核因子-κB表達的影響

    2015-02-01 03:43:45劉子宸李永剛劉少斌張獻彩
    安徽醫(yī)藥 2015年12期
    關(guān)鍵詞:核因子急性肺損傷腫瘤壞死因子

    劉子宸,吳 棣,王 剛,李永剛,劉少斌,張獻彩

    (1.邢臺醫(yī)學高等??茖W校解剖教研室;2.邢臺市第三醫(yī)院婦產(chǎn)科,河北 邢臺 054000)

    ?

    金納多注射液對脂多糖致急性肺損傷大鼠肺組織中核因子-κB表達的影響

    劉子宸1,吳棣2,王剛1,李永剛1,劉少斌1,張獻彩1

    (1.邢臺醫(yī)學高等??茖W校解剖教研室;2.邢臺市第三醫(yī)院婦產(chǎn)科,河北 邢臺054000)

    摘要:目的探討金納多注射液對脂多糖致急性肺損傷(ALI)大鼠肺組織中核因子-κB(NF-κB)表達的影響。方法 采用隨機法將24只Wistar大鼠分為3組:對照組(Control)、脂多糖組(LPS)和金納多處理組(GBE)。采用尾靜脈注射脂多糖(LPS)的方法建立急性肺損傷模型,光學顯微鏡下觀察每組大鼠的肺組織病理學改變;檢測血清中腫瘤壞死因子-αB(TNF-αB)和肺組織中核因子-κB(NF-κB)的表達變化。結(jié)果與對照組相比,脂多糖組大鼠血清中TNF-αB含量升高(P<0.05),肺組織中NF-κB表達增加(P<0.05);與脂多糖組相比,金納多處理組大鼠血清中TNF-αB含量減少(P<0.05),肺組織中NF-κB表達減少(P<0.05)。結(jié)論 金納多注射液可有效減輕ALI時肺組織的炎癥反應,其機制可能與其降低大鼠體內(nèi)TNF-α含量、減少NF-κB表達有關(guān)。

    關(guān)鍵詞:急性肺損傷;金納多;脂多糖;腫瘤壞死因子-α;核因子-κB

    急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是指由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素所導致的肺泡上皮細胞及肺毛細血管內(nèi)皮細胞屏障功能喪失,從而導致的缺氧性呼吸衰竭,是機體炎癥反應失控導致的自身破壞性反應的結(jié)果。ALI時,大量富含蛋白的滲出液流入到肺泡腔,嚴重影響肺的換氣功能,導致頑固性低氧血癥和進行性呼吸衰竭,可誘發(fā)肺炎、胰腺炎、敗血癥等多種嚴重并發(fā)癥,是臨床常見的危急重癥[1-5]。在眾多病因中,重癥感染為其原因之一,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革蘭陰性菌細胞壁的主要成分,是引起感染性疾病的主要因素。ALI發(fā)病機制十分復雜,迄今為止尚未闡明,目前仍無有效的特異性的治療方法[6-8]。研究發(fā)現(xiàn):眾多細胞因子和炎性介質(zhì)參與了ALI的發(fā)生發(fā)展過程。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)為ALI時的炎癥啟動因子,降低體內(nèi)TNF-α的含量可顯著緩解肺損傷;核因子-κB(NF-κB)的激活在ALI中起著關(guān)鍵作用,NF-κB受到脂多糖及炎性細胞因子刺激活化后可加重ALI時的肺部損傷,減少NF-κB的表達可有效抑制ALI時炎癥反應,減輕肺組織的損傷程度[9-11]。

    銀杏是銀杏科植物的一種,銀杏葉主要為銀杏干燥葉,其主要成分為萜內(nèi)酯類、黃酮類、少量生物堿及多酚類化學物質(zhì)。銀杏葉提取物(GBE,金納多)主要含有黃酮苷和銀杏內(nèi)酯等有效成分,具有清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化、保護血管內(nèi)皮及改善微循環(huán)等作用,臨床上多用來保護心腦血管、改善心肌缺血、緩解心絞痛、降低血清甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇的含量等。目前針對銀杏葉提取物的研究大多數(shù)為其防治缺血再灌注損傷性疾病,但關(guān)于其防治ALI的研究較少[12-16]。因此,本實驗采用尾靜脈注射脂多糖(LPS)的方法復制大鼠ALI模型,旨在觀察銀杏葉提取物對ALI的作用,探討其可能的對抗機制,為臨床抗ALI的藥物治療提供一定的實驗依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1實驗動物、所用試劑和儀器健康雄性SPF級Wistar大鼠24只,體質(zhì)量210~240 g,由河北省實驗動物中心提供,動物合格證編號:1308046。金納多注射液(德國威瑪舒培博士藥廠,規(guī)格:每支5 mL,含GBE 17.5 mg,其中銀杏黃酮苷4.2 mg);脂多糖(LPS,美國Sigma公司);TNF-α檢測試劑盒(北京博奧森生物技術(shù)有限公司);NF-κB抗體及免疫組化試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司);切片機(型號:RM2135,德國Leica公司);光學顯微鏡(日本Olympus公司);其他試劑為國產(chǎn)分析純。

    1.2 動物分組及ALI模型制備領(lǐng)取實驗大鼠后,鼠籠內(nèi)覆蓋潔凈墊料,給予充足的飼料和水,適應性飼養(yǎng)3 d。室內(nèi)環(huán)境:溫度24℃左右,相對濕度40%~60%。將24只大鼠隨機分為3組:對照組(Control)、脂多糖組(LPS)和金納多處理組(GBE)。對照組每只大鼠于尾靜脈注射0.9%氯化鈉溶液,注射劑量為0.1 mL·kg-1;脂多糖組每只大鼠于尾靜脈注射LPS,注射劑量為0.1 mL·kg-1(濃度為50 g·L-1);金納多處理組每只大鼠于尾靜脈注射LPS,注射劑量為0.1 mL·kg-1(濃度為50 g·L-1),并于注射LPS前30 min腹腔注射金納多,注射劑量為50 mg·kg-1。所有大鼠于注射相應溶液3 h后處死取材。

    1.3肺組織病理形態(tài)學觀察大鼠經(jīng)10%水合氯醛(使用劑量為3 mL·kg-1)麻醉后,迅速打開胸腔,取部分右肺下葉組織,常規(guī)甲醛固定、乙醇梯度脫水(70%、90%乙醇各60 min→95%乙醇Ⅰ過夜、95%乙醇Ⅱ 30 min→100%乙醇Ⅰ、 Ⅱ各60 min)、二甲苯透明(二甲苯Ⅰ、Ⅱ各20 min)、石蠟包埋(石蠟Ⅰ 30 min、 石蠟Ⅱ 2.5 h)、切片(厚度5 μm),行普通HE染色,光學顯微鏡下觀察肺組織病理學改變。

    1.4血清中TNF-α含量的檢測大鼠經(jīng)腹主動脈采血,離心(4℃,2 000 r·min-1)10 min后取上清。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測定血清中TNF-α(ng·L-1)的濃度變化。嚴格按照試劑盒說明書操作。

    1.5免疫組織化學染色技術(shù)觀察肺組織中NF-κB的表達變化常規(guī)石蠟包埋切片,脫蠟水化,經(jīng)0.01 mol·L-1PBS清洗→3 %甲醇—過氧化氫,室溫下孵育15 min→0.01 mol·L-1PBS清洗→0.1 mol·L-1枸櫞酸鈉緩沖液(pH 6.0),微波抗原修復,98℃ 15 min→冷卻至室溫后0.01 mol·L-1PBS清洗→正常山羊血清孵育,37℃ 30 min→滴加一抗(1 ∶100),37℃下1.5 h →0.01 mol·L-1PBS清洗→加入生物素標記的二抗及辣根過氧化物酶標記的鏈酶卵白素→0.01 mol·L-1PBS清洗→DAB顯色→梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。光鏡下觀察,以細胞漿或細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號。為了排除非特異性染色,在陰性對照實驗中,用PBS代替一抗或者二抗后,未見陽性染色。每組隨機選取5張切片,每張切片隨機選取5個不重疊的視野,光學顯微鏡下進行觀察,應用圖像分析系統(tǒng)軟件進行平均吸光度(OD值)的測量,以平均OD值代表該張切片NF-κB的表達水平。

    2結(jié)果

    2.1肺組織形態(tài)學觀察Control組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整、清晰,肺泡隔壁薄光滑,均勻一致,肺泡腔內(nèi)無滲出液;LPS組肺間質(zhì)大量炎細胞浸潤,肺泡腔內(nèi)大量紅細胞;GBE組肺組織炎細胞浸潤及肺泡腔出血減少,肺損傷程度減輕,見圖1。

    Control組LPS組GBE組

    圖1各組大鼠肺組織病理形態(tài)學改變(HE×400)

    2.2血清中TNF-α含量檢測與Control組相比,LPS組肺組織中TNF-α含量顯著升高(P<0.05),與LPS組相比,GBE組TNF-α含量明顯降低(P<0.05),但仍高于Control組(P<0.05),見表1。

    2.3肺組織中NF-κB免疫組織化學染色結(jié)果Control組肺組織NF-κB表達的棕黃色陽性信號較弱;LPS組NF-κB陽性信號明顯增強(P<0.05),胞核與胞漿均呈陽性表達;GBE組NF-κB陽性信號減弱,陽性表達的胞核顯著減少(P<0.05,見表1,圖2)。

    表1  TNF-α含量及NF-κB表達檢測結(jié)果

    注:與Control組相比*P<0.05;與LPS組相比#P<0.05。

    Control組 LPS組GBE組

    圖2各組大鼠肺組織NF-κB表達結(jié)果 (×400)

    3討論

    急性肺損傷(acute lung injury, ALI)是由感染、創(chuàng)傷、休克、酸中毒等原因引起的機體過度炎癥反應并導致彌漫性肺實質(zhì)損傷,其特征性病理改變是肺實質(zhì)炎癥反應所導致的彌漫性肺泡上皮和肺微血管內(nèi)皮的嚴重損傷。ALI嚴重階段稱為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS),是臨床重癥監(jiān)護患者主要的死亡原因,病死率達到30%~50%。ALI時,肺泡上皮細胞及毛細血管內(nèi)皮細胞損傷,導致彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫,肺順應性降低、通氣/血流比例失調(diào),臨床上表現(xiàn)為進行性低氧血癥和呼吸窘迫。ALI不僅是單純意義上的肺部疾病,而是一種全身系統(tǒng)性疾病的肺部表現(xiàn),是機體嚴重炎癥反復的結(jié)果,調(diào)控炎癥反應可以防止ALI的發(fā)生發(fā)展,降低死亡率。ALI的發(fā)病包括氧化損傷、中性粒細胞的活化、促炎細胞因子的大量釋放等多種機制,最終產(chǎn)生炎性“瀑布”樣反應,目前專家們對其發(fā)病機制尚未完全進行闡釋[17-22]。本實驗通過大鼠靜脈注射LPS建立ALI模型,20 min后大鼠精神萎靡,反應遲鈍,毛發(fā)聳立,呼吸急促,攝食飲水極少。病理學檢查發(fā)現(xiàn):注射LPS后大鼠肺泡壁大量炎細胞浸潤、肺泡腔出血,提示成功復制了ALI模型;應用金納多注射液后,以上病理改變有效緩解,說明金納多注射液可有效對抗ALI時肺組織的炎癥反應。

    研究發(fā)現(xiàn)TNF-α主要由被激活的巨噬細胞產(chǎn)生,是機體遭受感染或創(chuàng)傷后最早產(chǎn)生的促炎性細胞因子之一,是ALI發(fā)生和發(fā)展的始動因素。TNF-α能夠誘導IL-1、IL-6、IL-8等炎癥因子的分泌,促發(fā)炎癥反應,其水平可反應ARDS患者肺部損傷的嚴重程度。TNF-α對肺有強烈的毒性,能誘導肺內(nèi)皮細胞活化、白細胞遷移、中性粒細胞脫顆粒和毛細血管滲漏,肺泡內(nèi)積聚的水腫液進一步阻礙肺泡細胞的血流灌注和氧氣交換,加重低氧血癥。TNF-α能增加白細胞表面的黏附分子,使淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)增加,巨噬細胞抗原-1(MAC-1)增加;通過檢測ARDS病人和對照組的血清TNF-α含量發(fā)現(xiàn):ARDS患者TNF-α明顯升高,且與肺損傷程度密切相關(guān);通過減少TNF-α的水平,有利于減輕ALI時的炎癥反應[23-25]。本實驗顯示: LPS組較Control組大鼠血清中TNF-α含量增加(P<0.05),證實TNF-α及NF-κB參與了ALI進程;應用金納多處理后,血清中TNF-α含量降低(P<0.05),提示金納多可有效降低TNF-α含量,抑制炎癥反應。

    NF-κB是一類能與多種細胞因子及黏附分子基因啟動子部位的κB位點發(fā)生結(jié)合并增強基因轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì),是炎癥病理過程中多種炎性介質(zhì)表達調(diào)控的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,在啟動、放大和延續(xù)炎癥反應過程中起中樞性調(diào)控作用。當細胞受到氧化、應激等因素的刺激后,NF-κB在細胞核內(nèi)與DNA特定序列結(jié)合,調(diào)節(jié)炎性細胞因子、細胞增殖等基因的轉(zhuǎn)錄,參與體液免疫、固有免疫、炎癥調(diào)節(jié)等,在ALI的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。未受刺激時,NF-κB處于未活化狀態(tài),其與抑制蛋白IκB結(jié)合在一起;當受到LPS等刺激時,IκB發(fā)生磷酸化和降解,NF-IκB與IκB解離,獲得自由的NF-IκB迅速從細胞質(zhì)移位到細胞核,與基因上κB位點發(fā)生特異性結(jié)合,從而促進有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。研究發(fā)現(xiàn),NF-κB調(diào)節(jié)的靶基因蛋白包括細胞因子(IL-1、IL-2、IL-3、IL-6)、趨化因子(IL-8、巨噬細胞趨化蛋白-1、巨噬細胞炎性蛋白-1A)、黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)等。實驗表明:內(nèi)毒素導致,TNF-α等血清促炎細胞因子水平的升高,單核細胞或外周單核細胞及肺泡巨噬細胞NF-κB活性的增強。內(nèi)毒素進入機體后,可激活NF-κB核易位啟動TNF-α表達,釋放的TNF-α與LPS進一步激活效應細胞的NF-κB活化,進而啟動其他細胞因子和黏附分子的炎癥分子的表達,抑制NF-κB的激活可有效降低肺損傷的發(fā)生[26-30]。本實驗顯示: LPS組較Control組大鼠肺組織NF-κB表達增多(P<0.05),證實NF-κB參與了ALI進程;應用金納多處理后,肺組織NF-κB表達減少(P<0.05),提示金納多可有效抑制NF-κB表達,保護肺組織。

    綜上所述,金納多可能通過降低TNF-α的含量、抑制NF-κB的表達發(fā)揮對ALI時肺組織的保護作用。

    參考文獻:

    [1]羅康.脂多糖誘導大鼠急性肺損傷的機制研究進展[J].臨床合理用藥,2014,7(2):166-167.

    [2]郭海峰,岳輝,李鐵靈.p38MAPK抑制劑對重癥胰腺炎大鼠急性肺損傷的保護作用[J]. 安徽醫(yī)藥,2014,18(6):1304-1307.

    [3]杜成,孫思慶,王潤豐,等.瑞芬太尼對兔油酸性急性肺損傷的影響[J].東南大學學報(醫(yī)學版),2015,34(1):40-43.

    [4]Matthay MA,Zemans RL.The acute respiratory distress syndrome:pathogenesis and treatment[J].Annu Rev Pathol,2011,6:147-163.

    [5]曹征,朱健,陸平,等.HSP70與TLR-NF-κB信號途徑在急性肺損傷大鼠發(fā)病機制中作用的實驗研究[J].臨床與病理雜志,2015,35(3):406-411.

    [6]金發(fā)光.急性肺損傷的診治研究現(xiàn)狀及進展[J/CD].中華肺部疾病雜志(電子版),2013,6(1):1-3.

    [7]張建初,白明,吳研雯,等.吸入一氧化氮對急性肺損傷大鼠肺組織炎癥的影響[J].中國呼吸與危重監(jiān)護雜志,2010,9(2):150-153.

    [8]范玉麗,盛凈,朱健,等.L-精氨酸對大鼠脂多糖致急性肺損傷的影響及機理[J].臨床與病理雜志,2015,35(4):642-647.

    [9]吳春艷,張智,劉子宸.葛根素對油酸致急性肺損傷大鼠的保護作用研究[J].中國醫(yī)藥,2013,8(12):1700-1702.

    [10] 李君,王陽,胡孔友,等.PDTC對大鼠急性肺損傷腫瘤壞死因子-αB表達的影響[J].遼寧醫(yī)學院學報,2013,34(4):1-3.

    [11] 張智,高磊,丁春華,等.褪黑素對油酸致大鼠急性肺損傷的防護作用及其機制研究[J].中國應用生理學雜志,2011,27(4):480-483.

    [12] 李靜玲,林小鳳,馮鵬,等.銀杏葉提取物保護心肌缺血再灌注損傷的研究進展[J].臨床合理用藥,2013,6(9):180-181.

    [13] 宋文秀,盧飛艷,王艷萍,等.銀杏葉對新生鼠缺氧缺血性腦損傷后Nestin蛋白表達的影響[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志,2014,20(12):1635-1636.

    [14] 鄭曉鑄,劉凱,夏燕飛,等.銀杏葉提取物在體外循環(huán)心內(nèi)直視手術(shù)中對心肌缺血再灌注損傷的保護作用[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2010(28):26-27.

    [15] 秦智剛,艾玲,羅愛林,等.右美托咪定對體外循環(huán)下心肌缺血再灌注損傷的保護效應[J].華中科技大學學報(醫(yī)學版),2013,42(5):551-554.

    [16] 鄧永超,劉煜敏.銀杏葉提取物后處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護作用的研究[J].卒中與神經(jīng)疾病,2014,21(4):219-221.

    [17] 張彥芬,唐思文,王海榮,等.連花清瘟膠囊對急性肺損傷小鼠炎癥因子的影響[J].食品與藥品,2015,17(2):96-99.

    [18] 劉海林,錢燕寧.丙泊酚聯(lián)合烏司他丁對內(nèi)毒素所致大鼠急性肺損傷的保護作用[J].中國應用生理學雜志,2013,29(1):56-62.

    [19] 龔藝,賴曉霏.IL-27在小鼠CLP-急性肺損傷模型中的作用[J].免疫學雜志,2015,31(6):467-475.

    [20] 趙剛,趙玉蓮,胡海.大量維生素C輔助金納多對小鼠急性肺損傷的保護作用[J].包頭醫(yī)學院學報,2015,31(4):8-12.

    [21] 張榮,彭單伊,夏耘秋,等.脂多糖誘導急性肺損傷小鼠中E-cadherin和Brg1的表達及意義[J].免疫學雜志,2015,31(5):391-395.

    [22] 戴麗,端莉梅,姚志清.木犀草素對脂多糖誘導下的小鼠急性肺損傷的保護作用及其機制研究[J].河北醫(yī)藥,2015,37(3):339-342.

    [23] 陳宇清,榮令,周新.三七總皂苷對急性肺損傷大鼠血清和支氣管肺泡灌洗液腫瘤壞死因子α、白介素6和白介素10水平的影響[J].實用心腦肺血管病雜志,2013,21(2):89-92.

    [24] 姜遠旭,徐世元,張雪萍,等.右美托咪定聯(lián)合烏司他丁減輕脂多糖誘導的大鼠急性肺損傷[J].中國病理生理雜志,2014,30(1):96-101.

    [25] 徐永芳,陳剛,徐長青,等.穿心蓮內(nèi)酯對內(nèi)毒素誘導急性肺損傷大鼠炎癥介質(zhì)的影響[J].中華中醫(yī)藥學刊,2015,33(1):159-161.

    [26] 石計朋,閆建國,韓金芬,等.ω-3PUFAs對LPS誘導急性肺損傷大鼠前炎癥因子TNF-αB、IL-1β、IL-6的影響[J].中國兒童保健雜志,2014,22(1):35-40.

    [27] Akira S,Takeda K.Toll-like receptor signalling[J].Nat Rev Immunol,2004,4(7):499-511.

    [28] 李錦師,白建文.Toll受體與急性肺損傷研究進展[J].上海交通大學學報(醫(yī)學版),2007,27(7):894-897.

    [29] 常秀娟,張帥,江益平,等.從細胞因子風暴探討熱毒寧注射液抗大鼠急性肺損傷作用機制[J].中草藥,2015,46(2):236-239.

    [30] 白靜慧,朱相宇,鄭麗媛,等.槲皮素對膿毒癥急性肺損傷大鼠肺組織NF-κB表達的影響[J].解剖科學進展,2014,20(1):31-34.

    基金項目:邢臺市科學技術(shù)研究發(fā)展計劃自籌經(jīng)費項目(No 2013ZC179)

    通信作者:張獻彩,女,副教授,研究方向:糖尿病消化系統(tǒng)癥狀的研究,E-mail:zhangxiancai2004@163.com

    doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2015.12.011

    (收稿日期:2015-07-29,修回日期:2015-09-07)

    Effect of Ginaton injection on the expression of NF-κB
    in rats with acute lung injury induced by LPS

    LIU Zi-Chen1, WU Di2,WANG Gang1,et al

    (1.XingtaiMedicalCollege;2.TheThirdHospitalofXingtai,Xingtai,Hebei054000,China)

    Abstract:Objective To explore the effect of Ginaton injection on the expression of NF-κB in rats with acute lung injury. Methods Twenty-four male Wistar rats were randomized into three groups:control group, LPS group and GBE group. Model of acute lung injury was established by tail-vein injection with LPS. Morphological changes of lung tissues were observed under light microscope. The content of TNF-α in serum and the expression of NF-κB in lung tissues were detected in each group. Results Compared with control group, the content of TNF-α in serum increased (P<0.05) and the expression of NF-κB in lung tissues increased (P<0.05) in LPS group; Compared with LPS group, the content of TNF-α in serum decreased (P<0.05) and the expression of NF-κB in lung tissues decreased (P<0.05) in GBE group. Conclusion Ginaton injection could reduce inflammation reaction in lung tissues during ALI, the mechanism of which was probably related to the decrease in the content of TNF-α and the expression of NF-κB.

    Key words:acute lung injury;ginaton;LPS;TNF-α;NF-κB

    猜你喜歡
    核因子急性肺損傷腫瘤壞死因子
    V5對胸部腫瘤放化療急性肺損傷的預測價值探討
    宮腔鏡治療慢性宮頸炎患者對改善hs—CRP、TNF、IL水平的作用
    慢性心力衰竭患者治療前后血清CA125、TNF—α水平變化及其與LVEF的關(guān)系探究
    妊娠期糖尿病與腫瘤壞死因子—α啟動子基因多態(tài)性相關(guān)性的研究
    脂氧素A4及其受體對急性肺損傷Na+—K+—ATP酶的影響
    雙水平氣道正壓通氣治療社區(qū)獲得性肺炎所致急性肺損傷效果觀察
    消銀湯對尋常型銀屑病血熱證患者血清TNF—α的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 13:01:29
    核因子—κBp65對肝門靜脈海綿樣變性大鼠門靜脈及其周圍組織中血管內(nèi)皮生長因子、腫瘤壞死因子—α、內(nèi)皮素表達的影響
    急性顱腦損傷患兒血清HMGB1的變化及其臨床意義
    瑞舒伐他汀對肥胖大鼠心肌NF—κB表達的影響
    老汉色∧v一级毛片| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日韩av在线大香蕉| 国产又色又爽无遮挡免费看| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产真人三级小视频在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 午夜老司机福利片| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩欧美免费精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 男人舔奶头视频| 一级毛片女人18水好多| 欧美成狂野欧美在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲成人久久性| 中文字幕av电影在线播放| 亚洲国产中文字幕在线视频| 无人区码免费观看不卡| 国产高清有码在线观看视频 | netflix在线观看网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久香蕉激情| 麻豆国产av国片精品| 男人的好看免费观看在线视频 | 精华霜和精华液先用哪个| 国产午夜福利久久久久久| 国产精品亚洲一级av第二区| 黄色成人免费大全| 啦啦啦韩国在线观看视频| 精品久久久久久成人av| av福利片在线| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日韩欧美三级三区| 亚洲av美国av| 88av欧美| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 麻豆一二三区av精品| 美女扒开内裤让男人捅视频| 精品欧美一区二区三区在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线观看日韩欧美| 黄片大片在线免费观看| 1024手机看黄色片| avwww免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 制服人妻中文乱码| 国产精品 欧美亚洲| 美女扒开内裤让男人捅视频| e午夜精品久久久久久久| 老司机午夜十八禁免费视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 免费在线观看成人毛片| 真人一进一出gif抽搐免费| tocl精华| 久久性视频一级片| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美在线一区亚洲| 中亚洲国语对白在线视频| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲人成77777在线视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲激情在线av| 99热只有精品国产| 久久精品影院6| 宅男免费午夜| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久精品国产清高在天天线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| av天堂在线播放| 亚洲美女黄片视频| 国产精品久久久av美女十八| 久热这里只有精品99| 丰满的人妻完整版| 欧美黑人欧美精品刺激| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲中文av在线| 久久久精品欧美日韩精品| or卡值多少钱| 亚洲精品粉嫩美女一区| a级毛片a级免费在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 99国产综合亚洲精品| 大型av网站在线播放| 日韩大码丰满熟妇| cao死你这个sao货| 1024香蕉在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 婷婷亚洲欧美| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产高清激情床上av| 国产精品亚洲美女久久久| 国产精品电影一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 国产亚洲精品av在线| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产人伦9x9x在线观看| 九色国产91popny在线| 黄片播放在线免费| 看免费av毛片| 丁香六月欧美| av电影中文网址| 麻豆一二三区av精品| 在线国产一区二区在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 色播在线永久视频| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产精品亚洲美女久久久| 日韩国内少妇激情av| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产免费男女视频| 麻豆一二三区av精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 男女那种视频在线观看| 黄片播放在线免费| 日日夜夜操网爽| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美成人午夜精品| 动漫黄色视频在线观看| 欧美性长视频在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲熟女毛片儿| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成年版毛片免费区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 大型黄色视频在线免费观看| 大型黄色视频在线免费观看| 午夜免费成人在线视频| 搡老岳熟女国产| 精品久久久久久,| 免费av毛片视频| 99国产综合亚洲精品| 俺也久久电影网| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 天堂影院成人在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久伊人香网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 丁香六月欧美| 色老头精品视频在线观看| 欧美三级亚洲精品| 18禁观看日本| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 免费av毛片视频| 亚洲无线在线观看| 国产成人精品无人区| 禁无遮挡网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美国产日韩亚洲一区| 老司机福利观看| 91大片在线观看| 国产亚洲精品一区二区www| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久亚洲精品不卡| av在线天堂中文字幕| 俺也久久电影网| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产午夜福利久久久久久| 免费看a级黄色片| 一a级毛片在线观看| 黄片小视频在线播放| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品国产乱码久久久久久男人| 在线观看午夜福利视频| 国产国语露脸激情在线看| 校园春色视频在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 9191精品国产免费久久| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲电影在线观看av| 成人国产一区最新在线观看| 午夜a级毛片| 一区二区日韩欧美中文字幕| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 久久久久久久久久黄片| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品 国内视频| av视频在线观看入口| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| √禁漫天堂资源中文www| 麻豆一二三区av精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲专区国产一区二区| 午夜福利在线在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久久国产精品麻豆| cao死你这个sao货| 国产欧美日韩一区二区精品| 午夜久久久在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 麻豆成人av在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 丰满的人妻完整版| 久久久国产精品麻豆| 亚洲五月婷婷丁香| 国产单亲对白刺激| 欧美一级a爱片免费观看看 | 亚洲国产精品久久男人天堂| 色播在线永久视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲国产欧洲综合997久久, | 美女扒开内裤让男人捅视频| 我的亚洲天堂| 亚洲专区国产一区二区| 国产在线观看jvid| 88av欧美| 午夜福利在线观看吧| 免费看日本二区| 精品国产乱子伦一区二区三区| 老司机深夜福利视频在线观看| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲全国av大片| 国产精品二区激情视频| 亚洲黑人精品在线| 老司机福利观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品影院久久| 国产免费av片在线观看野外av| 免费高清在线观看日韩| 欧美日韩一级在线毛片| 精品久久久久久久久久久久久 | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 99精品欧美一区二区三区四区| 夜夜爽天天搞| 女人被狂操c到高潮| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久香蕉精品热| 亚洲片人在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 91老司机精品| 岛国在线观看网站| 搡老岳熟女国产| av在线天堂中文字幕| 日韩有码中文字幕| 久久久久久久久免费视频了| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 在线视频色国产色| 国产精品九九99| 中文字幕人妻熟女乱码| 精品第一国产精品| 黄色成人免费大全| 国产欧美日韩一区二区三| 国产成人精品无人区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 一级毛片精品| 午夜福利高清视频| 国产黄a三级三级三级人| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产高清videossex| 国产精品乱码一区二三区的特点| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精品二区激情视频| 久9热在线精品视频| 色综合婷婷激情| 日韩欧美国产一区二区入口| 一个人免费在线观看的高清视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产熟女xx| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲中文av在线| 热99re8久久精品国产| 免费观看精品视频网站| 亚洲精品国产区一区二| 免费电影在线观看免费观看| 午夜福利在线观看吧| 午夜久久久久精精品| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 很黄的视频免费| 中文资源天堂在线| 精品人妻1区二区| 欧美激情高清一区二区三区| 国产单亲对白刺激| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美日本亚洲视频在线播放| 叶爱在线成人免费视频播放| 老司机午夜十八禁免费视频| 中文字幕高清在线视频| 亚洲全国av大片| 90打野战视频偷拍视频| 国产成人av教育| 热re99久久国产66热| 亚洲真实伦在线观看| 香蕉丝袜av| 欧美一级毛片孕妇| 99国产精品一区二区三区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| a级毛片在线看网站| 亚洲第一电影网av| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久久国内视频| 久久热在线av| 校园春色视频在线观看| 欧美日本视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产伦在线观看视频一区| 美女大奶头视频| av视频在线观看入口| 午夜久久久在线观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 两个人免费观看高清视频| 色综合站精品国产| 日韩有码中文字幕| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 美国免费a级毛片| 美女午夜性视频免费| 又大又爽又粗| xxx96com| 999久久久国产精品视频| 嫩草影院精品99| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产高清有码在线观看视频 | 国产精品爽爽va在线观看网站 | 精品国产乱子伦一区二区三区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久久久久免费高清国产稀缺| 悠悠久久av| 亚洲电影在线观看av| 国产精品av久久久久免费| or卡值多少钱| 操出白浆在线播放| 国产在线精品亚洲第一网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产一卡二卡三卡精品| 男人的好看免费观看在线视频 | 精品日产1卡2卡| 欧美日韩精品网址| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人av教育| 国产伦在线观看视频一区| 一级a爱片免费观看的视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 99热6这里只有精品| 精品卡一卡二卡四卡免费| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 中文资源天堂在线| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 91成人精品电影| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲激情在线av| 最近在线观看免费完整版| 看黄色毛片网站| 国产真人三级小视频在线观看| 日本 欧美在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 国产伦在线观看视频一区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 午夜免费激情av| 色播在线永久视频| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美激情高清一区二区三区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 在线观看www视频免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产精品av久久久久免费| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产精品综合久久久久久久免费| 99国产综合亚洲精品| svipshipincom国产片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 日本免费a在线| 精品第一国产精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产1区2区3区精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 亚洲男人的天堂狠狠| 好男人电影高清在线观看| 嫩草影院精品99| 久久久久精品国产欧美久久久| 18禁观看日本| 成人午夜高清在线视频 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美乱色亚洲激情| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲人成电影免费在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 麻豆国产av国片精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 在线免费观看的www视频| 狂野欧美激情性xxxx| 麻豆久久精品国产亚洲av| av在线天堂中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 神马国产精品三级电影在线观看 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 免费观看精品视频网站| www日本黄色视频网| 大香蕉久久成人网| 亚洲天堂国产精品一区在线| 精品人妻1区二区| 成在线人永久免费视频| 久久人妻av系列| 国产三级在线视频| 午夜福利视频1000在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 88av欧美| 久久午夜综合久久蜜桃| 午夜成年电影在线免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产99白浆流出| 久久中文字幕一级| 一级毛片女人18水好多| 丰满的人妻完整版| www国产在线视频色| 12—13女人毛片做爰片一| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美日本视频| 波多野结衣高清作品| 亚洲精品国产一区二区精华液| 12—13女人毛片做爰片一| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久人妻av系列| av在线播放免费不卡| 在线看三级毛片| 999精品在线视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产私拍福利视频在线观看| 在线看三级毛片| 亚洲国产精品合色在线| 淫秽高清视频在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 韩国精品一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| www日本在线高清视频| 久久久久久国产a免费观看| 天堂影院成人在线观看| 精品久久久久久,| 在线观看日韩欧美| 中文亚洲av片在线观看爽| 丝袜美腿诱惑在线| www.精华液| 午夜免费成人在线视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 午夜激情av网站| 国产精品av久久久久免费| 可以在线观看毛片的网站| 宅男免费午夜| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美乱码精品一区二区三区| 哪里可以看免费的av片| 精品久久久久久久久久久久久 | 男女之事视频高清在线观看| 久久青草综合色| 国产91精品成人一区二区三区| 人妻久久中文字幕网| 男女午夜视频在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美日韩黄片免| 在线观看午夜福利视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久久久午夜电影| 黄片播放在线免费| 国产一卡二卡三卡精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 成人国产一区最新在线观看| 久9热在线精品视频| 精品国产亚洲在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲一区二区三区不卡视频| 女性生殖器流出的白浆| 欧美久久黑人一区二区| 日韩欧美一区视频在线观看| 中出人妻视频一区二区| 男女午夜视频在线观看| 好男人在线观看高清免费视频 | 亚洲国产精品成人综合色| 日韩国内少妇激情av| 日韩欧美免费精品| av电影中文网址| 免费高清在线观看日韩| 麻豆一二三区av精品| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲第一青青草原| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲自拍偷在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲一区二区三区色噜噜| 午夜免费激情av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 午夜福利在线观看吧| 婷婷精品国产亚洲av| 日本 欧美在线| 国语自产精品视频在线第100页| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久中文字幕人妻熟女| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品九九99| 一级毛片高清免费大全| 色综合站精品国产| 国产激情欧美一区二区| 日韩三级视频一区二区三区| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品二区激情视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产一卡二卡三卡精品| 级片在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久热在线av| 国产成年人精品一区二区| 最新美女视频免费是黄的| 国产一卡二卡三卡精品| 九色国产91popny在线| 岛国视频午夜一区免费看| 男女那种视频在线观看| 亚洲,欧美精品.| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久天堂一区二区三区四区| 久久久久精品国产欧美久久久| 香蕉av资源在线| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲第一青青草原| 制服人妻中文乱码| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日本三级黄在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲,欧美精品.| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 啦啦啦 在线观看视频| 一区二区三区国产精品乱码| 久久久久久国产a免费观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲人成77777在线视频| 精品高清国产在线一区| 黄色视频,在线免费观看| 99国产精品99久久久久| 国产亚洲欧美在线一区二区| 日韩欧美国产在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 在线看三级毛片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 好男人在线观看高清免费视频 | 丝袜美腿诱惑在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久九九热精品免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 99riav亚洲国产免费| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 国产高清videossex| 免费在线观看完整版高清| 看免费av毛片| 免费高清在线观看日韩| 国产免费男女视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产伦一二天堂av在线观看| 日韩av在线大香蕉| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美成狂野欧美在线观看| ponron亚洲| 国产亚洲欧美98| 男女下面进入的视频免费午夜 | 日本成人三级电影网站| 欧美成狂野欧美在线观看| 18禁观看日本| 久久这里只有精品19| 啦啦啦免费观看视频1| 国产高清videossex| 哪里可以看免费的av片|