結(jié)腸腺癌患者術(shù)后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達(dá)及意義

屈中玉 (南陽市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科一病區(qū)，河南 南陽 473009)

結(jié)腸腺癌患者術(shù)后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達(dá)及意義

屈中玉 (南陽市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科一病區(qū)，河南 南陽 473009)

目的 應(yīng)用免疫組化方法檢測結(jié)腸腺癌中NADPH:醌氧化還原酶(NQO)-1、組織蛋白酶(Cath)-D和Ki-67增殖指數(shù)(Ki-67)的表達(dá)，分析其關(guān)系及臨床意義。方法 經(jīng)病理確診的124例結(jié)腸腺癌術(shù)后組織及臨床資料作為觀察組，80例上皮內(nèi)瘤變的結(jié)腸黏膜組織作為對照組，80例正常結(jié)腸黏膜組織作為正常對照組，應(yīng)用免疫組化方法檢測三組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達(dá)。結(jié)果 三組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達(dá)的陽性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤深度、TNM分期、脈管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。相關(guān)性分析顯示NQO-1和Ki-67、Cath-D和Ki-67的表達(dá)均具有正相關(guān)性。結(jié)論 結(jié)腸腺癌術(shù)后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67均高表達(dá)，NQO-1和Cath-D均與Ki-67的表達(dá)具有協(xié)同作用，對促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和增殖有一定作用。

結(jié)腸腺癌;NQO-1;Cath-D;Ki-67;免疫組化

結(jié)腸腺癌病變形成及發(fā)展過程中多種蛋白表達(dá)失調(diào)，并對腫瘤的微環(huán)境有重要影響。NADPH:醌氧化還原酶(NQO)-1是一種黃素酶，在多種腫瘤中高表達(dá)，也是促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的重要蛋白〔1，2〕。組織蛋白酶(Cath)-D是與腫瘤生長、增殖和侵襲相關(guān)的蛋白，在多種腫瘤中高表達(dá)，可以加速腫瘤惡變和浸潤，同時(shí)參與胚胎發(fā)育、腫瘤形成及血管生成過程〔3，4〕。Ki-67增殖指數(shù)與腫瘤細(xì)胞增殖狀態(tài)相關(guān)，標(biāo)記腫瘤細(xì)胞增殖的特異性強(qiáng)〔5〕。本文應(yīng)用免疫組化方法檢測結(jié)腸腺癌術(shù)后組織中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達(dá)，探討其關(guān)系及臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2012年12月在我院行結(jié)腸腺癌根治的手術(shù)患者共124例作為觀察組，統(tǒng)計(jì)患者臨床資料并留取術(shù)后的蠟塊組織。完全符合WHO中的具體診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男70例，女54例;年齡54～78歲，平均67.6歲。高分化60例，中分化30例，低分化34例。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。80例上皮內(nèi)瘤變的結(jié)腸黏膜組織作為對照組，其中男40例，女40例，年齡56～77歲，平均66.8歲。選取觀察組中距離腫瘤邊緣＞3 cm的正常結(jié)腸黏膜組織80例作為對照組，其中男41例，女39例;年齡55～76歲，平均66.5歲。三組一般資料無明顯差別。

1.2 NQO-1、Cath-D和 Ki-67表達(dá)的檢測 NQO-1、Cath-D和Ki-67抗體均為濃縮液，依不同比例進(jìn)行稀釋后應(yīng)用免疫組化SP法、DAB染色進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，并設(shè)陽性對照和陰性對照。選擇最理想的配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。正式實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化SP法。嚴(yán)格按說明書操作，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 NQO-1、Cath-D和Ki-67陽性的判定方法 NQO-1、Cath-D的陽性表達(dá)均位于細(xì)胞質(zhì)中(少數(shù)表達(dá)于細(xì)胞核中的均不計(jì)數(shù))，Ki-67陽性表達(dá)均位于細(xì)胞核中，以染成棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)10個(gè)400倍視野，取陽性細(xì)胞的平均值，NQO-1、Cath-D以陽性率≥5%為陽性，以陽性率＜5%為陰性。Ki-67以陽性率≥25%為陽性，以陽性率＜25%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 3 組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達(dá)陽性率的比較 正常對照組、對照組和觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達(dá)的陽性率有增高趨勢。見表1。

2.2 觀察組不同臨床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達(dá)陽性率的比較 觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤深度、TNM分期、脈管浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。見表2。

表1NQO-1、Cath-D和Ki-67在3組中表達(dá)的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中NQO-1、Cath-D和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性 觀察組中 NQO-1和 Ki-67(r=0.49，P=0.011 3)、Cath-D 和 Ki-67(r=0.48，P=0.020 9)的表達(dá)具有正相關(guān)性，而NQO-1和Cath-D的表達(dá)未見明顯相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

結(jié)腸腺癌是一種上皮性腫瘤，居男性腫瘤的第四位，女性腫瘤的第三位，其發(fā)病涉及多種因素，如遺傳易感性、基因突變、增生失調(diào)等。多種腫瘤相關(guān)基因異常表達(dá)是促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的重要因素。NQO-1蛋白是一種胞質(zhì)黃素酶，其基因定位于16q22染色體，在正常組織中有微量表達(dá)〔6，7〕。有研究認(rèn)為不同NQO-1基因亞型編碼的酶類呈現(xiàn)不同的活性〔8〕。如由TT純合子誘導(dǎo)的NQO-1活性失調(diào)，可以引起肝細(xì)胞對外源性致腫瘤物質(zhì)的解毒功能下降〔9〕。也有研究則認(rèn)為NQO-1可以作為一個(gè)氧化應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，對惡性腫瘤的進(jìn)展起一定的調(diào)節(jié)作用〔8〕。李琰等〔10〕認(rèn)為 NQO-1的表達(dá)變化，可以使機(jī)體對環(huán)境致癌因素的解毒功能降低，使細(xì)胞易受到氧化損傷，增加對化學(xué)致癌物引起腫瘤的易感性。Cath-D是一種溶酶體天冬氨酸蛋白酶，參與腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移〔11，12〕，Cath-D還可以作為雌激素調(diào)節(jié)的溶酶體蛋白酶〔13〕，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和細(xì)胞間的黏附作用〔14，15〕。NQO-1、Cath-D 均可能對腫瘤的惡變有一定影響。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示NQO-1、Cath-D、Ki-67三種蛋白在腫瘤發(fā)生過程中起重要的促進(jìn)作用，NQO-1、Cath-D可能通過促進(jìn)Ki67增殖發(fā)揮重要的促進(jìn)腫瘤進(jìn)展作用。三種蛋白參與腫瘤由幼稚到成熟的內(nèi)在過程，也顯示出三種蛋白在細(xì)胞惡變起始過程中起的作用。三種蛋白參與腫瘤的生長及侵襲全過程，即當(dāng)NQO-1、Cath-D和KI-67高表達(dá)時(shí)，引起腫瘤細(xì)胞呈蟹足樣生長，對周圍的破壞能力增強(qiáng)，對局部微環(huán)境的影響大。三種蛋白參與腫瘤的進(jìn)展，尤其是參與腫瘤的淋巴道播散和遠(yuǎn)處播散的過程中。TNM分期是臨床判斷腫瘤生物學(xué)行為和預(yù)后的重要指標(biāo)，因此聯(lián)合檢測NQO-1、Cath-D和Ki-67高表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤的不良預(yù)后，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將關(guān)注患者生存，以證實(shí)此觀點(diǎn)。NQO-1、Cath-D在對腫瘤影響過程中，全程參與了細(xì)胞的增殖過程，尤其是失控性增殖反應(yīng)過程〔16，17〕。近來也有研究顯示NQO-1激活后，凋亡信號(hào)傳導(dǎo)受到影響，正常細(xì)胞的不斷增生繁殖，而凋亡受到阻滯，細(xì)胞逐漸惡變〔18〕。因此NQO-1也可能是調(diào)節(jié)凋亡的重要因子。有學(xué)者認(rèn)為NQO-1具有癌基因的許多特征，如誘導(dǎo)非錨定依賴性細(xì)胞周期進(jìn)展等生物學(xué)行為過程〔19〕。

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R735.3

A

1005-9202(2015)09-2435-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.057

屈中玉(1972-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事惡性腫瘤基因靶向及綜合治療研究。

〔2013-11-21修回〕

(編輯 苑云杰)