前列地爾對(duì)老年糖尿病腎病患者氧化應(yīng)激及免疫功能的影響

田 勇 王俊宏 (平頂山市第一人民醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科，河南 平頂山 467000)

前列地爾對(duì)老年糖尿病腎病患者氧化應(yīng)激及免疫功能的影響

田 勇 王俊宏 (平頂山市第一人民醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科，河南 平頂山 467000)

目的 探討前列地爾注射液對(duì)老年糖尿病腎病(DN)患者氧化應(yīng)激及免疫功能的影響。方法 選擇80例老年DN患者隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，兩組均給予西醫(yī)常規(guī)治療，治療組加用前列地爾注射液治療2 w，對(duì)照組加用安慰劑。兩組檢測(cè)治療前后空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率(UAER)、尿微量白蛋白(mALB)及血β2微球蛋白(β2-MG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、殺傷性T細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞、早期活化T細(xì)胞、總淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、B細(xì)胞。結(jié)果 前列地爾注射液干預(yù)治療2 w后，治療組患者UAER、mALB、β2-MG、MDA、ROS、早期活化T細(xì)胞和總淋巴細(xì)胞水平較對(duì)照組降低(P＜0.05)，SOD、CD4+、CD4+/CD8+水平較對(duì)照組升高(P＜0.05)，余指標(biāo)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 前列地爾注射液具有調(diào)節(jié)老年DN患者氧化應(yīng)激及免疫功能的作用，能改善患者腎功能。

前列地爾;糖尿病腎病;氧化應(yīng)激;免疫功能

糖尿病腎病(DN)是一種常見的糖尿病慢性并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致氮質(zhì)血癥、尿毒癥，嚴(yán)重危害患者的生活質(zhì)量。目前具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚，但多數(shù)認(rèn)為其發(fā)生與脂肪、內(nèi)分泌、氧化應(yīng)激、免疫系統(tǒng)等功能障礙有關(guān)〔1〕。其中氧化應(yīng)激與DN的發(fā)展有著密切的聯(lián)系，不僅使得氧化代謝終產(chǎn)物腎臟活性氧(ROS)增多，而且同時(shí)也影響著機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)。2型糖尿病作為一種自然免疫和低度炎癥性疾病，患者自身免疫功能低下也導(dǎo)致免疫應(yīng)答異常，本研究旨在通過檢測(cè)使用前列地爾注射液治療的老年DN患者脂肪、內(nèi)分泌、氧化應(yīng)激、免疫系統(tǒng)等指標(biāo)水平的變化，探討前列地爾對(duì)DN患者的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年4月至2013年1月在我院內(nèi)分泌科住院并診斷為DN患者80例，男44例，女36例，按入院順序隨機(jī)分為對(duì)照組和前列地爾組，對(duì)照組40例，男27例，女13例，年齡39～68〔平均(57.2±10.5)〕歲，平均病程為(8.9±5.7)年。前列地爾組40例，男26例，女14例，年齡42～69〔平均(60.4±8.5)歲〕，平均病程為(8.9±5.7)年。排除標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)尿檢、腎穿刺活檢等排除其他因素引起的腎臟病患者;近期使用抗氧化劑等藥物治療者;反復(fù)尿路感染者;有嚴(yán)重心、肝、肺疾病者。該研究已經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過，兩組患者的性別、年齡及DN病程和體質(zhì)量指數(shù)方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 對(duì)照組患者給予常規(guī)控制蛋白量飲食、穩(wěn)定血糖等對(duì)癥治療，前列地爾組在對(duì)照組治療基礎(chǔ)上加用前列地爾20 μg溶解在100 ml生理鹽水中靜脈滴注，1次/d，療程14 d。1.2.2 生化指標(biāo)檢測(cè) 所有入選者在治療前、治療1個(gè)療程后禁食12 h后次晨采集肘靜脈血，采用AU5400全自動(dòng)生化分析儀，用免疫比濁法、酶學(xué)法等技術(shù)測(cè)定兩組患者空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率(UAER)。采用放射免疫法測(cè)定尿微量白蛋白(mALB)及血β2微球蛋白(β2-MG)。

1.2.3 氧化指標(biāo)檢測(cè) 空腹取靜脈血2 ml，4 000 r/min離心10 min，取上清液置于－20℃ 冰箱內(nèi)統(tǒng)一保存待測(cè)。采用分光光度計(jì)法檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)活性。采用比色法測(cè)定血清ROS，試劑盒均由北京中生生物科技股份有限公司提供，按試劑說明書操作。

1.2.4 免疫狀態(tài)指標(biāo)檢測(cè) 空腹取靜脈血2 ml，采用FC500流式細(xì)胞儀及配套試劑，按試劑說明書操作，檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、殺傷性 T 細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞、早期活化T細(xì)胞、總淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、B細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、t檢驗(yàn);采用Spearman等級(jí)相關(guān)性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組治療前后常規(guī)指標(biāo)比較 治療前兩組患者FPG、HbA1c、TC、TG、血肌酐、尿素氮、UAER、mALB 和 β2-MG 水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療后前列地爾組患者 UAER、mALB和β2-MG水平與對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05)，F(xiàn)PG、HbA1c、TC、TG、血肌酐和尿素氮水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

2.2 各組治療前后免疫功能指標(biāo)比較 治療前兩組患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、殺傷性、抑制性、輔助性 T 細(xì)胞、早期活化T細(xì)胞、總淋巴細(xì)胞和B細(xì)胞水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，治療后前列地爾組患者 CD4+、CD4+/CD8+、早期活化T細(xì)胞和總淋巴細(xì)胞水平與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，CD8+、殺傷性、抑制性、輔助性T細(xì)胞和B細(xì)胞水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

2.3 各組治療前后氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 治療前兩組患者M(jìn)DA、SOD和ROS水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，治療后前列地爾組患者M(jìn)DA、SOD和ROS水平與對(duì)照組比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表1 兩組患者治療前后一般指標(biāo)比較(±s，n=40)

表1 兩組患者治療前后一般指標(biāo)比較(±s，n=40)

與對(duì)照組治療后比較:1)P＜0.05，下表同

組別FPG(mmol/L)HbA1c(%)TC(mmol/L)TG(mmol/L)血肌酐(μmol/L)尿素氮(mmol/L)UAER(mg/min)mALB(mg/L)β2-MG(mg/L)8 ±1.5 82.3±67.1 50.2±4.1 1.6±0.2治療后 7.1±1.2 7.2±2.7 5.1 ±1.2 1.6 ±0.5 79.9 ±13.0 5.9 ±1.4 62.3±47.8 47.4±4.1 1.4±0.2前列地爾組 治療前 7.1±1.10 7.1±2.4 5.4±1.3 1.7±0.5 84.5±14.3 6.0±1.5 83.4±71.9 49.3±5.1 1.6±0.2治療后 7.1±1.0 7.2±2.6 5.2 ±1.4 1.6 ±0.4 78.4 ±14 6.0 ±1.9 42.5±37.11)38.4±3.21) 0.8±0.11)對(duì)照組 治療前 7.2±1.1 7.1±2.5 5.3±1.3 1.8±0.4 83.8±13.2 5.

表2 兩組患者治療前后免疫功能指標(biāo)比較(±s，n=40)

表2 兩組患者治療前后免疫功能指標(biāo)比較(±s，n=40)

指標(biāo) CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+殺傷性T細(xì)胞抑制性T細(xì)胞輔助性T細(xì)胞早期活化T細(xì)胞總淋巴細(xì)胞B細(xì)胞(%)45.0±13.5 45.8±12.7 28.5±9.7 8.1±4.8治療后 28.5±4.9 27.2±7.3 1.1±0.4 15.6 ±5.2 13.7 ±6.4 45.2±14.4 44.9±12.8 27.3±8.4 10.4±5.2前列地爾組 治療前 25.3±4.8 24.4±7.6 1.0±0.4 15.3±5.2 13.6 ±6.3 45.1±13.7 45.2±12.4 28.7±9.2 8.2±4.2治療后 38.2±5.41) 27.4±7.8 1.4±0.61) 16.0±7.2 14.3±6.4 45.2±13.9 43.2±13.11)24.6±7.31)對(duì)照組 治療前 25.1±4.7 24.5±6.8 1.0±0.4 15.2±5.1 13.4±7.2 9.8±4.8

表3 兩組患者治療前后氧化應(yīng)激指標(biāo)比較(±s，n=40)

表3 兩組患者治療前后氧化應(yīng)激指標(biāo)比較(±s，n=40)

指標(biāo) MDA(mmol/ml)SOD(μg/ml) ROS(U/ml)14.9±0.4 94.9±1.6 492.5±59.2治療后 34.2±0.7 62.7±2.4 458.7±57.9前列地爾組 治療前 14.6±0.5 94.7±1.5 488.7±61.5治療后 32.5±0.71) 74.3±2.51) 302.7±50.11)對(duì)照組 治療前

2.4 相關(guān)性分析 在前列地爾組中CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、殺傷性、抑制性、輔助性T細(xì)胞、早期活化T細(xì)胞和B細(xì)胞表達(dá)水平經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果顯示，CD4+表達(dá)與MDA和ROS表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，與SOD表達(dá)水平呈正相關(guān);早期活化T細(xì)胞表達(dá)與MDA和ROS表達(dá)水平呈正相關(guān)，與SOD表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(見表4)。

表4 前列地爾組氧化應(yīng)激與免疫功能指標(biāo)表達(dá)的相關(guān)性(r值)

3 討論

DN患者紅細(xì)胞免疫功能低下可能與患者紅細(xì)胞免疫黏附調(diào)節(jié)系統(tǒng)失調(diào)等密切相關(guān)，不僅發(fā)生紅細(xì)胞免疫黏附功能的下降，而且還發(fā)生血管壁上循環(huán)免疫復(fù)合物的堆積，參與了血管壁與周圍組織結(jié)合的損傷過程〔2〕。因此傳統(tǒng)針對(duì)糖脂代謝紊亂、血流動(dòng)力學(xué)方面的治療無(wú)法阻斷氧化應(yīng)激途徑和提高自身免疫功能。Schrier〔3〕提出氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)對(duì)機(jī)體將造成巨大的損害，將大大加速DN病程進(jìn)展。前列地爾由花生四烯酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，具有廣泛的藥理作用，對(duì)肺、心、腎及全身的動(dòng)脈、靜脈都有擴(kuò)張作用，同時(shí)具有抑制血小板聚集有作用，認(rèn)為其在保護(hù)腎功能、減少尿蛋白中具有重要的作用〔4〕。

本研究發(fā)現(xiàn)前列地爾組患者UAER、mALB和β2-MG表達(dá)水平均明顯下降，F(xiàn)PG、HbA1c、TC、TG、Scr和 BUN 表達(dá)水平變化不大。這與文獻(xiàn)報(bào)道相一致。本研究中的UAER、mALB和β2-MG作為前列地爾療效的直觀評(píng)價(jià)指標(biāo)，UAER、mALB和β2-MG表達(dá)水平在治療后明顯下降表明前列地爾可改善微循環(huán)，進(jìn)而減緩腎小球系膜細(xì)胞和系膜基質(zhì)的增生，保腎臟和腎功能，與相關(guān)研究一致〔5〕。DN患者腎組織中活性氧濃度升高，過量的ROS增加腎臟負(fù)擔(dān)，進(jìn)而引起機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)〔6〕。SOD作為一種自由基清除劑，可作為一種間接反映機(jī)體氧自由基的指標(biāo)〔7〕;MDA作為一種脂質(zhì)過氧化物，可作為一種直接反映機(jī)體過氧化強(qiáng)度的指標(biāo)〔8〕;ROS由線粒體產(chǎn)生，正常腎臟產(chǎn)生的少量ROS不會(huì)引起機(jī)體損傷，過量的ROS不僅調(diào)節(jié)了腎髓質(zhì)血流的變化，還引起腎臟的進(jìn)一步氧化損傷〔9〕。因此，本研究通過檢測(cè)上述3項(xiàng)指標(biāo)，以綜合評(píng)估機(jī)體氧化應(yīng)激情況。本研究顯示與對(duì)照組比較，治療后前列地爾組患者M(jìn)DA和ROS水平明顯下降，SOD水平明顯上升。分析認(rèn)為前列地爾通過激活細(xì)胞內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶致使局部血管擴(kuò)張，改善了局部血流動(dòng)力，降低了ROS的釋放，阻斷過氧化反應(yīng)，進(jìn)而起到保護(hù)腎臟組織細(xì)胞不進(jìn)一步受到氧化應(yīng)激引起的損傷〔10〕。

CD4+是具有增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用，CD8+具有免疫抑制作用，CD4+/CD8+比值是反映免疫調(diào)節(jié)的指標(biāo)〔11〕。本研究顯示與對(duì)照組比較，治療后前列地爾組患者CD4+和CD4+/CD8+水平明顯上升，早期活化T細(xì)胞和總淋巴細(xì)胞水平明顯下降，CD4+表達(dá)與MDA和ROS表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，與SOD表達(dá)水平呈正相關(guān);早期活化T細(xì)胞表達(dá)與MDA和ROS表達(dá)水平呈正相關(guān)，與SOD表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。由上述結(jié)果推測(cè)，免疫細(xì)胞處于氧化和抗氧化平衡中而維持細(xì)胞正常功能，使得各種免疫細(xì)胞產(chǎn)生適度的免疫應(yīng)答，而又不損傷機(jī)體組織。DN患者體內(nèi)ROS增多，過多的ROS將削弱免疫細(xì)胞有絲分裂不應(yīng)答，致使免疫細(xì)胞增殖降低，由此推斷氧化應(yīng)激可能影響機(jī)體的細(xì)胞免疫功能〔11〕。

綜上所述，DN 患者血清 UAER、mALB、β2-MG、MDA、ROS、早期活化T細(xì)胞、總淋巴細(xì)胞、SOD、CD4+和CD4+/CD8+水平，可以作為觀察DN病情變化和預(yù)后的重要指標(biāo)，針對(duì)DN患者的治療前列地爾可通過降低患者氧化應(yīng)激狀態(tài)和增強(qiáng)免疫功能等作用延緩慢性腎臟病的發(fā)生、發(fā)展，間接地起到改善腎功能的作用，為進(jìn)一步研究及尋找能全面干預(yù)和調(diào)節(jié)2型糖尿病患者代謝通路的藥物提供了新的方向。由此認(rèn)為針對(duì)氧化應(yīng)激和免疫功能可能是治療DN的方向之一。

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R589

A

1005-9202(2015)09-2419-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.049

王俊宏(1967-)，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事糖尿病及其急性性并發(fā)癥的防治研究。

田 勇(1980-)，男，主治醫(yī)師，主要從事糖尿病及其并發(fā)癥研究。

〔2013-09-17修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)