IL-1、IL-6、TNF-α在慢性酒精性中毒大鼠肝臟的表達

王雪敏 楊 昆 李琦軍 趙艷軍 靳 杰 田 勇 常智忠

(石家莊市第三醫(yī)院急診科，河北 石家莊 050011)

IL-1、IL-6、TNF-α在慢性酒精性中毒大鼠肝臟的表達

王雪敏 楊 昆 李琦軍 趙艷軍 靳 杰 田 勇 常智忠

(石家莊市第三醫(yī)院急診科，河北 石家莊 050011)

目的 探討慢性酒精中毒對大鼠肝臟白細胞介素(IL)-1、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α表達的影響。方法 采用酒精灌胃加高脂飼料法形成慢性酒精性肝損傷雄性SD大鼠模型，血清谷酰轉肽酶(GGT)、天門冬氨酸轉氨酶(AST)和血清丙氨酸轉氨酶 (ALT)水平為基礎參考指標。40只SD大鼠隨機分為正常對照組、酒精模型組，每組20只。應用Western印跡方法檢測SD大鼠肝組織中IL-1、IL-6、TNF-α表達情況。結果慢性酒精中毒大鼠血清 GGT、ALT、AST水平較正常對照組顯著升高(P＜0.05)，肝組織 IL-1、IL-6、TNF-α較正常對照組顯著升高(P＜0.01)。結論慢性酒精中毒的SD大鼠血清、肝組織IL-1、IL-6、TNF-α表達明顯升高，造成肝臟損傷，嚴重可發(fā)展至肝硬化。

慢性酒精中毒;肝損害;谷酰轉肽酶;天門冬氨酸轉氨酶;血清丙氨酸轉氨酶

在我國，酒精性肝損傷(ALD)呈年輕化增長趨勢，同時，由慢性酒精中毒導致的肝硬化、周圍神經病變、腦損傷及死亡率逐年增加〔1～3〕。本研究通過觀察慢性酒精中毒大鼠、肝臟組織中白細胞介素(IL)-1、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α表達情況，探討IL-1、IL-6、TNF-α在ALD發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 動物 選取SPF級SD雄性大鼠，體重88～104 g，中國醫(yī)學科學院動物繁殖場提供。高脂飼料為標準飼料+1%膽固醇、10%玉米油、5%豬油，由河北醫(yī)科大學動物實驗中心提供。

1.2 試劑與儀器 52%衡水老白干為河北衡水老白干釀酒(集團)有限公司出品;血清谷酰轉肽酶(GGT)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉氨酶(AST)檢測試劑盒購自上海生工有限公司;IL-1、IL-6、TNF-α活性檢測試劑購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 給藥、分組 SD大鼠給予正常適應性喂養(yǎng)1 w后，將40只大鼠隨機分為實驗組(慢性酒精中毒組)、對照組。實驗組給予52%衡水老白干白酒定時灌胃，0.2 ml/10 g，1次/d，連續(xù)14 d;對照組給予等量蒸餾水定時灌胃，連續(xù)14 d;兩組均給予高脂飲食，末次灌胃后12 h禁食，于灌胃后24 h經眼眶采血，處死后立即取肝臟組織標本進行檢測。

1.4 血清GGT、AST和ALT水平檢測 采集血液常溫靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min，取血清按照試劑盒說明書檢測 GGT、AST、ALT 水平。

1.5 IL-1、IL-6、TNF-α活性水平檢測 取大鼠肝臟組織40 mg，嚴格按照試劑盒步驟進行檢測。

1.6 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0軟件行t檢驗。

2 結果

2.1 兩組大鼠血清GGT、AST和ALT水平 實驗組大鼠血清GGT〔(7.64±1.72)U/L〕、AST〔(163.59±8.57)U/L〕和 ALT〔(196.44±9.80)U/L〕水平明顯高于對照組。提示實驗動物模型成功。

2.2 Western印跡方法檢測兩組肝臟組織中IL-1、IL-6、TNF-α水平 實驗組大鼠肝臟組織 IL-1〔(14.51±1.54)ng/L〕、IL-6〔(64.20±2.94)ng/L〕、TNF-α〔(78.39±5.16)ng/L〕顯著高于對照組〔(4.35±0.67)ng/L、(21.84± 1.03)ng/L、(13.87 ±2.35)ng/L〕(P＜0.05)。

3 討論

慢性酒精中毒可導致肝臟脂質代謝異常，ALD可引起肝臟細胞脂質過氧化反應。研究顯示，通過藥物降低急性酒精中毒大鼠TNF-α水平，可有效防止ALD進一步發(fā)展〔4〕。GGT、AST和ALT常作為診斷ALD的指標〔5〕。由于長期飲酒導致ALD，多種通路啟動引起細胞因子分泌增加，形成肝臟細胞炎癥、壞死、纖維化等〔6，7〕。本研究中慢性酒精中毒SD大鼠肝臟組織IL-1、IL-6、TNF-α均較正常對照組升高，提示酒精造成的肝損害有多種炎性因子參與，導致炎癥細胞因子增加，導致肝功能異常，其中TNF-α是促進炎癥發(fā)展的關鍵因子，與IL-6相互激發(fā)，加重肝細胞損傷〔4，8〕。慢性酒精中毒不僅引起肝臟損害，還引起慢性酒精中毒性周圍神經病〔9，10〕，因此慢性酒精中毒應引起高度重視，預防出現(xiàn)多臟器損傷。

1 徐正婕，陸論根.酒精性肝病的流行病學和自然史〔J〕.中國處方藥，2010;94(1):32-4.

2 麥國釗，任醒華，黃俊杰，等.慢性酒精中毒患者的臨床特點與神經電生理分析〔J〕.海南醫(yī)學院學報，2012;18(7):902-3.

3 劉 箐，周國平.甲鈷胺聯(lián)合還原型谷胱甘肽治療慢性酒精中毒性周圍神經病療效觀察〔J〕.腦與神經疾病雜志，2012;20(2):149-51.

4 曾 明，王金萍，丁媛媛，等.可舒膠囊對酒精性肝損傷大鼠血清中NF-κB 和 TNF-α 的影響〔J〕.東南國防醫(yī)藥，2013;15(1):23-5.

5 金鳳影.γ-谷氨酰轉肽酶(GGT)的測定對酒精性肝炎的診斷價值〔J〕.中國實用醫(yī)藥，2009;4(13):149-50.

6 Watanahe T，Jono H，Han J，et al.Synergistic activation of NF-κB by nontypeable haemophilus influenzae and tumor necrosis factor-α〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA，2004;101(10):3563-8.

7 陳博婷，薛 揮.NF-κB的結構和功能研究及與酒精性肝病的關系〔J〕.胃腸病學和肝病學雜志，2009;18(1):78-82.

8 曾 明，丁媛媛，王金萍，等.可舒膠囊對酒精性肝損傷小鼠肝組織Caspase-3與 Caspase-8活性的影響 .〔J〕中國醫(yī)藥導報，2013;10(27):22-4.

9 李 昊，張擁波.慢性酒精中毒致亞急性聯(lián)合變性的臨床探討〔J〕.中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)師版)，2011;13(13):199-200.

10 王東升，王長海，沈 通，等.46例慢性酒精中毒致周圍神經損害的臨床診治體會〔J〕.黑龍江醫(yī)藥，2011;24(4):637-8.

R57

A

1005-9202(2015)09-2377-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.029

王雪敏(1969-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事急診醫(yī)學研究。

〔2013-10-11修回〕

(編輯 袁左鳴)

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