蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3——疾病治療的新靶點*

胡　玥，陶麗媛，呂　賓(浙江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院消化科，浙江杭州310006)

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蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3——疾病治療的新靶點*

胡玥，陶麗媛，呂賓△
(浙江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院消化科，浙江杭州310006)

PDIA3: a new therapeutic target of diseases

HU Yue，TAO Li-yuan，LBin
(Department of Gastroenterology，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310006，China.E-mail: lvbin@ medmail.com.cn)

［ABSTRACT］Protein disulfide isomerase A3 (PDIA3) is a member of protein disulphide isomerase family and widely exists in endoplasmic reticulum，cell surface，nucleus and mitochondria.PDIA3 promotes the glycoprotein folding and quality control in the endoplasmic reticulum and is also a key molecular of major histocompatibility complex class I molecules assembly.In addition，PDIA3 is involved in the cell signal transduction and plays an important role in a variety of disease development.Therefore，this paper talks about the function of PDIA3，the relationship between disease and PDIA3 as well as its clinical outlook.

［關鍵詞］蛋白二硫鍵異構(gòu)酶A3

［KEY WORDS］Protein disulfide isomerase A3

［修回日期］2015-04-03

蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3 (protein disulfide isomerase A3，PDIA3 )，又稱ERp57或ERp57/GRP58，是蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(protein disulfide isomerase，PDI)家族的一員，具有催化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中蛋白質(zhì)二硫鍵形成、氧化還原及異構(gòu)化的作用。Bennett等［1］于1988年首次從不同物種中分離出PDIA3基因的互補DNA編碼鏈，諸多研究顯示其氨基酸序列與PDI有高度相似性，具有PDI活性，遂將其歸為PDI家族。

PDIA3蛋白由位于15號染色體上的PDIA3基因編碼而成，結(jié)構(gòu)存在高度復雜性，由505個氨基酸構(gòu)成，最初的24個氨基酸構(gòu)成了信號肽;蛋白分子量為58 kD，由4個硫氧還蛋白結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，分別稱為a、b、b’和a’，與硫氧還蛋白相似，有特有的α螺旋和β折疊［2］。

人類PDIA3的mRNA在肝、肺、胎盤、胰腺和腎臟中表達最高，在心臟、骨骼肌和大腦中表達最低，表達量的高低存在動態(tài)變化，如骨髓間充干細胞中的PDIA3基因表達量隨著細胞衰老而下降［3］。PDIA3主要分布于細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)腔，也因此獲得別名ERp57，但其在細胞表面、細胞核和線粒體等不同部位也廣泛存在，各自發(fā)揮不同的作用。

1 PDIA3的功能

1.1在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的作用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是PDIA3發(fā)揮作用最重要的場所。作為重要的分子伴侶，PDIA3和鈣聯(lián)接蛋白、鈣網(wǎng)蛋白組成復合物共同促進細胞新合成的糖蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中正確折疊，并進行質(zhì)量控制。使用小干擾RNA干預成纖維細胞中PDIA3的表達，可影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中新生糖蛋白翻譯后折疊［4］。同時，PDIA3參與主要組織相容性(抗原)復合物I (major histocompability complex I，MHC I)類分子的組裝，以二聚體的形式與MHCI重鏈、β2-微球蛋白、鈣網(wǎng)蛋白、抗原轉(zhuǎn)運相關蛋白等一起組成肽加載復合物(peptide-loading complex，PLC)，使抗原結(jié)合溝槽更適合抗原肽，在適應性免疫應答的內(nèi)源性抗原提呈中發(fā)揮重要作用。Garbi等［5］對小鼠B細胞進行PDIA3基因敲除，發(fā)現(xiàn)B細胞的發(fā)育、增殖以及抗體的分泌均未受影響，但出現(xiàn)PLC的組裝異常，影響抗原提呈。另外，蛋白質(zhì)組學分析提示包括PDIA3在內(nèi)的多種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關蛋白是吞噬體的組成成分，介導巨噬細胞的吞噬作用［6］，可見PDIA3亦是固有免疫的重要參與者。Schelhaas等［7］指出，當完整猿猴病毒從細胞表面通過內(nèi)吞作用進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)后，衣殼蛋白被PDIA3解離，釋放入細胞質(zhì)，繼而進入細胞核。

大量研究發(fā)現(xiàn)，多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)多種應激蛋白上調(diào)，這種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激現(xiàn)象與急性肺損傷、纖維增生性急性呼吸窘迫綜合癥、H1N1導致的慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)急性加重密切相關。PDIA3作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中的氧化還原酶，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激過程中發(fā)生上調(diào)。甲型流感病毒(influenza A virus，IAV)能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應激，上調(diào)PDIA3，而PDIA3的減少會降低病毒的侵害，降低caspase-12的激活和上皮細胞的凋亡［8］。而代謝綜合征患者餐后脂肪組織的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可以平衡進餐引起的應激［9］。

1.2在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外的作用Hirano等［10］首次觀察到3T3細胞分泌PDIA3，隨后的研究證實PDIA3存在于多種細胞表面或細胞膜蛋白復合物中。PDIA3和維生素D受體相互依存，和微囊蛋白1共同定位于MC3T3-E1成骨細胞，共同介導細胞對于1α，25 (OH)2D3的反應，調(diào)節(jié)細胞的生物學功能［11］。PDIA3有核定位信號序列(nuclear location sequence，NLS)，能從細胞質(zhì)中進入細胞核，改變靶基因的轉(zhuǎn)錄。對肝癌細胞株HepG2進行TNF-α干預后，細胞質(zhì)中的PDIA3在15 min內(nèi)移位到細胞核［12］。細胞核中的PDIA3與DNA和核蛋白相聯(lián)，Aureli等［13］在HeLa細胞株和黑色素瘤細胞中發(fā)現(xiàn)有相同的DNA序列，能在應激反應時與PDIA3特異性結(jié)合，而通過RNA干擾使PDIA3基因沉默后，此段DNA序列表達下調(diào)，提示PDIA3可能調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄和DNA的修復。線粒體中的PDIA3能保護線粒體鈣蛋白酶，抵抗其它線粒體蛋白酶對其降解;同時，PDIA3與鈣蛋白酶的復合物能催化凋亡誘導因子(apoptosis-inducing factor，AIF)的部分降解，使之從線粒體膜釋放入細胞質(zhì)，從而參與凋亡過程［14］。

綜上所述，PDIA3在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中通過各種途徑參與蛋白質(zhì)的加工處理、MHCI類分子的組裝、固有免疫應答、適應性免疫應答的抗原提呈，以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的過程。而其在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外，廣泛分布于多種細胞表面及細胞膜蛋白復合物，則能參與調(diào)節(jié)MC3T3-E1成骨細胞的生物學功能;進入細胞核后參與靶基因轉(zhuǎn)錄和DNA修復;線粒體中的PDIA3能對抗線粒體降解，參與細胞凋亡。PDIA3通過在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)外的各種功能共同介導了眾多疾病的發(fā)生與發(fā)展。

2 PDIA3相關疾病

2.1腸易激綜合征PDIA3在腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)中表達上調(diào)。應用差異熒光雙向凝膠電泳技術進行IBS大鼠結(jié)腸差異蛋白篩選，發(fā)現(xiàn)19個差異蛋白點，并對篩選出的差異蛋白進行鑒定，發(fā)現(xiàn)IBS大鼠結(jié)腸黏膜組織中PDIA3蛋白表達顯著高于對照組［15］。我們前期研究［16］用Western-blot檢測15例腹瀉型IBS(IBS-D)患者結(jié)腸黏膜組織中PDIA3蛋白的表達水平，發(fā)現(xiàn)顯著高于健康對照組，同時，檢測到IBS-D患者結(jié)腸組織中的類胰蛋白酶濃度明顯高于對照組，且PDIA3與類胰蛋白酶濃度呈正相關。PDIA3極有可能在IBS的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。

2.2肝臟疾病PDIA3在不同肝臟疾病中表現(xiàn)出不同的變化。因長期酗酒導致肝損傷的患者，其PDIA3表達下調(diào)，導致蛋白質(zhì)折疊異常，引發(fā)肝毒性，是酒精性肝損傷的分子標志［17］。而在非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)患者的肝活檢組織中，以及游離脂肪酸(free fatty acids，F(xiàn)FA)誘導的脂肪肝細胞中均發(fā)現(xiàn)PDIA3蛋白表達上調(diào)，PDIA3的表達與NAFLD患者的炎癥程度和纖維化程度有關;用siRNA干擾脂肪細胞中PDIA3的表達能顯著減少脂肪堆積，提示PDIA3可能通過影響脂肪轉(zhuǎn)運及代謝參與NAFLD發(fā)?。?8］。

2.3氣道高敏感PDIA3在氣道過敏性疾病中起顯著作用。采用屋塵螨作為變應原在體外和體內(nèi)對人類與小鼠的氣道初級上皮細胞進行應激，可以誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，激活轉(zhuǎn)錄因子α6(activating transcription factor α6，ATF6α)以及PDIA3，關聯(lián)性激活caspase-3;而對ATF6α和PDIA3基因敲除小鼠進行屋塵螨刺激，則可誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，減少二硫鍵介導的寡聚化和caspase-3的激活;同時，炎癥、氣道高反應性及氣道纖維化的發(fā)生率也相應降低。所以，PDIA3在屋塵螨誘導的氣道過敏性疾病中發(fā)揮了重要作用，抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應可能為慢性哮喘和與肺功能喪失相關性上皮間質(zhì)化提供一個潛在的治療途徑［19］。

2.4腎臟疾病PDIA3與腎臟纖維化有關。腎臟細胞在轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorβ1，TGFβ1)、血管緊張素原(angiotensinogen，AGT)或血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor，PDGF)刺激下，引起保護性的未折疊蛋白效應通路激活，從而導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激效應，并分泌大量的PDIA3，引起細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的分泌和積聚而造成腎纖維化。無論是患者組織活檢及動物模型，均提示腎纖維化與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激這兩者的程度和PDIA3的分泌量呈正相關。若敲除PDIA3基因或使用抗PDIA3抗體，則能破壞細胞外基質(zhì)的纖維化進程。另外，有研究發(fā)現(xiàn)PDIA3在慢性腎臟病的早期就有分泌，而它在小便中的含量高低也與腎纖維化的程度呈線性相關，所以PDIA3有可能是腎纖維化發(fā)生與發(fā)展的標志之一［20］。

研究顯示在腎移植發(fā)生急性排斥反應時，PDIA3在血清和移植腎中的基因和蛋白表達水平均升高，并伴隨著血漿中IL-2、IL-4、IL-6和C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)水平的升高，提示PDIA3可能參與腎移植急性排斥反應，而升高的IL-2、IL-4、IL-6 和CRP起保護性作用［21］。

2.5血小板聚集與血栓形成血小板中的PDIA3能調(diào)節(jié)血小板的聚集。使用PDIA3的拮抗劑，或給小鼠注入非活化的PDIA3，發(fā)現(xiàn)其尾靜脈出血時間延長，血小板聚集欠佳，αIIbβ和P選擇素的表達受到抑制，可抑制血栓形成［22］。Wang等［23］發(fā)現(xiàn)PDIA3基因敲除小鼠的血小板數(shù)量和血小板糖蛋白表達沒有變化，但尾靜脈出血時間延長，頸動脈損傷后的血栓閉塞時間也延長。而采用腸系膜動脈血栓的模型，發(fā)現(xiàn)PDIA3基因敲除血小板聚集欠佳，激活整合素αIIbβ3能力欠缺，參與血栓形成的比例降低，導致血栓形成緩慢，于添加外源性的PDIA3后，血小板聚集缺陷能得到改善。

2.6腫瘤PDIA3調(diào)控STAT3信號轉(zhuǎn)導與增殖，與癌癥的發(fā)生密切相關。宮頸癌患者腫瘤組織與宮頸上皮內(nèi)瘤變組織或正常組織相比，PDIA3的mRNA和蛋白表達均降低，而PDIA3的表達高低和總體生存率的高低呈正相關，提示PDIA3可能是宮頸癌預后的獨立預測因子，改善PDIA3水平或可成為宮頸癌的治療手段［24］。

上皮生長因子受體(epithelial growth factor receptor，EGFR)是一種酪氨酸激酶受體，能激活許多信號級聯(lián)反應，促進細胞增殖，抑制細胞凋亡，導致腫瘤的發(fā)生。Gaucci等［25］發(fā)現(xiàn)敲除乳腺癌細胞的PDIA3基因后，該細胞的EGFR表達、在細胞膜上的分布以及與EGF的結(jié)合都未發(fā)生改變，但是其磷酸化和內(nèi)在化受到影響，提示PDIA3可通過影響EGFR的活化間接調(diào)控腫瘤的發(fā)生。

在哈薩克族食管鱗狀細胞癌患者中，PDIA3的表達較正常人群下降52%，且下降的程度與腫瘤分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和侵犯深度相關［26］。同時，PDIA3還與膽囊癌患者的腫瘤進展與臨床表現(xiàn)有關，是潛在的診斷與判斷預后的生物標記［27］。另外，有研究表明PDIA3能調(diào)節(jié)人類結(jié)腸癌細胞化療的敏感性，有望成為新的化療分子靶點［28］。

2.7神經(jīng)退行性病變阿爾茨海默氏癥的發(fā)病歸因于β-淀粉肽的沉積導致的神經(jīng)毒性。正常情況下，腦脊液中的β-淀粉肽與PDIA3和鈣網(wǎng)蛋白作為復合物存在，受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的翻譯后加工系統(tǒng)催化，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的催化及加工能力隨著年齡的增長而減弱，使得β-淀粉肽不能形成復合物而發(fā)生聚集，從而導致相應疾病的發(fā)生。

5-S-半胱氨酰多巴胺(5-S-cysteinyldopamine，CysDA)參與帕金森神經(jīng)退行性病變，主要是由于其能誘導大量的氧化應激和蛋白聚集有關，而其中最重要的是PDIA3表達上調(diào)，這在帕金森模型小鼠和細胞中得到了印證［29］。

2.8生殖在人類精子發(fā)生過程中，PDIA3存在于精母細胞、精子和人睪丸的Leydig細胞胞質(zhì)中，在Sertoli細胞中也有少量表達，而精子頂體內(nèi)的PDIA3則是精卵融合所需的［30］。國內(nèi)學者在大鼠的精母細胞和精子［31］中也發(fā)現(xiàn)有PDIA3的分布，同樣表明其在精卵融合過程中發(fā)揮重要作用。另外，PDIA3或許能成為男性不育的一個新的表型標記，并可以用于體外受精精子的選擇。

3研究展望

如上所述，PDIA3與眾多疾病的發(fā)生發(fā)展息息相關，是一種有效的干預中介，針對它的治療成為當下臨床應用新的突破點。近年來，關于PDI為治療靶點的研究逐漸增多［32］，特別是抑制PDI活性的藥物的研發(fā)，目前相應的藥物主要有抗生素、巰基阻斷劑、砷化合物、雌激素化合物及天然或人工合成的小分子化合物等，這些化合物大部分是通過不可逆性抑制PDI活性位點半胱氨酸來發(fā)揮作用，但藥物數(shù)量有限，且缺乏選擇性及有效性，并有顯著的非靶向毒性，使得特異性抑制PDI活性成為目前藥物研究的難點。而PDIA3作為PDI家族一員，已被證明能夠被人工合成的丙炔酸氨基甲酰甲基酰胺16F16 (3)靶向抑制［33］，同時萬古霉素能影響PDIA3與鈣網(wǎng)蛋白間的相互作用，使構(gòu)象發(fā)生變化，降低復合物的穩(wěn)固性而發(fā)揮作用［34］。天然植物代謝產(chǎn)物Juniferdin［35］和槲皮素-3-蕓香糖甙被證明對PDIA3無明顯抑制作用［36］。另外，Trnková等［37］發(fā)現(xiàn)綠茶酚能輕度抑制PDIA3的還原酶活性，預防多種疾病的發(fā)生，起到保健作用。相關特異性抑制劑的研制和發(fā)展遭遇挑戰(zhàn)的一個重要原因是PDI結(jié)構(gòu)和功能的復雜性，有效抑制PDI的影響因素和機制未完全明了，而PDI抑制劑對PDIA3活性的影響則仍需進一步驗證。

目前已能利用生物工程技術生產(chǎn)人類PDIA3蛋白。酵母細胞是生產(chǎn)人類PDIA3蛋白的優(yōu)良宿主，能識別和加工人類PDIA3蛋白的天然信號肽，分泌重組PDIA3蛋白，該蛋白擁有天然蛋白的氨基酸序列和生物活性，經(jīng)過純化后能達到10 mg/L，能為進一步研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外的PDIA3生物學功能及進行生物學治療提供便利［38］。

4結(jié)語

現(xiàn)有研究表明PDIA3與多種疾病發(fā)生發(fā)展密切相關，檢測或干預相關部位的PDIA3表達水平，可能成為疾病早期診斷與治療的新靶點。目前，關于PDIA3的認識尚未完全明了，還有待進一步研究，如對PDIA3生物學功能深入探討則可促進對相關疾病機制的認識，而研究各個相關疾病中PDIA3的變化將有助于對其有一個更全面的認識。PDIA3是疾病發(fā)生發(fā)展的反應性變化，亦或是導致疾病發(fā)生發(fā)展的主導原因仍值得深入發(fā)掘，同時，基因干預將成為主要手段，以深化PDIA3治療作用的研究。

［參考文獻］

［1］Bennett CF，Balcarek JM，Varrichio A，et al.Molecular cloning and complete amino-acid sequence of form-I phosphoinositide specific phospholipase C［J］.Nature，1988，334(6179) :268-270.

［2］Silvennoinen L，Myllyharju J，Ruoppolo M，et al.Identification and characterization of structural domains of human ERp57: association with calreticulin requires several domains［J］.J Biol Chem，2004，279(14) :13607-13615.

［3］Yoo JK，Choi SJ，Kim JK.Expression profiles of subtracted mRNAs during cellular senescence in human mesenchymal stem cells derived from bone marrow［J］.Exp Gerontol，2013，48(5) :464-471.

［4］Soldà T，Garbi N，Hmmerling GJ，et al.Consequences of ERp57 deletion on oxidative folding of obligate and facultative clients of the calnexin cycle［J］.J Biol Chem，2006，281(10) :6219-6226.

［5］Garbi N，Tanaka S，Momburg F，et al.Impaired assembly of the major histocompatibility complex class I peptideloading complex in mice deficient in the oxidoreductase ERp57［J］.Nat Immunol，2006，7(1) :93-102.

［6］Desjardins M.ER-mediated phagocytosis: a new membrane for new functions［J］.Nat Rev Immunol，2003，3 (4) :280-291.

［7］Schelhaas M，Malmstrm J，Pelkmans L，et al.Simian Virus 40 depends on ER protein folding and quality control factors for entry into host cells［J］.Cell，2007，131(3) : 516-529.

［8］Roberson EC，Tully JE，Guala AS，et al.Influenza induces endoplasmic reticulum stress，caspase-12-dependent apoptosis，and c-Jun N-terminal kinase-mediated transforming growth factor-β release in lung epithelial cells［J］.Am J Respir Cell Mol Biol，2012，46(5) :573-581.

［9］Camargo A，Meneses ME，Rangel-Zuiga OA，et al.Endoplasmic reticulum stress in adipose tissue determines postprandial lipoprotein metabolism in metabolic syndrome patients［J］.Mol Nutr Food Res，2013，57(12) : 2166-2176.

［10］Hirano N，Shibasaki F，Sakai R，et al.Molecular cloning of the human glucoseregulated protein ERp57/GRP58，a thiol-dependent reductase.Identification of its secretory form and inducible expression by the oncogenic transformation［J］.Eur J Biochem，1995，234(1) :336-342.

［11］Chen J，Doroudi M，Cheung J，et al.Plasma membrane Pdia3 and VDR interact to elicit rapid responses to 1α，25 (OH)2D3［J］.Cell Signal，2013，25(12) :2362-2373.

［12］Grindel BJ，Rohe B，Safford SE，et al.Tumor necrosis factor-α treatment of HepG2 cells mobilizes a cytoplasmic pool of ERp57/1，25D3-MARRS to the nucleus［J］.J Cell Biochem，2011，112(9) :2606-2615.

［13］Aureli C，Gaucci E，Arcangeli V，et al.ERp57/PDIA3 binds specific DNA fragments in a melanoma cell line［J］.Gene，2013，524(2) :390-395.

［14］Ozaki T，Yamashita T，Ishiguro S.ERp57-associated mitochondrial micro-calpain truncates apoptosis-inducing factor［J］.Biochim Biophys Acta，2008，1783(10) : 1955-1963.

［15］Ding Y，Lu B，Chen D，et al.Proteomic analysis of colonic mucosa in a rat model of irritable bowel syndrome ［J］.Proteomics，2010，10(14) :2620-2630.

［16］馬麗娟，呂賓，孟立娜，等.PDIA3在腹瀉型腸易激綜合征患者結(jié)腸黏膜中的蛋白表達及其意義［J］.胃腸病學，2011，16(4) :218-221.

［17］Aroor AR，Roy LJ，Restrepo RJ，et al.A proteomic analysis of liver after ethanol binge in chronically ethanol treated rats［J］.Proteome Sci，2012，10:29.

［18］Wang H，Chan PK，Pan SY，et al.ERp57 is up-regulated in free fatty acids-induced steatotic L-02 cells and human nonalcoholic fatty livers［J］.J Cell Biochem，2010，110 (6) :1447-1456.

［19］Hoffman SM，Tully JE，Nolin JD，et al.Endoplasmic re-ticulum stress mediates house dust mite-induced airway epithelial apoptosis and fibrosis［J］.Respir Res，2013，14: 141.

［20］Dihazi H，Dihazi GH，Bibi A，et al.Secretion of ERP57 is important for extracellular matrix accumulation and progression of renal fibrosis，and is an early sign of disease onset［J］.J Cell Sci，2013，126(Pt 16) :3649-3663.

［21］Chen G，Mi J，Xiao MZ，et al.PDIA3 mRNA expression and IL-2，IL-4，IL-6，and CRP levels of acute kidney allograft rejection in rat［J］.Mol Biol Rep，2012，39(5) : 5233-5238.

［22］Wu Y，Ahmad SS，Zhou J，et al.The disulfide isomerase ERp57 mediates platelet aggregation，hemostasis，and thrombosis［J］.Blood，2012，119(7) :1737-1746.

［23］Wang L，Wu Y，Zhou J，et al.Platelet-derived ERp57 mediates platelet incorporation into a growing thrombus by regulation of the αIIbβ3 integrin［J］.Blood，2013，122 (22) :3642-3650.

［24］Chung H，Cho H，Perry C，et al.Downregulation of ERp57 expression is associated with poor prognosis in early-stage cervical cancer［J］.Biomarkers，2013，18(7) : 573-579.

［25］Gaucci E，Altieri F，Turano C，et al.The protein ERp57 contributes to EGF receptor signaling and internalization in MDA-MB-468 breast cancer cells［J］.J Cell Biochem，2013，114(11) :2461-2470.

［26］Ayshamgul H，Ma H，Ilyar S，et al.Association of defective HLA-I expression with antigen processing machinery and their association with clinicopathological characteristics in Kazak patients with esophageal cancer［J］.Chin Med J (Engl)，2011，124(3) :341-346.

［27］Zou Q，Yang ZL，Yuan Y，et al.Clinicopathological features and CCT2 and PDIA2 expression in gallbladder squamous/adenosquamous carcinoma and gallbladder adenocarcinoma［J］.World J Surg Oncol，2013，11:143.

［28］Ménoret A，Drew DA，Miyamoto S，et al.Differential proteomics identifies PDIA3 as a novel chemoprevention target in human colon cancer cells［J］.Mol Carcinog，2014，53(Suppl 1) : E11-E22.

［29］Aureli C，Cassano T，Masci A，et al.5-S-cysteinyldopamine neurotoxicity: Influence on the expression of α-synuclein and ERp57 in cellular and animal models of Parkinson’s disease［J］.J Neurosci Res，2014，92(3) :347-358.

［30］Ellerman DA，Myles DG，Primakoff P.A role for sperm surface protein disulfide isomerase activity in gamete fusion: evidence for the participation of ERp57［J］.Dev Cell，2006，10 (6) :831-837.

［31］Zhao XJ，Tang RZ，Wang ML，et al.Distribution of PDIA3 transcript and protein in rat testis and sperm cells ［J］.Reprod Domest Anim，2013，48(1) :59-63.

［32］Xu S，Sankar S，Neamati N.Protein disulfide isomerase: a promising target for cancer therapy［J］.Drug Discov Today，2014，19(3) :222-240.

［33］Hoffstrom BG，Kaplan A，Letso R，et al.Inhibitors of protein disulfide isomerase suppress apoptosis induced by misfolded proteins［J］.Nat Chem Biol，2010，6(12) : 900-906.

［34］Frasconi M，Chichiarelli S，Gaucci E，et al.Interaction of ERp57 with calreticulin: analysis of complex formation and effects of vancomycin［J］.Biophys Chem，2012，160 (1) :46-53.

［35］Khan MM，Simizu S，Lai NS，et al.Discovery of a small molecule PDI inhibitor that inhibits reduction of HIV-1 envelope glycoprotein gp120［J］.ACS Chem Biol，2011，6 (3) :245-251.

［36］Jasuja R，Passam FH，Kennedy DR，et al.Protein disulfide isomerase inhibitors constitute a new class of antithrombotic agents［J］.J Clin Invest，2012，122(6) : 2104-2113.

［37］Trnková L，Ricci D，Grillo C，et al.Green tea catechins can bind and modify ERp57/PDIA3 activity［J］.Biochim Biophys Acta，2013，1830(3) :2671-2682.

·實驗技術·

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*［基金項目］國家自然科學基金資助項目(No.81170348) ;浙江省自然科學基金資助項目(No.LZ12H03001) ;高等學校博士學科點專項科研基金資助項目(No.722212A001)

［收稿日期］2015-02-15

［文章編號］1000-4718(2015)06-1145-05

［中圖分類號］R363

［文獻標志碼］A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.06.032