6種茶葉對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰幾項(xiàng)抗氧化指標(biāo)的影響

■陳 路 楊嚴(yán)鷗 宛曉春 周裔彬 桑八一 張建立

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，安徽合肥 230036；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院農(nóng)業(yè)部茶葉生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230036)

魚(yú)類抗氧化酶系統(tǒng)在維持機(jī)體的正常代謝和功能上起著十分重要的作用[1]。超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）以及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）是反映抗氧化能力的重要指標(biāo)。SOD能夠通過(guò)歧化反應(yīng)將超氧化物轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫與氧氣[2]，而CAT又能高效地將過(guò)氧化氫轉(zhuǎn)化為水和氧氣[3]，因此，SOD與CAT對(duì)清除氧化脅迫過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧自由基起著決定性作用[4]。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）是氧自由基的發(fā)生器，其活性升高是各種疾病發(fā)生的標(biāo)志[5]。

研究顯示，茶多酚可以提高魚(yú)類超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）活性[6-9]，而茶多酚是茶葉中的重要成分，我國(guó)是茶葉生產(chǎn)大國(guó)，茶葉種類多，產(chǎn)量高，可以考慮將茶葉作為添加劑使用到飼料中，但目前，有關(guān)茶葉對(duì)魚(yú)類的抗氧化能力影響的研究十分缺乏。因此，本試驗(yàn)選擇4種綠茶[屏山炒青（四川）、霍山黃芽（安徽）、黃山毛峰（安徽）、龍井（浙江）]、1種紅茶[祁門(mén)紅茶（安徽）]與1種黑茶[普洱茶（云南）]進(jìn)行試驗(yàn)。出于實(shí)際應(yīng)用中的成本考慮，添加物為茶葉加工中篩下來(lái)的副產(chǎn)品茶末，分別按1%和2%用量添加到斑點(diǎn)叉尾鮰基礎(chǔ)飼料中，旨在比較不同茶葉及不同添加量對(duì)該種魚(yú)類抗氧化能力的影響，為茶葉加工副產(chǎn)品在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)養(yǎng)殖系統(tǒng)為室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)，主要包括水處理系統(tǒng)與39個(gè)單個(gè)體積為60 cm×60 cm×65 cm(有效水體180 L)的塑料水族箱。試驗(yàn)魚(yú)取自安徽合肥市的巢湖三珍養(yǎng)殖場(chǎng)，運(yùn)回后2%食鹽水消毒，在上述水族箱中暫養(yǎng)2周。暫養(yǎng)期間投喂基礎(chǔ)飼料。屏山炒青、霍山黃芽、黃山毛峰、龍井、祁門(mén)紅茶和普洱茶6種茶葉的茶末粉碎后，過(guò)60目篩，分別按1%、2%用量添加到基礎(chǔ)飼料中，再加上添加量為0%的對(duì)照組，試驗(yàn)飼料共13種，每組3個(gè)重復(fù)。飼料以顆粒機(jī)制成粒徑2 mm顆粒，65℃烘干后過(guò)篩，-20℃保存?zhèn)溆??；A(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.2 試驗(yàn)過(guò)程與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)開(kāi)始前，將魚(yú)饑餓24 h，然后隨機(jī)取樣稱重，每箱放入試驗(yàn)魚(yú)30尾，個(gè)體初始平均體重為1.80～1.90 g/尾。每天9:00和15:00各投適量飼料一次，1 h后回收殘餌，以預(yù)防水質(zhì)變壞。試驗(yàn)水源為曝氣自來(lái)水，使用沸石、活性炭?jī)艋w，真空泵提水。單只箱體循環(huán)水量為2.5 L/min，箱內(nèi)放置散氣石，以通風(fēng)管連接羅茨鼓風(fēng)機(jī)間斷性充氧。自然水溫，變化范圍25.2～28.5℃，節(jié)能日光燈提供照明，光照時(shí)間8:30～20:00，瞬時(shí)開(kāi)斷。試驗(yàn)持續(xù)8周。

1.3 取樣與方法

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將魚(yú)饑餓24 h，每箱中隨機(jī)取樣7尾，取內(nèi)臟團(tuán)，冰浴條件下分離肝胰臟，-70℃冰箱保存。將養(yǎng)殖箱中的水體高度從60 cm降到10 cm，充氧，擁擠脅迫3 d后，前2 d每天投喂兩次（時(shí)間如前），第3 d饑餓，再每箱隨機(jī)取樣7尾，按前述方法分離并保存肝胰臟。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

CAT、SOD、γ-GT活性參考南京建成生物研究所生產(chǎn)的試劑盒的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，方法參見(jiàn)試劑盒。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA）后進(jìn)行組間差異的多重比較（Duncan's procedure）。以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)SOD活性的影響（見(jiàn)表2）

表2顯示，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對(duì)照組相比，龍井1%、2%組的SOD活性均顯著提高，屏山炒青和普洱的1%組顯著提高。其余各組顯著降低或與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。對(duì)同種茶葉，屏山炒青和普洱的1%組顯著高于2%組，而黃山毛峰的1%組顯著低于2%組，其余3種茶葉兩組之間無(wú)顯著差異。

表2 茶葉種類、添加劑量以及脅迫對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰魚(yú)體肝臟SOD活性的影響(U/mg prot.)

脅迫后，與對(duì)照組相比，霍山黃芽和黃山毛峰的1%、2%組的SOD活性均顯著高于對(duì)照組，屏山炒青和祁門(mén)紅茶僅1%組的SOD活性顯著提高，龍井和普洱兩種劑量與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異。對(duì)于同種茶葉，屏山炒青和祁門(mén)紅茶的1%組顯著高于2%組，其余4種茶葉兩組間無(wú)顯著差異。

結(jié)果顯示，不同茶葉在提高SOD活性效果上有不同特點(diǎn)。脅迫前，龍井茶（兩組）和普洱茶（1%組）有顯著提高SOD活性的效果，脅迫后這種作用消失，而黃山毛峰與霍山黃芽（兩組）以及祁門(mén)紅茶（1%組）在脅迫前未顯示出提高SOD活性的效果，脅迫后表現(xiàn)出這種效果。屏山炒青（1%組）則在脅迫前后均有此效果。

2.2 對(duì)CAT活性的影響（見(jiàn)表3）

表3 茶葉種類、添加劑量以及脅迫對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰魚(yú)體肝臟CAT活性的影響(U/mg prot.)

表3顯示，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與對(duì)照組相比，屏山炒青、龍井的1%組及霍山黃芽的2%組均導(dǎo)致CAT活性顯著提高，其余各組顯著低于或與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。對(duì)同種茶葉，屏山炒青、龍井、普洱以及祁門(mén)紅茶的1%組顯著高于2%組，其余2種茶葉1%組顯著低于2%組或無(wú)顯著差異。

脅迫后，霍山黃芽2%組顯著高于對(duì)照組，其余各組顯著低于或與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。對(duì)于同種茶葉，普洱、祁門(mén)紅茶的1%組顯著低于2%組，而黃山毛峰的1%組顯著高于2%組，其余3種茶葉的1%、2%組之間無(wú)顯著差異。

由此可見(jiàn)，霍山黃芽2%組在脅迫前后均能顯著提高CAT活性，屏山炒青與龍井茶只在1%組脅迫前有效果，其余各組對(duì)提高CAT活性無(wú)顯著作用甚至顯著降低了CAT活性。

2.3 對(duì)γ-GT活性的影響（見(jiàn)表4）

表4顯示，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，黃山毛峰2%組和祁門(mén)紅茶1%組的γ-GT活性與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，其余各組均顯著低于對(duì)照組。對(duì)同種茶葉，屏山炒青和祁門(mén)紅茶的1%組顯著高于2%組，而黃山毛峰的1%組顯著低于2%組，其余3種茶葉的1%、2%組之間無(wú)顯著差異。

表4 茶葉種類、添加劑量以及脅迫對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰魚(yú)體肝臟γ-GT活性的影響(U/g prot.)

脅迫后，黃山毛峰、普洱以及祁門(mén)紅茶的γ-GT活性均顯著高于對(duì)照組。對(duì)同種茶葉，屏山炒青和祁門(mén)紅茶的1%組顯著高于2%組，而龍井1%組顯著低于2%組，其余3種茶葉的1%、2%組之間無(wú)顯著差異。

由此可知，龍井茶與霍山黃芽在脅迫前與脅迫后均顯著低于對(duì)照組或與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，其余各種茶葉在脅迫前基本能顯著降低γ-GT活性，脅迫后γ-GT活性則顯著升高(屏山炒青2%組除外)。

3 討論

3.1 對(duì)SOD活性的影響

超氧化物歧化酶（SOD）可催化超氧陰離子自由基的歧化反應(yīng)，從而阻斷自由基的連鎖反應(yīng)，是機(jī)體清除自由基能力的標(biāo)志[10]。本試驗(yàn)中，養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)有部分試驗(yàn)組的SOD活性顯著提高，例如龍井（1%、2%組）、屏山炒青與普洱（均為1%組），這與徐奇友等[6]的試驗(yàn)結(jié)果類似，該試驗(yàn)在虹鱒飼料中添加茶多酚，導(dǎo)致肝臟中SOD活性顯著提高。值得注意的是，脅迫前有部分試驗(yàn)組SOD活性顯著低于對(duì)照組或與對(duì)照組相比無(wú)顯著變化，但脅迫后，這些組的SOD活性顯著高于對(duì)照組，例如黃山毛峰（1%、2%組）、霍山黃芽（1%、2%組）與祁門(mén)紅茶（1%組）等，即這些種類茶葉的效果在脅迫后才凸顯出來(lái)。這兩種現(xiàn)象在紅茶、綠茶中均有出現(xiàn)。因此，結(jié)果不同，應(yīng)該與具體的茶葉種類不同有關(guān)，這還有待進(jìn)一步研究。

3.2 對(duì)CAT活性的影響

本試驗(yàn)顯示，無(wú)論脅迫前或脅迫后，除個(gè)別試驗(yàn)組CAT活性顯著提高外，多數(shù)試驗(yàn)組肝臟CAT活性改善不顯著甚至有所降低，而劉振興等[7]報(bào)道，羅非魚(yú)飼料中添加333 mg/kg茶多酚可提高其肝臟的CAT活性。本試驗(yàn)結(jié)果與之不同，可能與魚(yú)種不同有關(guān)，也可能與茶多酚劑量不同有關(guān)。按茶多酚約占紅茶干重的10%以及綠茶干重的15%～25%[11]來(lái)計(jì)算，本試驗(yàn)飼料中茶多酚添加量約為1 000～5 000 mg/kg，明顯高于羅非魚(yú)試驗(yàn)的添加量。這一問(wèn)題還需要進(jìn)一步的研究。

3.3 對(duì)γ-GT活性的影響

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-GT）是氧自由基的發(fā)生器，其活性升高是肝功能受損的標(biāo)志[5]。本試驗(yàn)顯示，茶葉添加會(huì)導(dǎo)致肝臟中γ-GT活性顯著降低，表明茶葉具有抑制肝功能受損的功能[12]。但脅迫后多數(shù)試驗(yàn)組的γ-GT活性升高，且顯著高于對(duì)照組，原因還有待進(jìn)一步研究。不過(guò)龍井茶與霍山黃芽在脅迫后與對(duì)照組相比仍無(wú)顯著差異或顯著低于對(duì)照組，這可能與兩種茶葉中含有某些特殊成分有關(guān)，導(dǎo)致與其它茶葉有明顯不同的結(jié)果，這還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

6種茶葉中，龍井茶與霍山黃芽的作用更為相似，提高抗氧化能力的作用最為明顯；在兩種添加劑量中，1%添加量提高抗氧化能力的作用更為顯著。