RP－HPLC法測定藤黃果原料中羥基檸檬酸的含量

惠戰(zhàn)鋒，肖 紅，惠玉虎，王新萍，楊軍仁（陜西嘉禾植物化工有限責任公司，西安 710086）

RP－HPLC法測定藤黃果原料中羥基檸檬酸的含量

惠戰(zhàn)鋒，肖 紅，惠玉虎，王新萍，楊軍仁（陜西嘉禾植物化工有限責任公司，西安 710086）

目的 建立藤黃果原料中羥基檸檬酸的HPLC測定方法。方法 色譜柱Agilent TC－C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為0.05mol·L－1的無水硫酸鈉水溶液（用硫酸調節(jié)pH為2.3）；檢測波長210nm；進樣量10μL；體積流量1.0mL·min－1；柱溫30℃。結果 羥基檸檬酸的線性范圍為0.209 9～2.099 0μg，r＝0.999 9（n＝6），平均回收率99.2%，RSD為0.5%。結論 該方法簡單、準確、重復性好，可用于藤黃果原料中羥基檸檬酸的定量測定。

藤黃果；羥基檸檬酸；HPLC

藤黃果（Garcinia cambogia）是雙子葉植物綱藤黃科的一種喬木，又名馬拉巴羅望子，其果實和植物樹種同名，主要分布在印度、馬來西亞等東南亞地區(qū)［1］。藤黃果主要化學成分是天然的有機酸羥基檸檬酸。羥基檸檬酸在抑制脂肪合成、控制食欲和減肥方面具有良好功效，目前在歐美國家被廣泛用于減肥保健食品［2－3］。本文采用RP－HPLC法測定藤黃果原料中羥基檸檬酸的含量［4］，也可以適用于藤黃果提取物中羥基檸檬酸的含量測定，方法簡便、準確、重復性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Dionex Ultimate3 000高效液相色譜儀（包括四元梯度泵、自動進樣器、紫外檢測器）；BP211D電子分析天平（德國Sartorius公司）；KQ250D超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 羥基檸檬酸鈣對照品（和光純藥工業(yè)株式會社，質量分數(shù)大于98%）；藤黃果原料由陜西嘉禾植物化工有限責任公司研發(fā)部提供；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC－C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相：0.05mol·L－1無水硫酸鈉水溶液（用硫酸調節(jié)pH為2.3）；體積流量為1.0mL·min－1；檢測波長：210nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。在上述色譜條件下，理論板數(shù)以羥基檸檬酸峰計不低于3 000，結果見圖1。

圖1 HPLC圖A.對照品；B.藤黃果；1.羥基檸檬酸Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substances；B.Garcinia cambogia；1.hydroxycitric acid

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取羥基檸檬酸鈣對照品適量，置于50mL量瓶中，加30mL·L－1磷酸，超聲溶解20min，放置至室溫，用30mL·L－1磷酸稀釋至刻度，搖勻，制成含羥基檸檬酸0.419 8mg·mL－1的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取藤黃果原料約0.05g，精密稱定，置于50mL量瓶中，加30mL·L－1磷酸約40mL，超聲提取60min（功率250W，頻率40kHz），取出，放冷，用30mL·L－1磷酸稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關系考察 精密吸取2.2項下的對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0mL，分別置于10mL量瓶中，用30mL·L－1磷酸定容至刻度，搖勻，各取10μL進樣，按2.1項下的色譜條件進行測定，以羥基檸檬酸進樣量（μg）為橫坐標（X），以峰面積積分值為縱坐標（Y），繪制標準曲線，得回歸方程：Y＝1.298 X－0.021，r＝0.999 9，結果表明，羥基檸檬酸進樣量在0.209 9～2.099μg范圍內線性良好。

2.5 精密度實驗 精密吸取2.2項下對照品溶液3.0mL，置于10mL量瓶中，用30mL·L－1磷酸定容至刻度，搖勻，連續(xù)進樣6次，測定羥基檸檬酸峰面積，結果羥基檸檬酸峰面積的RSD為0.12%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性實驗 精密稱取同一批藤黃果原料樣品6份，分別按2.3項下制備供試品溶液，測定羥基檸檬酸的平均質量分數(shù)16.28%，RSD為1.32%，表明該方法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6和8h進樣，測定峰面積，結果羥基檸檬酸峰面積的RSD為0.98%，表明供試品溶液在8h內穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實驗 稱取已知含量的藤黃果樣品（羥基檸檬酸含量為16.28%）9份各0.03g，3份為1組，分別加入羥基檸檬酸對照品5，6和7mg，再照供試品溶液同法制備，按2.1色譜條件進行測定，結果羥基檸檬酸平均回收率為99.2%，RSD為0.5%。

2.9 樣品測定 取3批樣品，按照2.3項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，結果3批樣品中羥基檸檬酸的含量分別為16.28%，16.31%和16.68%。

3 結論

在樣品提取過程中，比較了3種不同提取溶劑（水、1mL·L－1鹽酸［5］、30mL·L－1磷酸），結果表明，30mL·L－1磷酸提取效果遠遠高于其他2種取溶劑，因此，選擇30mL·L－1磷酸作為提取溶劑；以30mL·L－1磷酸為提取溶劑，比較超聲提取法［6］和加熱回流提取法，因加熱回流提取羥基檸檬酸受熱分解，導致含量偏低，因此，用超聲提取法，且超聲提取法簡單、實用。

本方法準確、重復性好，適用于藤黃果原料和提取物中羥基檸檬酸的含量測定。

［1］汪開治.減肥食品新秀——藤黃果［J］.植物雜志，1995，10（5）：9.

［2］張波.羥基檸檬酸功能性食品液相色譜檢測［D］.天津，天津大學，2012.

［3］袁爾冬.功效活性成分——羥基檸檬酸的研究進展［J］.四川食品與發(fā)酵，2006，42（2）：19－23.

［4］李蘭英，許麗，丁敏，等.HPLC檢測功能食品中羥基檸檬酸主成分和兩種非法添加藥物［J］.食品安全質量檢測學報，2012，3（1）：10－16.

［5］印度藥典2010版［S］.三部.2010：2499.

［6］萬水昌，王志祥，樂龍，等.超聲提取技術在中藥及其天然產(chǎn)物提取中的應用［J］.西北藥學雜志，2008，23（1）：60－62.

Determination of hydroxycitric acid in Garcinia cambogia by RP－HPLC

HUI Zhanfeng，XIAO Hong，HUI Yuhu，WANG Xinping，YANG Junren（Shaanxi Jiahe Phytochem Limited Company，Xi′an 710086，China）

Objective To establish an HPLC method for the determination of hydroxycitric acid in Garcinia cambogia.Methods The analysis was performed on a Agilent TC－C18（250mm×4.6mm，5μm）column with 0.05mol·L－1sodium sulfate solution（adjusted pH to 2.3with sulfuric acid）as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL·min－1，the detection wavelength was 210 nm，the injection volume was 10μL，and the column temperature was 30℃.Results The calibration curve was linear within the range of 0.209 9－2.099 0μg（r＝0.999 9，n＝6），and the average recovery was 99.2%，RSD 0.5%.Conclusion The method was simple，accurate，and with good reproducibility.It could be used for the determination of hydroxycitric acid in Garcinia cambogia.

Garcinia cambogia；hydroxycitric acid；HPLC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.014

R282

A

1004－2407（2015）04－0371－02

2014－11－24）