紫外分光光度法測定藤黃藥材中總藤黃酸含量

紀(jì) 娟，裴來良，王 斌，程 卉，胡海霞，王效山，周 安

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)科研實驗中心，安徽 合肥 230038；2.安徽省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，安徽 合肥 230031；3.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031）

紫外分光光度法測定藤黃藥材中總藤黃酸含量

紀(jì) 娟1，2，裴來良2，3，王 斌1，2，程 卉1，胡海霞2，3，王效山2，3，周 安1，2

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)科研實驗中心，安徽 合肥 230038；2.安徽省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，安徽 合肥 230031；3.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230031）

目的 建立藤黃藥材中總藤黃酸含量的測定方法。方法 采用紫外分光光度法，以新藤黃酸為對照品，在360nm處對藤黃樣品中的總藤黃酸進(jìn)行含量測定。結(jié)果 新藤黃酸濃度在5.304～26.520mg／L范圍內(nèi)，與吸收度的線性關(guān)系良好（r＝0.999 5），平均加樣回收率為98.53%（RSD＝0.21%，n＝9）。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于藤黃藥材的質(zhì)量控制。

藤黃藥材；新藤黃酸；藤黃酸；紫外分光光度法

藤黃系藤黃科植物藤黃（Garciniahanburyi Hook.f.）所分泌出的干燥樹脂，性寒、味酸、辛、澀、有毒，具破血散結(jié)、解毒、止血、殺蟲之功效，用于治療瘰癘、癰疸、癤腫等頑疾[1]。藤黃總酸制劑（包括注射劑和片劑）試用于臨床上治療多種惡性腫瘤，獲得一定療效[2]。藤黃中主要成分為藤黃酸、新藤黃酸為代表的橋環(huán)類化合物，迄今為止，已從藤黃藥材中分離得到數(shù)十種橋環(huán)類化合物[3－4]，該類化合物是藤黃抗腫瘤藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。藤黃提取物及其單體成分藤黃酸（圖1）、新藤黃酸（圖2）具有顯著的抗腫瘤活性[5－7]，且毒性低。

圖1 藤黃酸化學(xué)結(jié)構(gòu)式 圖2 新藤黃酸化學(xué)結(jié)構(gòu)式

目前藤黃中橋環(huán)類化合物的分析方法主要有薄層色譜法[8]、高效液相色譜法[9]、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[10]等，薄層色譜法和高效液相色譜法在測定總藤黃酸時一般只針對一種或幾種指標(biāo)性成分定量，不能反映藥材中總藤黃酸的含量。陳優(yōu)生等[11]采用二氯氧鋯顯色后比色法測定總藤黃酸含量，然而顯色反應(yīng)易受溫度和光照等諸多因素影響，造成穩(wěn)定性不理想。為了有效地控制藤黃藥材中總藤黃酸的質(zhì)量，本實驗擬根據(jù)藤黃中橋環(huán)類化合物在360nm左右均有紫外吸收特點，采用紫外分光光度法對藤黃中總藤黃酸進(jìn)行了測定，為藤黃藥材的質(zhì)量控制及開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

UV-2550型紫外分光光度計：日本島津公司；KQ-3000VDB超聲波清洗器：江蘇省昆山超聲儀器有限公司；BP2110電子分析天平：德國Sartorius。

3批不同的藤黃藥材由本課題組購于安徽亳州藥材市場（批號分別為20091136、20100528、20100702），均經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院彭華勝教授鑒定；新藤黃酸對照品由安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥物研究所提取分離，其純度經(jīng)高效液相色譜面積歸一化法測定其純度為99.9%；其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 新藤黃酸對照品儲備液的制備：精密稱取干燥至恒質(zhì)量的新藤黃酸對照品26.52mg置于100 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得265.2g／ml對照品儲備液。

2.1.2 供試品溶液的制備：將藤黃藥材粉碎，過40目篩，干燥至恒質(zhì)量。取藤黃粉末30mg，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲提取10min，放冷至室溫，補足甲醇至刻度。精密移取1ml置于10ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，即得供試品溶液。

2.2 測定波長的選擇 將“2.1.1”項下新藤黃酸對照品儲備液用甲醇稀釋10倍和“2.1.2”項下供試品溶液一起用紫外分光光度計進(jìn)行掃描，測得對照品和供試品在200～500nm范圍內(nèi)的吸收光譜（見圖3）。圖3表明，藤黃藥材和新藤黃酸對照品在360 nm波長處均有強吸收，故采用360nm處吸收波長測定總藤黃酸含量。

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取265.2g／ml新藤黃酸對照品儲備液10ml置100ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。精密移取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml稀釋液于10ml容量瓶中，分別標(biāo)記為1、2、3、4、5號溶液，用甲醇稀釋至刻度，得濃度為5.30、10.61、15.91、21.22、26.52g／ml系列溶液。以甲醇為空白，測定各系列溶液在360nm下的吸光度。以新藤黃酸濃度（c）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程為：A＝0.024 88c-0.000 36，r＝0.999 5（n＝3）。結(jié)果表明，新藤黃酸對照品溶液吸收度與濃度在5.30～26.52g／ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖2 新藤黃酸對照品（A）和藤黃藥材供試品（B）的紫外吸收光譜圖

2.4 精密度測定 將“2.3”項下1、3、5號新藤黃酸對照品溶液作為低、中、高3個質(zhì)量濃度，分別測其吸光度，各自連續(xù)測5次，考察儀器精密度，結(jié)果RSD值均低于0.4%，說明該方法精密度良好，符合含量分析要求。

2.5 穩(wěn)定性測定 精密稱取一批藤黃藥材粉末10.44、19.96、30.40mg，按“2.1.2”項下方法操作得藤黃藥材低、中、高3個質(zhì)量濃度溶液，于室溫中放置0、1、3、5、7、9h，分別測定吸光度，考察樣品穩(wěn)定性。見表1。結(jié)果表明藤黃供試品液在9h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 藤黃供試品液穩(wěn)定性測定結(jié)果

2.6 重復(fù)性測定 精密稱取質(zhì)量分別為30.86、29.68、29.60、29.04、30.28、29.82mg同一批藤黃藥材（批號20100528）6份，按“2.1.2”項下同法制備樣品溶液，在波長360nm處測定吸光度，按照“2.3”項線性方程計算總藤黃酸含量，考查重復(fù)性，結(jié)果平均含量為70.2%，RSD為1.6%（n＝6）。結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率測定 精密稱取已知含量藤黃藥材19.96mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，超聲提取10min，放冷至室溫，補足甲醇至刻度。從中精密移取1.0ml溶液，同樣移取9次，分別置于9個10ml容量瓶。將9個容量瓶平均分為3組，分別加入新藤黃酸對照品溶液（26.52 g／ml）4.5、5.5、6.5ml，加甲醇定容。分別測定吸光度，計算加樣回收率，RSD值為0.21%。見表2。結(jié)果表明該方法具有較好的加樣回收率。

2.8 含量測定 取3批藤黃藥材（批號20091136）粉末各適量，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，根據(jù)線性回歸方程得出樣品的總藤黃酸含量。見表3。結(jié)果表明3批藤黃藥材的總藤黃酸含量相對較高。

表2 加樣回收率測定結(jié)果（n＝9）

3 討論

在藥材提取過程中，分別考察了提取5、10、15、20min對總藤黃酸含量提取的影響，發(fā)現(xiàn)提取10 min后含量變化不大，所以選擇10min作為提取總藤黃酸的時間。早期藤黃藥材質(zhì)量控制研究多以薄層色譜及高效液相色譜為主，操作繁瑣，選取指標(biāo)往往難以代表整個藤黃藥材中總藤黃酸含量。本課題組前期通過高效液相色譜二極管陣列檢測器與電噴霧質(zhì)譜聯(lián)用分析了藤黃中橋環(huán)類化合物，獲得了相應(yīng)化合物的最大紫外吸收和分子量信息，結(jié)果表明藤黃中橋環(huán)類化合物在波長360nm處均有最大紫外吸收[10]。本實驗根據(jù)該類化合物紫外吸收特點，采用紫外分光光度法建立了藤黃中總藤黃酸含量的測定方法，從實驗結(jié)果來看，此方法準(zhǔn)確可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可作為藤黃藥材中總藤黃酸含量測定方法。

表3 藤黃樣品中總藤黃酸含量測定（n＝3）

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Determination of Total Gambogic Acid in Gamboge by Ultraviolet Spectrophotometry

JIJuan1，2，PEILai-liang2，3，WANGBin1，2，CHENGHui1，HUHai-xia2，3，WANGXiao-shan2，3，ZHOUAn1，2
（1.ExperimentalResearchCenter，AnhuiUniversityofChineseMedicine，AnhuiHefei230038，China；2.Key LaboratoryofChineseMedicineResearchandDevelopmentinAnhuiProvince，AnhuiHefei230031，China；
3.SchoolofPharmacy，AnhuiUniversityofChineseMedicine，AnhuiHefei230031，China）

Objective To establish a method for determining the content of total gambogic acid in gamboge.Methods With gambogenic acid as a reference substance，ultraviolet spectrophotometry was adopted to determine the content of total gambogic acid in gamboge sample at a wavelength of 360nm.Results The concentration of gambogenic acid showed a good linear relationship with optical density within 5.304-26.520mg／L （r＝0.999 5），and the average recovery rate was 98.53% （RSD＝0.21%，n＝9）.Conclusion The determination method is simple，accurate，and repeatable and can be used for the quality control of gamboge.

gamboge；gambogenic acid；gambogic acid；ultraviolet spectrophotometry

R927.2

A

10.3969／j.issn.2095-7246.2014.02.032

紀(jì)娟（1989-），女，碩士研究生

周安，anzhou0901＠163.com

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