牛黃解毒片中砷鹽含量控制標(biāo)準(zhǔn)研究

摘要：目的 建立牛黃解毒片中微量砷的測(cè)定方法。方法 采用微波消解樣品，氫化物原子吸收法測(cè)定砷含量。結(jié)果 本法檢出限為0.035μg/Kg，變異系數(shù)CV=4.6%，回收率為90～106%。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)單快速，靈敏度高，可作為中藥制劑牛黃解毒片中微量砷的測(cè)定方法。

關(guān)鍵詞：微波消化； 氫化物原子吸收法； 中藥制劑；牛黃解毒片； 砷

砷是一種有害的重金屬元素，經(jīng)常攝入微量的砷化合物，會(huì)嚴(yán)重危害人們的身體健康，因此砷是中藥制劑衛(wèi)生質(zhì)量控制中的一種重要元素。尤其是對(duì)于含有雄黃類制劑的中成藥，砷鹽檢查尤為必要。牛黃解毒片是常用中成藥之一 ，具有鎮(zhèn)驚安神，祛風(fēng)豁痰之功效。收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部[1]，其組方含有的雄黃成分，藥典工藝中要求直接加入雄黃粉末，混勻壓片而成，牛黃解毒片原標(biāo)準(zhǔn)中只收載了三氧化二砷的檢查項(xiàng)目，以砷斑顏色深淺進(jìn)行質(zhì)量控制，未對(duì)砷斑作具體含量限度要求。為了保證人民用藥安全有效、完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立砷含量的測(cè)定方法尤為必要[2，3]。本文對(duì)制劑中的雄黃成分進(jìn)行了定量分析，對(duì)可溶性砷 （AS2O3 ）做了檢查，介紹如下。

1儀器、試劑與樣品

1.1 儀器 由美國(guó)熱電公司生產(chǎn)的SOLAAR-S4原子吸收光度計(jì)以及VP90氫化物反應(yīng)器；由上海新儀微波化學(xué)科技有限公司生產(chǎn)的MK-Ⅲ型壓力自行控制微波密閉消解系統(tǒng)。

1.2 試劑 工藝超純的HNO3；HCl、H2O2為純優(yōu)級(jí)；硼氫化鈉、抗壞血酸、NaOH、碘化鉀全部為分析純；砷的標(biāo)準(zhǔn)液來(lái)自上海計(jì)量測(cè)試技術(shù)研究所。

1.3 樣品 實(shí)驗(yàn)樣品牛黃解毒片由菏澤健民藥業(yè)有限公司提供。批號(hào)：130206-130216

2 分析步驟

2. 1溶液標(biāo)本的制備 取牛黃解毒片適量，研碎，精確稱取0.5～1.0g，于50ml溶樣杯中，加入硝酸10.0 ml，進(jìn)行加熱，緩慢升溫到達(dá)150℃。棕黃色煙霧完全散發(fā)后，取下稍冷，加入35%的 H2O21.0ml，加熱15min，冷至室溫，進(jìn)行密封，并將標(biāo)本溶液樣品杯置于消解罐內(nèi)，按消解爐的操作步驟進(jìn)行由2檔～4檔的壓力調(diào)節(jié)（2.0MPa），消解30min后取出（若消解未完全消失，可適當(dāng)進(jìn)行時(shí)間的延長(zhǎng)）。冷卻至室溫，打開杯蓋，進(jìn)行160℃的加熱并蒸發(fā)至液體僅剩0.6ml左右，再用10ml去離子水分2次進(jìn)行溶樣杯的沖洗，每次均放置在160℃的電熱板上進(jìn)行加熱并蒸發(fā)至液體僅剩0.6ml左右，冷卻后將樣品移至50ml聚丙烯量瓶中，加入5ml 30%碘化鉀-4%抗壞血酸混合液，再加入5ml鹽酸，用水進(jìn)行定容到達(dá)刻度，搖勻，100℃水浴加熱15min，空白試劑制法同上。

2. 2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 抽取1.000g/L濃度的適量砷標(biāo)準(zhǔn)液備用，用0.5% HNO3稀釋到濃度為100.0μg/L的砷標(biāo)液，分別吸取0.0、0.25、0.50、0.75，1.0、2.0ml的砷標(biāo)液置于25ml量瓶中，加進(jìn)30%碘化鉀～4%抗壞血酸混合液2.5ml，再加入2.5 ml鹽酸，用水稀釋至刻度，100℃水浴加熱10min，得到濃度分別為0.0、1.0、2.0、4.0、8.0μg/L的砷標(biāo)準(zhǔn)液。

2. 3測(cè)定 原子吸收光度工作系數(shù)為：波長(zhǎng)測(cè)定值為192.8nm，燈電流 10mA，狹縫（通帶）1.0nm，關(guān)閉背景校正。氫化物的條件：氫化物模式指的是火焰進(jìn)行加熱，火焰是乙炔～空氣，燃?xì)饬繛?.8L/min，燃燒高度在10.0～15.0mm之間，穩(wěn)定延時(shí)100s，達(dá)到基線延時(shí)80s，氬氣流量為180ml/min。用10%HCl作為載液，還原劑為0.8%硼氫化鈉（用0.2% NaOH溶液穩(wěn)定），在氫化物發(fā)生器上分別進(jìn)行砷標(biāo)準(zhǔn)液以及樣品液的吸光度的測(cè)定，使用線性最小二乘法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)測(cè)得樣品中砷的含量。

3結(jié)果與討論

3.1微波消化條件的選擇 中藥制劑中，少的只有幾味藥材，多的則有幾十味藥材，成分復(fù)雜并且不易分解完全，這給樣品的消化處理帶來(lái)了較大的困難，尤其是在消化的過(guò)程中樣品的基體組成以及被測(cè)元素的性質(zhì)，分解效果，反應(yīng)后得出的不同可溶性鹽，所用酸引入空白值，反應(yīng)的速率等情況來(lái)均全面考慮。微波樣品制備中使用的HNO3，HCl，磷酸，H2O2，高氯酸，H2SO4，氫氟酸作為溶劑，以增加有機(jī)物質(zhì)的樣品氧化劑氧化，則必須選擇合適的混酸基，混合酸的合理比例，因?yàn)槊總€(gè)酸是唯一有效的單個(gè)矩陣的分解，所述酸的混合效果可以是互補(bǔ)。在溶劑中形成與另一種酸的復(fù)合樣品的過(guò)程中有效溶解。實(shí)驗(yàn)中所用的低空白值作為超純硝酸和過(guò)氧化氫的消化過(guò)程中添加了一個(gè)潔凈樣品的消解溶劑，砷鹽的含量作為標(biāo)準(zhǔn)方法，以提高控制。

3.2選擇預(yù)還原劑 經(jīng)氫化物發(fā)生方法測(cè)定的砷元素為三價(jià)砷，因此須先將五價(jià)的砷還原到三價(jià)。相關(guān)文獻(xiàn)資料記載[4]，本研究選擇的預(yù)還原劑為30%碘化鉀～4%抗壞血酸混合溶液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)以30%碘化鉀～4%抗壞血酸混合溶液為預(yù)還原劑，加入10.0%效果佳。

3.3 硼氫化鈉濃度及酸的影響 反應(yīng)體系中的硼氫化鈉的濃度和酸度是影響氫化物反應(yīng)的重要因素。硼氫化鈉的濃度對(duì)砷的測(cè)定影響較大，如果硼氫化鈉濃度太高，反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生大量的氫氣對(duì)砷產(chǎn)生稀釋作用降低其靈敏度；如果硼氫化鈉濃度太低，氫化物會(huì)發(fā)生不完全反應(yīng)降低靈敏度，結(jié)果證實(shí)硼氫化鈉的濃度為1.0%時(shí)砷的靈敏度佳。氫化物反應(yīng)適宜在酸性條件下進(jìn)行，一般常用HCl或H2SO4來(lái)調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的酸度，本組實(shí)驗(yàn)選用HCl，試驗(yàn)表明，HCl濃度為10%時(shí)，反應(yīng)條件最佳，砷靈敏度佳。

3.4 共存陽(yáng)離子的影響 通過(guò)使用氬氣進(jìn)行砷化氫的載出，在溶液中殘留干擾物質(zhì)，因此共存的陽(yáng)離子間相互影響較小。對(duì)于1.5μg /L砷，10mg/L的銅離子、鐵離子、鎳離子、鉛離子、鎘離子及鈣離子對(duì)測(cè)定影響幾乎為零[4]。

3.5 共存酸的影響 如果樣品消化即進(jìn)行測(cè)量，未趕酸，殘留的HNO3會(huì)讓碘析出，污染測(cè)定系統(tǒng)，試驗(yàn)會(huì)終止。因此，微波消融后，必須要將消融液中殘留的HNO3趕出，否則會(huì)造成結(jié)果誤差。在測(cè)定液中HNO3濃度小于0.06mol/L時(shí)，對(duì)測(cè)定產(chǎn)生的影響小，如果大于此濃度，測(cè)定結(jié)果會(huì)產(chǎn)生較大的誤差[5]。

3.6 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 濃度在0～8.00μg/L范圍內(nèi)，按照吸光度的不同對(duì)砷的含量進(jìn)行測(cè)定并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用最小二乘法算出回歸方程為：Y=0.0244X+0.0042，γ=0.9934，表示出其線性關(guān)系佳。

3.7 精密度檢測(cè)試驗(yàn) 取同一批牛黃解毒片 （牛黃解毒片，130206批），按照供試品溶液進(jìn)行平行制備，共計(jì)6份，在氫化物的發(fā)生器中分別進(jìn)行砷含量的測(cè)定，見(jiàn)表1。

砷的含量平均值為0.030 mg/kKg，標(biāo)準(zhǔn)差值為0.0049，變異系數(shù)為4.6%。

3.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品（牛黃解毒片，130206批）0.4g，分別加入已知濃度的對(duì)照品溶液，同供試品溶液制備方法處理樣品并測(cè)定砷的含量，見(jiàn)表2。

3.9 檢出限 計(jì)算出測(cè)定了10次的標(biāo)準(zhǔn)空白液的3倍標(biāo)準(zhǔn)差，檢出極限值為0.035μg/kg。

4結(jié)論

本文建立了微波消化-氫化物原子吸收的方法測(cè)定中藥制劑牛黃解毒片中砷含量，方法簡(jiǎn)便快捷，靈敏度高，線性關(guān)系較好，精密度較高，回收率達(dá)痕量測(cè)定值，為中藥制劑牛黃解毒片中測(cè)定砷含量提供了一種行之有效的方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊志強(qiáng)，李鳳艷，李慶杰等.砷斑法測(cè)定砷含量[J].北京石油化工學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，13（2）：57-60.

[2]徐智，俞珊珊，黃可龍等.牛黃解毒片中不同單味組分對(duì)雄黃可溶性砷含量影響的比較研究[J].中國(guó)生化藥物雜志，2009，30（2）：121-123.

[3]張建平.幾種中成藥中砷的含量和形態(tài)分析及其體外生物可利用度研究[D].廈門大學(xué)，2008.

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[5]董菊.牛黃解毒片的遺傳毒性研究及其方藥配伍減毒作用初探[D].南京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.編輯/王海靜